新的三氟甲基-*二唑衍生物及它们在治疗疾病中的应用

摘要

本发明涉及新的式(I)的三氟甲基-二唑衍生物及其可药用盐，其中所有变量如说明书中所定义，涉及其药物组合物、其药物组合和它们作为药物的应用、特别是用于通过抑制HDAC4治疗神经变性、肌肉萎缩或糖尿病/代谢综合征的应用。

说明书

发明领域

本发明涉及新的三氟甲基-二唑衍生物及其可药用盐、其药物组合 物、其药物组合、和它们作为药物的应用、特别是用于通过抑制HDAC4 来治疗神经变性、肌肉萎缩或糖尿病/代谢综合征的应用。

发明背景

亨廷顿病(HD)为常染色体显性遗传的神经变性疾病，发病率为万分之 一(在美国约有30000名患者)。HD并不局限于任何特定种群、种族或族裔， 男性和女性均同样受到影响。HD在中年(30-50岁)发病，由于智能的逐渐 缺失和精神问题的发展出现抽搐以及四肢、躯干和面部的活动失控。该疾 病持续10-25年而无法缓解直至生命终结。

该疾病的起因是CAG重复片段在编码亨廷顿蛋白的基因的外显子1中 重复扩展。该扩展导致含有在氨基末端内聚谷氨酰胺重复区的突变蛋白 (mHTT)的产生。mHTT及其蛋白水解的N-末端碎片在细胞内聚合物中积 聚，干扰了细胞的转录机制。

转录失调在HD中是第一个可发现的变化，它在人类和动物相关疾病中 都可以观察到。转录活性的调节可以通过抑制组蛋白脱乙酰基酶而实现， 该酶是包括11种同工型的酶家族，还可以进一步分为下列亚家族： HDAC1，2，3，8(I类)；HDAC4，5，7，9(IIa类)；HDAC6，10(IIb类)和HDAC11 (IV类)。抑制HDAC可以恢复平衡，在果蝇和小鼠的亨廷顿病理学实验中 已经发现全-HDAC抑制剂(SAHA)的有效性(Hockly等，PNAS(2003) 100：2041；Kazantsev AG，Thompson LM.，Nat Rev Drug Discov.(2008) 7：854-68)。因为SAHA是所有HDAC I类、IIa+IIb类和IV类亚家族的非 选择性抑制剂，所以不可能确定通过调节哪一类同工型/亚家族而获得有益 的作用。

最近，通过采用R6/2小鼠(一种模仿人类HD病理的基因设计小鼠)的遗 传杂交敲除各个同工型从而对IIa类亚家族成员(HDAC4，5，7，9)的各自的作 用进行了研究(Mielcarek M.等，J.Neurology，Neurosurgery and  Psychiatry(2009)79：A8)。获得的HDAC5、HDAC7或HDAC9被敲除的 双转基因小鼠品系没有显示R6/2显型的任何改善，而HDAC4表达水平的降 低提高了R6/2小鼠的运动损伤亚型。

因此，HDAC4抑制提供了亨廷顿病药物干预和治疗的可能的机会。

IIa类HDAC也可以在骨骼肌中表达，与快速抽搐肌肉相比，它在慢速 抽搐肌肉中的表达水平较低。HDAC4、5和9的四种等位基因的任何组合的 缺失导致纤维基因表达更为缓慢，这进一步导致运动耐力的增强(Potthoff 等，J.Clin.Invest.(2007)117，459-2467)。另外，去神经后，在肌肉中 的HDAC4基因表达高度上调(Bodine等，Science(2001)294，1704-1708； Cohen等，JBC(2007)282(46)：33752-9)。HDAC4能够抑制FGFBP1的 表达，后者能够与FGF7/10/22相互作用，促进神经再生(Williams等，Science (2009)326，1549-1554)。当去神经时，HDAC4表达的增加也能够抑制 Dach2的表达，这进一步导致了肌细胞生成素表达的增加。肌细胞生成素 能够上调肌肉萎缩所需要的两种E3泛素连接酶的表达。缺乏HDAC4(肌肉 特定敲除)或HDAC5的去神经小鼠显示了30％的肌肉重量丢失，与之相比， WT小鼠有50％的肌肉重量丢失，而HDAC4和HDAC5都缺乏的小鼠的肌肉 重量仅有10％的降低(Moresi等，Cell(2010)143，35-45)。

因此，HDAC4的抑制也提供了用于治疗肌肉萎缩的可能的方法。

另外，最新的公开显示了HDAC IIa类在调节葡萄糖体内平衡中的关键 作用(Mihaylova MM等，Cell(2011)145，607-21)。在小鼠高血糖症模型 (ob/ob小鼠)中，采用shRNAs对抗HDAC4、5和7小鼠)使得IIa类HDAC减 少显示能够降低血糖并且能够增加糖原储备。此外，II型糖尿病小鼠模型 中IIa类HDAC的减少显著改善了高血糖症。

因此，能够降低HDAC4活性的药理学成分的使用也提供了用于治疗糖 尿病/代谢综合征的有效的治疗干预方法。

本发明涉及新的具有IIa类-选择性HDAC4抑制活性的三氟甲基-二 唑衍生物及其医学用途，特别是用于治疗亨廷顿病、肌肉萎缩和糖尿病/ 代谢综合征。

发明概述

在本发明的第一个方面中，因此提供了式(I)化合物或其可药用盐

其中

X₁表示N或CR¹；

X₂表示N或CR²；

X₃表示N或CH；

X₄表示N或CH；

且其中X₁、X₂、X₃和X₄中至少一个是N，且X₁、X₂、X₃和X₄中不 超过两个是N；

R¹和R²独立地表示氢、氯或C_1-3烷基；

L₁和L₂独立地表示键或-C(＝O)-；

R³表示氢或C_1-3烷基；

n表示0、1、2或3；

R⁴和R⁵独立地在每次出现时表示氢、氟或C_1-3烷基；

R⁶表示氢、羟基、氟、-NR⁷R⁸、苯基或包含1、2、3或4个独立地选 自N、O和S的杂原子的5-或6-元的杂芳基，且其中所述苯基或杂芳基任 选地被1、2、3、4或5个取代基所取代，所述取代基可以是相同的或不同 的、选自R⁹；

R⁷和R⁸独立地表示氢、C_1-4烷基或苄基，其中的苯环任选地被1、2、 3、4或5个取代基所取代，所述取代基可以是相同的或不同的、选自R⁹； 且

R⁹表示氰基、氨基、卤素、羟基、C_1-4烷基、C_2-4链烯基、C_2-4炔基、 卤素C_1-4烷基、羟基C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基氨基、二C_1-4烷基 氨基、C_1-4烷基羰基、C_1-4烷氧基羰基、氨基羰基、氨基羰基C_1-4烷基、 C_1-4烷基氨基羰基、二C_1-4烷基氨基羰基或C_1-4烷氧基羰基氨基。

定义

如本文使用的术语“C_1-4烷基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链 烃链基团，其中没有不饱和性，具有1至4个碳原子，与分子的其余部分通 过单键连接。术语“C_1-3烷基”被相应地解释。C_1-4烷基的实例包括但不限于 甲基、(R)-甲基、乙基、正-丙基、1-甲基乙基(异-丙基)、正-丁基、正-戊基 和1，1-二甲基乙基(叔-丁基)。

如本文使用的术语“C_2-4链烯基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支 链的烃链基团，其包含至少一个双键，具有2至4个碳原子，与分子的其 余部分通过单键连接。C_2-4链烯基的实例包括但不限于乙烯基、丙-1-烯基 和丁-1-烯基。

如本文使用的术语“C_2-4炔基”是指仅由碳和氢原子组成的直链或支链 烃链基团，它含有至少一个三键，具有2至4个碳原子，与分子的其余部 分通过单键连接。C_2-4炔基的实例包括但不限于乙炔基、丙-1-炔基和丁-1- 炔基。

如本文使用的术语“C_1-4烷氧基”是指式-OR_a的基团，其中R_a是如上文 通用性定义的C_1-4烷基。C_1-4烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、 丙氧基、异丙氧基、丁氧基和异丁氧基。

如本文使用的术语“C_1-4烷基羰基”是指式-C(＝O)-R_a的基团，其中R_a为如上文所定义的C_1-4烷基。

如本文使用的术语“C_1-4烷氧基羰基”是指式-C(＝O)-O-R_a的基团，其中 R_a是如上文所定义的C_1-4烷基。

如本文使用的术语“C_1-4烷氧基羰基氨基”是指式-NH-C(＝O)-O-R_a的 基团，其中R_a是如上文所定义的C_1-4烷基。

如本文使用的术语“羟基C_1-4烷基”是指如上文定义的C_1-4烷基，其中 C_1-4烷基的氢原子之一被OH替代。羟基C_1-4烷基的实例包括但不限于羟 基-甲基、2-羟基-乙基、2-羟基-丙基和3-羟基-丙基和4-羟基-丁基。

如本文使用的术语“C_1-4烷基氨基”是指式-NH-R_a的基团，其中R_a是 如上文所定义的C_1-4烷基。

如本文使用的术语“二C_1-4烷基氨基”是指式-N(R_a)-R_a的基团，其中各 R_a是C_1-4烷基，其可以是相同的或不同的，如上文所定义。

如本文使用的术语“氨基羰基”是指式-C(＝O)-NH₂的基团。

如本文使用的术语“氨基羰基C_1-4烷基”是指式-R_a-C(＝O)-NH₂的基团， 其中R_a是如上文所定义的C_1-4烷基。

如本文使用的术语“C_1-4烷基氨基羰基”是指式-C(＝O)-NH-R_a的基团， 其中R_a是如上文所定义的C_1-4烷基。

如本文使用的术语“二C_1-4烷基氨基羰基”是指式-C(＝O)-N(R_a)-R_a的 基团，其中各R_a是C_1-4烷基，其可以是相同的或不同的，如上文所定义。

“卤素”是指溴、氯、氟或碘。

如本文使用的术语“卤素C_1-4烷基”是指被一或多个如上文所定义的卤 素基团取代的如上文所定义的C_1-4烷基。卤素C_1-4烷基的实例包括但不限 于三氟甲基、二氟甲基、氟甲基、三氯甲基、2，2，2-三氟乙基、1-氟甲基-2- 氟乙基、3-溴-2-氟丙基和1-溴-甲基-2-溴乙基。

如本文使用的术语“杂芳基”是指5-或6-元芳族单环环基团，其包含1、 2、3或4个独立选自氮、氧和硫的杂原子。所述杂芳基可以通过碳原子或 杂原子键合。杂芳基的实例包括但不限于呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡唑 基、咪唑基、噻唑基、异噻唑基、唑基、异唑基、三唑基、四唑基、 吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基或吡啶基。

除非本文中另有说明或者上下文中有明确的矛盾，如本文使用的单数 形式的术语、“所述”和本发明中(特别是权利要求中)使用的相似的术语应 当涵盖单数和复数两种形式。本文中提供的任何和所有实例或示例性语言 (如“例如”)的使用应当仅仅是为了更好地阐述本发明，不是为了对所要求 保护的本发明的范围加以限定。

术语“本发明化合物”(除非另有明确说明)是指式(I)或(Ia)化合物、实施 例的各化合物、所述化合物的可药用的盐和/或所述化合物的水合物或溶剂 化物以及所有的立体异构体(包括非对映异构体和对映异构体)、互变异构 体和同位素(包括氘)标记的化合物。术语“本发明的活性剂”旨在与“本发明 化合物”具有相同的意义。

本文使用的术语“抑制”指减少或抑制给定状况、症状或障碍或疾病， 或者指显著减少生物活性或过程的基线活性。

如本文使用的术语“代谢综合征”是用于描述包括下列组合的病症的公 认的临床术语：II型糖尿病、糖耐量受损、胰岛素抗性、高血压、肥胖、 腹围增加、高甘油三酯血症、低HDL、高尿酸血症、高凝状态和/或微量 白蛋白尿(microalbuminemia)。美国心脏协会(The American Heart  Association)公布了代谢综合征诊断指南，Grundy，S.等，(2006)Cardiol. Rev.第13卷，第6期，第322-327页。

如本文使用的术语“可药用载体”包括任何和所有溶剂、分散介质、包 衣材料、表面活性剂、抗氧化剂、防腐剂(例如抗菌剂、抗真菌剂)、等渗 剂、吸收延迟剂、盐、防腐剂、药物、药物稳定剂、粘合剂、赋形剂、崩 解剂、润滑剂、增甜剂、矫味剂、染料等以及它们的组合，它们是那些本 领域的技术人员众所周知的(参见，例如，雷明顿药物科学(Remington′s  Pharmaceutical Sciences)，第18版，Mack Printing Company，1990，第 1289-1329页)。除了与活性成分不相容的那些常规载体外，其他常规载体 均可以用于治疗或药物组合物中。

如本文使用的术语任何具体疾病或障碍的“预防”是指在疾病或障碍的 任何症状变得明显之前向个体施用本发明化合物。

如本文使用的术语“个体”是指动物。所述动物通常为哺乳动物。个体 也是指例如灵长类(例如人类，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、犬、 猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，所述个体为灵长类。 在另一个实施方案中，所述个体为人类。

本文中使用的“需要”治疗的个体是指通过所述治疗此类个体在生物学 上、医学上或生活质量方面能够受益。

术语本发明化合物的“治疗有效量”是指能够引起个体的生物学或医学 响应的本发明化合物的量，所述响应例如降低或抑制酶或蛋白质的活性， 或者改善症状、减轻障碍、阻碍或延迟疾病进展或预防疾病等。在一个非 限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指当向个体施用时能够有效地发 挥下列作用的本发明化合物的量：(1)至少部分减轻、抑制、预防和/或改善 (i)由HDAC4介导的或(ii)与HDAC4有关的或(iii)其特征在于HDAC4活性 (正常或异常)的障碍或疾病；或(2)降低或抑制HDAC4的活性。在另一个 非限制性实施方案中，术语“治疗有效量”是指，当施用给细胞或组织或非 细胞生物材料或介质时，能够有效地至少部分地降低或抑制HDAC4活性 的本发明化合物的量。上面HDAC4的实施方案中所描述的术语“治疗有效 量”的意义也可以以相同的意义应用于其它相关蛋白/肽/酶，例如组蛋白脱 乙酰基酶家族的其它成员。

在一个实施方案中，如本文使用的术语任何疾病或障碍的“治疗”是指 缓解疾病或障碍(即减缓或中止或减轻疾病或其至少一种临床症状的发 展)。在另一个实施方案中，“治疗”是指减轻或缓解至少一种机体参数，包 括那些患者可能无法察觉的参数。在另一个实施方案中，“治疗”是指调节 疾病或障碍，包括机体上的(例如稳定可识别症状)、生理学上的(例如稳定 机体参数)，或者它们两者。

发明详述

本发明提供了化合物和其药物组合物，其可用于治疗或预防通过抑制 HDAC4而调节的疾病、病症和/或障碍。

实施方案1：如上文所定义的式(I)化合物或其可药用盐。

实施方案2：依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其中X₁表示N； X₂表示CR²；X₃表示N；且X₄表示CH。

实施方案3：依据实施方案2的化合物或其可药用盐，其中R²表示氢，

实施方案4：依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其中X₁表示N； X₂表示N；X₃表示CH；且X₄表示CH。

实施方案5：依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其中X₁表示 CR¹；X₂表示CR²；X₃表示N；且X₄表示CH。

实施方案6：依据实施方案5的化合物或其可药用盐，其中R¹和R² 均表示氢。

实施方案7：依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其中X₁表示N； X₂表示CR²；X₃表示CH；且X₄表示CH。

实施方案8：依据实施方案7的化合物或其可药用盐，其中R²表示氢 或氯。

实施方案9：依据实施方案7的化合物或其可药用盐，其中R²表示氯。

实施方案10：依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其中X₁表示 CR¹；X₂表示CR²；X₃表示N；且X₄表示N。

实施方案11：依据实施方案10的化合物或其可药用盐，其中R¹和R²均表示氢。

实施方案12：依据实施方案1的化合物或其可药用盐，其中X₁表示 CR¹；X₂表示N；X₃表示N；且X₄表示CH。

实施方案13：依据实施方案12的化合物或其可药用盐，其中R¹表示 氢。

实施方案14：依据实施方案1至13中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中L₁表示键。

实施方案15：依据实施方案1至13中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中L₁表示-C(＝O)-。

实施方案16：依据实施方案1至15中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R³表示氢。

实施方案17：依据实施方案1至15中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R³表示甲基。

实施方案18：依据实施方案1至17中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中L₂表示键。

实施方案19：依据实施方案1至17中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中L₂表示-C(＝O)-。

实施方案20：依据实施方案1至19中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中n表示1。

实施方案21：依据实施方案1至19中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中n表示2。

实施方案22：依据实施方案1至21中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁴和R⁵独立地在每次出现时表示氢或C_1-3烷基。

实施方案23：依据实施方案1至19中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中n表示0。

实施方案24：依据实施方案1至23中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁶表示-NR⁷R⁸。

实施方案25：依据实施方案1至23中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁶表示苯基或包含1、2、3或4个独立地选自N、O和S的杂原 子的6-元的杂芳基，且其中所述苯基或杂芳基任选地被1、2或3个取代基 所取代，所述取代基可以是相同的或不同的、选自R⁹。

实施方案26：依据实施方案1至23中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁶表示苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，且其中所述苯 基或吡啶任选地被1、2或3个取代基所取代，所述取代基可以是相同的或 不同的、选自R⁹。

实施方案27：依据实施方案1至23中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁶表示苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，且其中所述苯 基或吡啶任选地被选自R⁹的单个取代基所取代。

实施方案28：依据实施方案1至24中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁷和R⁸独立地表示氢、甲基、乙基或苄基。

实施方案29：依据实施方案1至27中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁹表示氰基、氨基、卤素、羟基或C_1-3烷基。

实施方案30：依据实施方案1至27中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁹表示氰基、氨基或甲基。

实施方案31：依据实施方案1至23中的任意一项的化合物或其可药用 盐，其中R⁶表示氢、羟基或氟。

实施方案32：式(Ia)的依据实施方案1的化合物或其可药用盐，

其中

R²表示氢、氯或C_1-3烷基；

R³表示氢或C_1-3烷基；

L₂表示键或-C(＝O)-；

n表示0、1、2或3；

R⁴和R⁵独立地在每次出现时表示氢、氟或C_1-3烷基；

R⁶表示氢、羟基、氟、-NR⁷R⁸、苯基或包含1、2、3或4个独立地选 自N、O和S的杂原子的5-或6-元的杂芳基，且其中所述苯基或杂芳基任 选地被1、2、3、4或5个取代基所取代，所述取代基可以是相同的或不同 的、选自R⁹；

R⁷和R⁸独立地表示氢、C_1-4烷基或苄基，其中的苯环任选地被1、2、 3、4或5个取代基所取代，所述取代基可以是相同的或不同的、选自R⁹； 且

R⁹表示氰基、氨基、卤素、羟基、C_1-4烷基、C_2-4链烯基、C_2-4炔基、 卤素C_1-4烷基、羟基C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基氨基、二C_1-4烷基 氨基、C_1-4烷基羰基、C_1-4烷氧基羰基、氨基羰基、氨基羰基C_1-4烷基、 C_1-4烷基氨基羰基、二C_1-4烷基氨基羰基或C_1-4烷氧基羰基氨基。

实施方案33：式(Ia)的依据实施方案1的化合物或其可药用盐，

其中

R²表示氢或氯；

R³表示氢或C_1-3烷基；

L₂表示键；

n表示0、1、2或3；

R⁴和R⁵独立地在每次出现时表示氢、氟或C_1-3烷基；

R⁶表示苯基或包含1、2、3或4个独立地选自N、O和S的杂原子的 6-元的杂芳基，且其中所述苯基或杂芳基任选地被1、2或3个取代基所取 代，所述取代基可以是相同的或不同的、选自R⁹；且

R⁹表示氰基、氨基、卤素、羟基、C_1-4烷基、C_2-4链烯基、C_2-4炔基、 卤素C_1-4烷基、羟基C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基氨基、二C_1-4烷基 氨基、C_1-4烷基羰基、C_1-4烷氧基羰基、氨基羰基、氨基羰基C_1-4烷基、 C_1-4烷基氨基羰基、二C_1-4烷基氨基羰基或C_1-4烷氧基羰基氨基。

实施方案34：式(Ia)的依据实施方案1的化合物或其可药用盐，

其中

R²表示氢或氯；

R³表示氢或C_1-3烷基；

L₂表示键；

n表示1或2；

R⁴和R⁵独立地在每次出现时表示氢、氟或C_1-3烷基；

R⁶表示苯基、吡啶-2-基、吡啶-3-基或吡啶-4-基，且其中所述苯基或 吡啶任选地被1、2或3个取代基所取代，所述取代基可以是相同的或不同 的、选自R⁹；且

R⁹表示氰基、氨基、卤素、羟基或C_1-3烷基。

实施方案35：依据实施方案1的化合物，其选自：

N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)乙酰胺；

4-氰基-N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)苯甲酰胺；

N-甲基-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺；

N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-N-甲基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧 啶-2-胺；

N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺；

N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺；

N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(1-苯基丙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-甲基-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶 -2-胺；

N-(1-(吡啶-4-基)丙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶 -2-胺；

N-甲基-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 嘧啶-2-胺；

N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺；

N-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺；

N-(1-(苄基(甲基)氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟 酰胺；

N-(1-(二乙基氨基)-3-甲基丁-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 烟酰胺；

N-(1-(二乙基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺；

N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶酰 胺；

3-氯-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡 啶酰胺；

N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5- 甲酰胺；

N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-3-胺；

N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2- 胺；

N-苄基-3-氯-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

3-氯-N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

3-氯-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

3-氯-N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2- 胺；

3-氯-N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

3-氯-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡 啶-2-胺；

3-氯-N-(吡啶-2-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3-胺；

N-(1-苯基乙基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺；

N-(吡啶-4-基甲基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺；

N-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-三氟甲基-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3-胺；

N-(1-(苄基(甲基)氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟 酰胺；

及其可药用盐。

实施方案36：依据实施方案1的化合物，其选自：

N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)乙酰胺；

4-氰基-N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)苯甲酰胺；

N-甲基-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺；

N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-N-甲基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧 啶-2-胺；

N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺；

N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺；

(R)-N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

(R)-N-(1-苯基丙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-甲基-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶 -2-胺；

N-(1-(吡啶-4-基)丙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺；

N-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶 -2-胺；

N-甲基-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 嘧啶-2-胺；

(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟 酰胺；

N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺；

(S)-N-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺；

(R)-N-(1-(苄基(甲基)氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 烟酰胺；

(R)-N-(1-(二乙基氨基)-3-甲基丁-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3- 基)烟酰胺；

(R)-N-(1-(二乙基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟 酰胺；

(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡 啶酰胺；

(R)-3-氯-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 吡啶酰胺；

(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧 啶-5-甲酰胺；

N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-3-胺；

N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2- 胺；

N-苄基-3-氯-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

(R)-3-氯-N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2- 胺；

3-氯-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

3-氯-N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2- 胺；

3-氯-N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

3-氯-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡 啶-2-胺；

3-氯-N-(吡啶-2-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3-胺；

(R)-N-(1-苯基乙基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺；

(S)-N-(1-苯基乙基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺；

N-(吡啶-4-基甲基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺；

(R)-N-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-三氟甲基-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺；

(R)-N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3- 胺；

(R)-N-(1-(苄基(甲基)氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 烟酰胺；

及其可药用盐。

由于式(I)化合物中可能存在一或多个不对称碳原子，所以相应的式(I) 化合物可能以纯的光学活性形式或光学异构体混合物形式存在，例如外消 旋混合物形式。所有此类纯光学异构体及其所有混合物(包括外消旋混合物) 均为本发明的组成部分。

如本文使用的术语“异构体”是指具有相同的分子式但是原子排列和结 构不同的不同化合物。同样，如本文使用的术语“光学异构体”或“立体异构 体”是指本发明具体化合物可能存在的各种立体异构体，包括几何异构体。 应当理解，取代基可以连接在碳原子的手性中心上。术语“手性”是指与其 镜像分子对具有不重叠性的分子，而术语“非手性”是指与其镜像分子对具 有可重叠性的分子。因此，本发明包括化合物的对映异构体、非对映异构 体或外消旋体。“对映异构体”是一对立体异构体，它们彼此的镜像是不可 重叠的。一对对映异构体的1∶1的混合物为“外消旋”混合物。如果适当的 话，该术语用于指外消旋混合物。“非对映异构体”是具有至少两个不对称 原子的立体异构体，但是它们彼此不为镜像。绝对立体化学可以根据Cahn- Ingold-Prelog R-S系统规定。当化合物为纯的对映体时，每个手性碳处的 立体化学可以指定为R或S。绝对构型未知的被拆分化合物可以根据它们 在钠D线波长处使得平面偏振光旋转的方向(右旋或左旋)而指定为(+)或 (-)。本文中所述某些化合物包含一或多个不对称中心或轴，因此可以有对 映异构体、非对映异构体以及根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-的其它立 体异构形式。

根据选择的原料和工艺方法，所述化合物可以以可能的异构体形式之 一存在，或者以其异构体混合物的形式存在，例如根据不对称碳原子的数 目，可以是纯光学异构体或异构体混合物，例如外消旋体和非对映异构体 混合物。本发明应当包括所有此类可能存在的异构体，包括外消旋混合物、 非对映异构体混合物和光学纯形式。光学活性的(R)-和(S)-异构体可以采用 手性合成子或手性试剂制备，或者采用常规技术拆分。如果所述化合物含 有双键，则取代基可以是E或Z构型。如果所述化合物含有取代的环烷基， 则该环烷基取代基可以为顺式-或反式-构型。如果本文中绘制的包含一个 或多个手性中心的化合物结构中绘制了所述的立体化学，则意欲表示单一 的光学异构体。如果本文中绘制的包含一个或多个手性中心的化合物结构 中没有绘制所述的立体化学，则不意欲表示一个特定的旋光异构体，且绘 制的化学结构可表示任何旋光异构体或具有该结构的异构体的混合物，例 如外消旋混合物或非对映异构体混合物。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其 中所述化合物具有一个立构中心，且所述立体异构体为R构型。

在一个实施方案中提供了作为分离的立体异构体的实施例化合物，其 中所述化合物具有一个立构中心，且所述立体异构体为S构型。

在一个实施方案中提供了实施例化合物，其中所述化合物具有一个立 构中心，为外消旋混合物。

本发明的中间体和化合物也可能存在不同的互变异构形式，所有此类 形式均包含在本发明的范围内。术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指 不同能量的结构异构体，它们可以通过较低的能量屏障即可互相转化。例 如，质子互变异构体(也称为质子移变互变异构体)包括通过质子迁移的相 互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺的异构化。质子互变异构体的具体示例 是其中质子可以在两个环氮原子之间迁移的咪唑部分。化合价互变异构体 包括通过某些结合电子重排的相互转化。

任何获得的异构体混合物可以根据成分的物理化学性质的不同而分离 为纯的或基本上纯的几何或光学异构体、非对映异构体、外消旋体，例如 通过色谱和/或分步结晶的方法分离。

任何获得的终产物或中间体的外消旋物可以通过已知的方法拆分为光 学对映体，例如通过其非对映异构体盐的分离，获得光学活性的酸或碱， 释放出光学活性的酸性或碱性化合物。具体地讲，碱性部分因此可以用于 将本发明化合物拆分为其光学对映体，例如通过盐的分步结晶法，该盐由 光学活性的酸形成，所述酸例如酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二乙酰基酒 石酸、二-O，O′-对-苯甲酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸。外消 旋产物也可以通过手性色谱拆分，例如采用手性吸附剂的高效液相色谱 (HPLC)。

如本文使用的术语“盐”是指本发明化合物的酸加成盐。“盐”特别包括 “可药用的盐”。术语“可药用的盐”是指能够保持本发明化合物的生物学有 效性和性能的盐，它们通常不是生物学或其它方面所不可用的。由于存在 氨基或类似基团，本发明化合物能够形成酸盐。

在一个实施方案中，本发明涉及游离形式的本文所定义的式(I)或(Ia) 化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及盐形式的本文所定义的式(I)或 (Ia)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及酸加成盐形式的本文所定义 的式(I)或(Ia)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可药用的盐形式 的本文所定义的式(I)或(Ia)化合物。在另一个实施方案中，本发明涉及可 药用的酸加成盐形式的本文所定义的式(I)或(Ia)化合物。在另一个实施方 案中，本发明涉及游离形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案 中，本发明涉及盐形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案中， 本发明涉及酸加成盐形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案中， 本发明涉及可药用的盐形式的任何一种实施例化合物。在另一个实施方案 中，本发明涉及可药用的酸加成盐形式的任何一种实施例化合物。

可药用的酸加成盐可以采用无机酸和有机酸形成，例如乙酸盐、天冬 氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸 氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯茶碱盐(chlortheophyllonate)、 柠檬酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡萄酸盐、葡糖醛酸盐、 马尿酸盐、氢碘酸盐/碘化物、羟乙磺酸盐、乳酸盐、乳糖醛酸盐、十二烷 基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基 硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、十八酸盐、油酸盐、草 酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛 酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺 酸盐和三氟乙酸盐。

可以制备盐的无机酸包括例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以制备盐的有机酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、马来酸、 丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、 乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。可药用的碱加成盐可以采用无机和有 机碱制备。

本发明的可药用的盐可以通过常规化学法自酸性部分合成。通常，此 类盐可以通过使得这些化合物的游离碱形式与化学计算量的适当的酸反应 而制备。此类反应通常在水或有机溶剂中或者在它们两者的混合物中进行。 通常，如果适用的话，最好采用非水介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异 丙醇或乙腈。其它适当的盐的目录可以参考例如“雷明顿药物科学 (Remington′s Pharmaceutical Sciences)”，第20版，Mack Publishing  Company，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和使用 (Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use)”， Stahl and Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，德国，2002)。

另外，本发明的化合物(包括其盐)也可以以其水合物的形式获得，或 者包含用于其结晶的其它溶剂。本发明化合物由于自身特性可以或者通过 设计可以与可药用的溶剂(包括水)形成溶剂化物；因此，本发明应当包括 溶剂化物和非溶剂化物两种形式。术语“溶剂化物”是指由本发明的化合物 (包括其可药用的盐)与一或多个溶剂分子形成的分子复合物。此类溶剂分 子是那些制药领域中常用的，已知它们对于受体是无害的，例如水、乙醇 等。术语“水合物”是指其中溶剂分子为水的复合物。

含有能够作为氢键供体和/或受体的基团的本发明化合物(即式(I)化合 物)能够与适当的共结晶形成剂形成共结晶(co-crystal)。这些共结晶可以根 据已知的共结晶形成方法制备自式(I)化合物。所述方法包括研磨、加热、 共升华、共融，或者在结晶条件下使得式(I)化合物与共结晶形成剂在溶液 中接触，然后分离由此形成的共结晶。适当的共结晶形成剂包括那些描述 于WO2004/078163中的形成剂。因此，本发明还提供了含有式(I)化合物 的共结晶。

本发明化合物(包括其盐、水合物和溶剂化物)自身可以或者通过设计 可以形成多晶形物。

本文中给出的任何分子式也应当代表化合物的未标记形式以及同位素 标记形式。同位素标记的化合物具有本文所给出的分子式所表述的结构， 但是一或多个原子被具有选定原子质量或质量数的原子所替代。可以掺入 本发明化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位 素，分别例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹p、³²p、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。 本发明应当包括本文所定义的各种同位素标记化合物，例如那些其中存在 放射性同位素(例如³H和¹⁴C)的化合物或非放射性同位素(例如²H和¹³C) 的化合物。所述同位素标记化合物可以用于代谢研究(采用¹⁴C)、反应动力 学研究(采用例如²H或³H)、检测或成像技术(例如正电子发射断层扫描 (PET)或单光子发射计算机断层扫描(SPECT)，包括药物或底物组织分布研 究，或者用于患者的放射治疗。尤其特别的是，¹⁸F标记化合物可以特别令 人满意地用于PET或SPECT研究。同位素标记的式(I)化合物通常可以通 过本领域技术人员已知的常规方法制备，或根据下面实施例和制备方法中 所述类似工艺，采用适当的同位素标记试剂代替以前使用的非标记试剂制 备。

另外，由于其具有较好的代谢稳定性，采用较重同位素(特别是氘(即 ²H或D))的取代可以提供一定的治疗上的益处，例如增加体内半衰期或降 低剂量需要或者改善治疗指数。应当理解，在本文中，氘可以被视为是式 (I)化合物的取代基。所述较重同位素(特别是氘)的浓度可以根据同位素富 集因子定义。如本文使用的术语“同位素富集因子”是指指定同位素的同位 素丰度与天然丰度之间的比例。如果本发明化合物中的取代基用氘表示， 则该化合物中每个指定氘原子的同位素富集因子为至少3500(每个指定氘 原子52.5％的氘掺入)、至少4000(60％的氘掺入)、至少4500(67.5％的氘 掺入)、至少5000(75％的氘掺入)、至少5500(82.5％的氘掺入)、至少6000 (90％的氘掺入)、至少6333.3(95％的氘掺入)、至少6466.7(97％的氘掺入)、 至少6600(99％的氘掺入)或至少6633.3(99.5％的氘掺入)。

本发明的可药用的溶剂化物包括那些其中结晶溶剂是同位素取代的溶 剂，例如D₂O、d₆-丙酮、d₆-DMSO。

本发明化合物可以根据包含化学领域中众所周知的类似工艺的合成路 线合成，特别是根据本文说明书中所述路线合成。原料通常可以获自商业 途径，例如Sigma-Aldrich，或者可以采用本领域技术人员所熟知的方法容 易地制备(例如，下列文献中描述的通用方法：Louis F.Fieser和Mary  Fieser，有机合成试剂，第1-19卷，Wiley，纽约(1967-1999ed.)，或 Beilsteins Handbuch der organischen Chemie，4，Aufl.ed.Springer-Verlag， Berlin，包括附录(也可以通过Beilstein在线数据库获得)。

为了说明性的目的，下面描述的反应流程提供了本发明化合物以及关 键中间体的可能的合成路线。为了更详细地描述各个反应步骤，可以参见 下面的实施例章节。本领域技术人员应当理解，其它合成路线也可以用于 合成所述化合物。尽管在下面的流程和讨论中描述了具体的原料和试剂， 然而也可以容易地替换为其它原料和试剂以获得多种衍生物和/或反应条 件。另外，通过下述方法制备的多种化合物可以根据本公开采用本领域技 术人员公知的常规化学方法进一步修饰。

另一方面，本发明涉及游离形式或可药用盐形式的式(I)化合物的制备 方法，其包括：

(a)当L₁是键，L₂是-C(＝O)-且R³是氢时，将式(II)化合物

其中X₁、X₂、X₃和X₄如对式(I)所定义，与式(III)化合物反应，

其中n、R⁴、R⁵和R⁶如对式(I)所定义；

(b)当L₁是键，L₂是键且R³是氢时，将式(II)化合物

其中X₁、X₂、X₃和X₄如对式(I)所定义，与式(III)化合物反应，

其中n、R⁴、R⁵和R⁶如对式(I)所定义；

(c)当L₁是键，L₂是键且R³是氢时，将式(V)化合物

其中X₁、X₂、X₃和X₄如对式(I)所定义，与式(VI)化合物反应，

其中n、R⁴、R⁵和R⁶如对式(I)所定义；

(d)当L₁是-C(＝O)-且R³是氢时，将式(VII)化合物

其中X₁、X₂、X₃和X₄如对式(I)所定义，与式(VIII)化合物反应

其中L₂、n、R⁴、R⁵和R⁶如对式(I)所定义；或

(e)将式(IX)化合物，

其中X₁、X₂、X₃、X₄、L₁、L₂、R³、R⁴、R⁵和R⁶如对式(I)所定义，与三 氟乙酸酐反应；

然后

i)将获得的化合物进行任选的还原、氧化或其它官能团化反应，

ii)裂解存在的任何保护基团，

iii)回收如此获得的游离形式或可药用盐形式的式(I)化合物，和/或

iv)任选将光学活性异构体的混合物分离为其单一光学活性异构体形 式。

上述反应可以根据常规方法实现。例如，步骤(a)中描述反应可以在适 合的溶剂(例如吡啶)存在下、在适当的温度下(例如10至50℃，更优选18 至30℃)进行。

步骤(b)中描述的反应可在适合的溶剂、例如DMF的存在下、任选地 在适合的碱、例如碳酸铯的存在下、并在适合的温度、例如50至150℃、 更适合地100至150℃进行。

步骤(c)中描述的反应可在适合的溶剂、例如正丁醇的存在下、任选地 在适合的碱例如DIPEA的存在下、并在适合的温度、例如50至150℃、 更适合地80至120℃进行。

步骤(d)中描述的反应可使用适合的偶联剂、例如HATU O-(7-氮杂苯 并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸盐、适合的溶剂、例如DMF、 适合的碱、例如DIPEA、并在适合的温度、例如10至50℃、更适合地18 至30℃进行。

步骤(e)中描述的反应可在适合的溶剂、例如THF的存在下、并在适 合的温度、例如0至25℃、更适合地2至10℃进行。

式(XII)化合物(其中X₁、X₂、X₃和X₄如对式(I)所定义，且Y表示氨 基、氟或羧基)可依据以下的流程1从式(X)化合物制备，所述式(X)化合物 描述于文献中、商购可得或者使用本领域技术人员已知的方法制备。

流程1：式(XII)化合物的通用合成方法：

式(IX)化合物可依据以下的流程2从式(XIII)化合物制备，所述式(XIII) 化合物描述于文献中、商购可得或者使用本领域技术人员已知的方法和如 本文所述的方法制备。

流程2：式(IX)化合物的通用合成方法：

式(III)、(IV)、(VI)、(VIII)、(X)和(XIII)的化合物是已知的，或可依 据常规方法从已知的化合物起始制备，可从如实施例中描述的已知的化合 物制备，或可使用与实施例中描述的那些类似的方法制备。

式(I)化合物的其它任选的还原、氧化或其它官能团化反应可以根据本 领域技术人员众所周知的方法实施。

在本文范围内，除非本文中另有说明，只有并非本发明特定需要的终 产物的构成部分的、易于除去的基团才被指定为“保护基团”。通过此类保 护基团对官能团的保护、保护基团本身及其裂解反应描述于例如标准参考 著作，例如J.F.W.McOmie，“有机化学中的保护基团(Protective Groups  in Organic Chemistry)”，Plenum Press，London and New York1973；T.W. Greene和P.G.M.Wuts，“有机合成中的保护基团(Protective Groups in  Organic Synthesis)”，第三版，Wiley，纽约1999；“肽(The Peptides)”；第 3卷(编者：E.Gross和J.Meienhofer)，Academic Press，London and New  York1981；“Methoden der organischen Chemie(有机化学方法)”，Houben  Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag，Stuttgart1974；H.-D. Jakubke和H.Jeschkeit，“，Peptide，Proteine(氨基酸，肽， 蛋白质)”，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel1982。保护 基团的特征在于它们易于被除去(即不会发生不需要的二级反应)，例如通 过溶剂分解、还原、光解或在生理学条件下(例如通过酶的裂解)除去。

具有至少一个盐形成基团的本发明化合物的盐可以根据本领域技术人 员已知的方法制备。例如，本发明化合物的酸加成盐可以通过常规方法获 得，例如采用酸或适当的阴离子交换试剂处理所述化合物。

盐可以根据本领域技术人员已知的方法和实施例中描述的方法转化为 游离化合物。酸加成盐可以例如通过采用适当的碱性试剂处理而转化。

对于那些含有不对称碳原子的化合物，化合物可以单一光学活性异构 体形式存在，或者是以其混合物的形式存在，例如外消旋体和非对映异构 体混合物。非对映异构体混合物可以通过本领域技术人员已知的方法根据 其物理化学性质的不同而分离为其单一非对映异构体，例如通过色谱和/ 或分步结晶的方法分离。对映异构体可以通过将对映体混合物转化为非对 映体混合物而分离，采用与适当的光学活性化合物(例如手性助剂，如手性 醇或Mosher酰氯)的反应，分离非对映异构体并将单一非对映异构体转化 (例如水解)为相应的纯对映异构体。对映异构体也可以通过采用获自商业 的手性HPLC柱分离。

本发明还包括所述方法的任何变通方法，其中可以采用反应成分的盐 形式或光学纯材料。本发明化合物和中间体也可以根据本领域技术人员公 知的方法彼此转化。

游离形式或可药用盐形式的式(I)化合物在下文中通常称为“本发明的 活性剂”，当在体外进行试验时，它们具有有价值的药理学特性，因此，它 们可以用于医药、治疗中，或者用作研究用的化学品，例如工具化合物。

生物学试验

本发明的活性剂是HDAC4的抑制剂。相对于HDAC1和HDAC6而 言，本发明化合物对HDAC4的抑制特性可以通过下面所述试验进行评价。

测试1：HDAC4试验描述

人重组HDAC4在Sf9昆虫细胞(获自ATCC)中采用Bac-to-Bac系统 (Invitrogen)生成的杆状病毒以全长形式(aa2-1084)表达。将试验化合物连 续稀释至试验终浓度0.000128μM-10μM。将HDAC4和试验化合物在 25mM Tris缓冲液pH8.0中、于室温下温育2小时，所述缓冲液含有 137mM NaCl、2.7mM KCl、1mM MgCl₂、0.05％(w/v)牛血清白蛋白和 0.005％(v/v)Triton-X-100，缓冲液中还含有5μM的乙酰基-Gly-Ala-Lys(ε- 三氟乙酰基)-AMC(AMC＝7-氨基-4-甲基香豆素)，最终体积为9μl。将仅 含有HDAC4(阳性对照)和不含有HDAC4(阴性对照)的对照孔在微量板上 温育。加入牛胰蛋白酶(4.5μl的300nM溶液)，将板于室温下再温育15分 钟。将板置于荧光微量板读数仪中，采用10nm宽带通路(bandpath)于激 发波长360nm和发射波长450nm处读数。通过扣减阴性对照荧光值校正 所有含有HDAC4的孔(阳性对照和试验化合物孔)的荧光值，通过将剂量- 响应曲线拟合为4-参数逻辑函数计算IC₅₀值。

测试2：HDAC1试验描述

采用测试1中所述类似方法进行HDAC1试验。在杆状病毒表达系统 中表达的人重组全长HDAC1购自BPS BioSciences(San Diego，CA， U.S.A.)。在HDAC1试验中采用的底物为5μM的乙酰基-Gly-Ala-Lys(乙酰 基)-AMC。

测试3：HDAC6试验描述

采用测试1中所述类似方法进行HDAC6试验。在杆状病毒表达系统 中表达的人重组全长HDAC6购自BPS BioSciences(San Diego，CA， U.S.A.)。在HDAC6试验中采用的底物为5μM的乙酰基-Gly-Ala-Lys(乙酰 基)-AMC。

HDAC试验中测试的实施例化合物的IC₅₀值列示于下面表1中。

表1

注意：N-(吡啶-4-基甲基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-甲 酰胺和(R)-N-(1-苯基乙基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-甲酰 胺在HDAC4试验的较早版本(下文描述的)中测试，且发现具有大于30μM 的IC₅₀值。

HDAC4试验的较早版本的描述

人重组HDAC4在Sf9昆虫细胞(获自ATCC)中采用Bac-to-Bac系统 (Invitrogen)生成的杆状病毒以全长形式(aa2-1084)表达。将试验化合物连 续稀释至试验终浓度0.003μM-100μM。将HDAC4和试验化合物在 25mM Tris缓冲液pH8.0中、于室温下温育2小时，所述缓冲液含有 137mM NaCl、2.7mM KCl、1mM MgCl₂和0.05％(w/v)牛血清白蛋白， 缓冲液中还含有10μM的乙酰基-Gly-Ala-Lys(ε-三氟乙酰基)-AMC(AMC＝ 7-氨基-4-甲基香豆素)，最终体积为200μl。将仅含有HDAC4(阳性对照) 和不含有HDAC4(阴性对照)的对照孔在微量板上温育。加入牛胰蛋白酶 (10μl的0.4mg/ml溶液)，将板于室温下再温育15分钟。将板置于荧光微 量板读数仪中，采用435nm的截止滤波器(cut-off filter)于激发波长360nm 和发射波长450nm处读数。通过扣减阴性对照荧光值校正所有含有 HDAC4的孔(阳性对照和试验化合物孔)的荧光值，通过将剂量-响应曲线 拟合为4-参数逻辑函数计算IC₅₀值。

由于其抑制HDAC4活性的性能，本发明的活性剂可以用于治疗或预 防：脑缺血引起的神经变性；神经系统的急性、创伤性或慢性变性过程， 如帕金森氏病、唐氏综合征、痴呆如老年性痴呆、路易体痴呆(dementia with  Lewy bodies)或额颞痴呆(fronto-temporal dementia)、认知障碍、认知功能 损害(cognitive impairment)、例如轻度认知功能损害、记忆损害(memory  impairment)、淀粉样变性神经病、周围神经病变、阿尔茨海默病、 Gerstmann-Straeussler-Scheinker综合征、Niemann-Pick病、例如 Niemann-Pick C型疾病、脑炎症、脑、脊髓或神经损伤、如创伤性脑损伤 (TBI)、神经创伤或脑创伤、血管淀粉样变性、伴淀粉样变性的脑出血、亨 廷顿舞蹈病、肌萎缩性侧索硬化症、多发性硬化症或脆性X综合征；痒病 (scrapie)；脑淀粉样血管病；脑病，如传染性海绵状脑病；或卒中。本发 明的活性剂也可以例如在痴呆患者中用于改善认知，例如阿尔茨海默病； 或者作为配体，例如放射性配体或正电子发射断层扫描(PET)配体。

由于其抑制HDAC4活性的性能，本发明的活性剂可以用于治疗或预 防：代谢综合征(包括但不限于：血脂异常、肥胖和胰岛素抵抗、高血压、 微量白蛋白尿(microalbuminemia)、高尿酸血症和高凝状态)、X综合征、 糖尿病、胰岛素抵抗、葡萄糖耐量降低、非胰岛素依赖型糖尿病、II型糖 尿病、I型糖尿病、糖尿病并发症、体重性障碍(包括但不限于肥胖、超重、 恶病质、贪食症、厌食症)、体重减轻、消瘦症、体重指数和瘦蛋白(leptin) 相关疾病。

由于其抑制HDAC4活性的性能，本发明的活性剂可以用于治疗或预 防：肌萎缩，例如发现是糖皮质激素的分解代谢副作用结果的肌萎缩；慢 性疲劳综合征；慢性肌痛；骨折；急性疲劳综合征；由于卧床休息导致的 固定化，如当患者在接受择期手术或因疾病延长住院时间时出现的；恶病 质；慢性分解代谢状态；进食障碍；化疗的副作用；骨折继发性消瘦；与 慢性阻塞性肺疾病(COPD)相关的消瘦，慢性肝病，艾滋病，失重，癌症恶 病质，烧伤和创伤的恢复，慢性分解代谢状态，如昏迷、进食障碍如厌食 和化疗；与肾功能衰竭相关的消瘦；肝功能衰竭导致的消瘦；睾酮水平低 或IGF1低或低生长激素水平。所述治疗也可以用于处置脂肪代谢障碍 (lipodistrophy)；肥胖；少肌症-被定义为与年龄有关的虚弱或与年龄有关 的肌肉损失；肌肉力量和功能降低。该治疗也可以用于处置导致肌肉损失 的肌炎，例如包涵体肌炎或任何炎性肌炎。

对于上述适应症而言，适当的剂量取决于例如作为活性药物成分使用 的化合物、宿主、施用的模式、病症、疾病或障碍的性质和严重程度或期 望的效果。然而，通常，在动物中获得满意的结果的日剂量为约0.1至约 100、优选约1至约50mg/kg动物体重。在较大型哺乳动物中，例如人类 中，指定的适当的施用日剂量范围为约0.5至约2000、优选约2至约200mg 的本发明的活性剂，例如以每天至多四次的分剂量施用，或者以缓释形式 施用。

本发明的活性剂可以通过任何常规途径施用，特别是肠内施用，优选 口服施用，例如以片剂或胶囊的形式施用；或肠胃外施用，例如以注射用 溶液或混悬液的形式施用。

在另一方面，本发明涉及药物组合物，它包含作为活性药物成分的本 发明的活性剂以及至少一种可药用的载体或稀释剂，并任选包含其它辅助 物质，例如细胞色素P450酶的抑制剂、防止细胞色素P450导致活性药物 成分降解的成分、改善或增强活性药物成分的药代动力学的成分、改善或 提高活性药物成分的生物利用度的成分等，例如葡萄柚汁、酮康唑，或者 优选利托那韦。此类组合物可以根据常规方法生产，例如通过将其各成分 混合生产。单位剂型含有例如约0.1至约1000、优选约1至约500mg的本 发明的活性剂。

另外，本发明的药物组合物可以被制成固体形式(包括但不限于胶囊、 片剂、丸剂、颗粒剂、粉末或栓剂)或液体形式(包括但不限于溶液剂、混 悬液剂或乳剂)。所述药物组合物可以经过常规制药操作例如灭菌和/或可 以含有常规惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅助剂，例如防腐剂、稳定 剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

通常，所述药物组合物为片剂或明胶胶囊，它包含活性成分以及下列 成分：

a)稀释剂，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/ 或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸及其镁盐或钙盐和/或聚 乙二醇；对于片剂而言，也可以包含：

c)粘合剂，例如硅酸铝镁、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧 甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还可以含有：

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、藻酸或其钠盐，或泡腾混合物；和/或

e)吸收剂、着色剂、矫味剂和甜味剂。

片剂可以根据本领域已知的方法进行薄膜包衣或肠溶包衣。

用于口服施用的适当的组合物包含有效量的本发明化合物，它可以为 以下形式：片剂、锭剂、水性或油性混悬液、可分散粉末或颗粒剂、乳剂、 硬或软胶囊剂或糖浆剂或酏剂。口服使用的组合物可以根据本领域中已知 的用于生产药物组合物的任何方法制备，所述组合物可以含有一或多种选 自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂的成分从而提供药学上美观和可口的 制剂。片剂可以含有活性成分以及与之混合的适合于生产片剂的无毒可药 用的赋形剂。这些赋形剂包括例如：惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、 乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂， 例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。 片剂可以是未包衣的或者根据已知的技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和 吸收从而在较长的时间内提供持续的作用。例如，可以采用延时材料如单 硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。口服使用的制剂可以为硬明胶胶囊，其 中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合；或者 为软明胶胶囊，其中活性成分与水或油性介质(例如花生油、液体石蜡或橄 榄油)混合。

某些注射用组合物为水性等渗溶液或混悬液，栓剂最好制备自脂肪乳 或混悬液。所述组合物可以是灭菌的和/或含有辅助剂，例如防腐剂、稳定 剂、润湿剂或乳化剂、溶液促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。另 外，它们也可以含有其它具有治疗价值的物质。所述组合物可以分别根据 常规的混合、制粒或包衣方法制备，含有约0.1-75％的活性成分，或含有 约1-50％的活性成分。

用于透皮应用的适当的组合物包含有效量的本发明化合物以及适当的 载体。适合于透皮传递的载体包括可吸收的药理学上可接受的溶剂，以有 助于通过宿主的皮肤。例如，透皮装置为绷带形式，它包括背衬、含有化 合物以及任选的载体的储库、能够将化合物在较长时间内以受控和预定速 率传递通过宿主皮肤的控速屏障，并将该装置固定在皮肤上的装置。

用于局部施用(例如施用至皮肤和眼睛)的适当的组合物包括水溶液、 混悬液、软膏剂、霜剂、凝胶剂或气雾剂，例如通过喷雾器等传递的气雾 剂。此类局部传递系统特别适用于皮肤应用，例如治疗皮肤癌，例如在防 晒霜、洗剂、喷雾剂中的预防性应用。因此，它们特别适合用于本领域众 所周知的局部制剂(包括化妆品)。此类制剂可以含有增溶剂、稳定剂、张 力调节剂、缓冲剂和防腐剂。

本文中使用的局部应用也可以适合于吸入或鼻内应用。它们可以以干 粉的形式(单独或者以混合物的形式，例如与乳糖的干混合物，或者混合的 组分颗粒，例如与磷脂混合)自干粉吸入器方便地传递，或者通过加压容器、 泵、喷雾器、喷瓶或雾化器中的气雾剂的形式传递，其中可以含有或者不 含有适当的抛射剂。

本发明还提供了包含作为活性成分的本发明化合物的无水的药物组合 物和剂型，因为水可能会促进某些化合物的降解。

本发明的无水的药物组合物和剂型可以采用无水或含水分较低的成分 并且在低水分或低湿度条件下制备。无水的药物组合物可以被制备和储存 从而保持其无水性质。因此，无水组合物可以采用已知能够避免暴露于水 的材料包装，如此它们可以包含在适当的制剂药盒中。适当的包装的示例 包括但不限于密封的铝箔、塑料、单剂量容器(如安瓿)、泡罩包装和条带 包装。

本发明还提供了含有一或多种能够降低作为活性成分的本发明化合物 的分解速度的成分的药物组合物和剂型。在本文中被称为“稳定剂”的此类 成分包括但不限于抗氧化剂例如抗坏血酸、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

综上所述，另一方面，本发明涉及用作药物的本发明的活性剂，例如 用于治疗或预防神经变性疾病、肌肉萎缩或代谢综合征。在另一个实施方 案中，本发明涉及用于治疗由HDAC4活性介导的疾病或病症的本发明的 活性剂。在一个实施方案中，本发明涉及用于治疗亨廷顿病、肌肉萎缩或 糖尿病/代谢综合征的本发明的活性剂。在另一个实施方案中，本发明涉及 用于治疗肌肉萎缩的本发明的活性剂。

另一方面，本发明涉及作为在药物中的活性药物成分的本发明活性剂 应用，例如用于治疗或预防神经变性疾病、肌肉萎缩或代谢综合征。在另 一个实施方案中，本发明涉及作为在药物中的活性药物成分的本发明的活 性剂应用，所述药物用于治疗或预防由HDAC4活性介导的疾病或障碍。 在一个实施方案中，本发明涉及作为在药物中的活性药物成分的本发明的 活性剂应用，所述药物用于治疗或预防亨廷顿病、肌肉萎缩或糖尿病/代谢 综合征。

另一方面，本发明涉及本发明的活性剂在制备用于治疗或预防神经变 性疾病、肌肉萎缩或代谢综合征的药物中的应用。在另一个实施方案中， 本发明涉及本发明的活性剂在制备用于治疗或预防由HDAC4活性介导的 疾病或障碍的药物中的应用。在一个实施方案中，本发明涉及本发明成分 在制备用于治疗或预防亨廷顿病、肌肉萎缩或糖尿病/代谢综合征的药物中 的应用。

另一方面，本发明涉及在需要治疗或预防的个体中治疗或预防神经变 性疾病、肌肉萎缩或代谢综合征的方法，该方法包括向所述个体施用有效 量的本发明的活性剂。在一个实施方案中，本发明涉及在个体中调节 HDAC4活性的方法，其中所述方法包括向个体施用治疗有效量的本发明 的活性剂。在另一个实施方案中，本发明涉及在需要治疗或预防的个体中 治疗或预防由HDAC4活性介导的疾病的方法，该方法包括向所述个体施 用有效量的本发明的活性剂。在另一个实施方案中，本发明涉及在需要治 疗或预防的个体中治疗或预防亨廷顿病、肌肉萎缩或糖尿病/代谢综合征的 方法，该方法包括向所述个体施用有效量的本发明的活性剂。

本发明的活性剂可以作为单一活性药物成分施用，或者与至少一种能 够有效地例如治疗或预防神经变性疾病、肌肉萎缩或代谢综合征的其它活 性药物成分组合施用。此类药物组合可以为单位剂型，该单位剂型含有预 定量的至少两种活性成分的每一种以及与之混合的可药用载体或稀释剂。 或者，该药物组合可以为分别包含至少两种活性成分的包装形式，例如适 合于共同或分别施用至少两种活性成分的包装或分配装置，其中这些活性 成分可以分别放置。另一方面，本发明涉及此类药物组合。

另一方面，本发明还涉及药物组合，其包含用于同时或依次施用的治 疗有效量的本发明的活性剂和第二种药物。

在一个实施方案中，本发明提供了用于在治疗中同时、分别或依次使 用的作为组合制剂的产品，所述产品包含本发明的活性剂和至少一种其它 治疗剂。在一个实施方案中，所述治疗为对由HDAC4活性介导的疾病或 病症的治疗。

在一个实施方案中，本发明提供了包含本发明的活性剂和另外的治疗 剂的药物组合物。该药物组合物任选可以含有上述可药用的载体或稀释剂。

在一个实施方案中，本发明提供了药盒，它包含两种或更多种单独的 药物组合物，其中至少一种含有本发明的活性剂。在一个实施方案中，药 盒包括分别保存所述组合物的装置，例如容器、各自独立的瓶子或各自独 立的铝箔包装。此类药盒的实例为泡罩包装，通常用于包装片剂、胶囊等。 本发明的药盒可以用于不同剂型的施用，例如口服和胃肠外剂型，用于以 不同的剂量间隔施用所述单独的组合物，或者用于针对彼此逐步增加所述 单独的组合物的剂量。为了提高顺应性，本发明的药盒通常包括施用说明 书。

在本发明的组合疗法中，本发明的活性剂和其它治疗剂可以由相同或 不同的制造商生产和/或配制。另外，本发明化合物和其它治疗化合物可以 在下列情况下结合成组合疗法：(i)在将组合产品发放给医师之前(例如在药 盒包含本发明化合物和其它治疗剂的情况下)；(ii)在施用之前由医师自己 (或者在医师的指导下)；(iii)由患者自己，例如在本发明化合物和其它治疗 剂依次施用期间。因此，本发明提供了用于治疗由HDAC4活性介导的疾 病或病症的本发明的活性剂，其中所述药物被制备用于与另外的治疗剂一 起施用。本发明也提供了另外的治疗剂在治疗由HDAC4活性介导的疾病 或病症中的应用，其中所述药物与本发明的活性剂一起施用。

本发明也提供了在治疗由HDAC4活性介导的疾病或病症的方法中使 用的本发明的活性剂，其中所述本发明的活性剂被制备用于与另外的治疗 剂一起施用。本发明也提供了在治疗由HDAC4活性介导的疾病或病症的 方法中使用的另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂被制备用于与本发明 的活性剂一起施用。本发明也提供了在治疗由HDAC4活性介导的疾病或 病症的方法中使用的本发明的活性剂，其中所述本发明的活性剂与另外的 治疗剂一起施用。本发明也提供了在治疗由HDAC4活性介导的疾病或病 症的方法中使用的另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂与本发明的活性 剂一起施用。

本发明也提供了本发明的活性剂在治疗由HDAC4活性介导的疾病或 病症中的应用，其中所述患者先前(例如在24小时内)已经采用另外的治疗 剂治疗过。本发明也提供了另外的治疗剂在治疗由HDAC4活性介导的疾 病或病症中的应用，其中所述患者先前(例如在24小时内)已经采用本发明 的活性剂治疗过。

在一个实施方案中，本发明涉及与另外的治疗剂组合的本发明化合物， 其中所述另外的治疗剂选自：

(a)乙酰胆碱酯酶抑制剂，如多奈哌齐(Aricept^TM)，卡巴拉汀(Exelon^TM) 和加兰他敏(Razadyne^TM)；

(b)谷氨酸盐拮抗剂，如美金刚(Namenda^TM)；

(c)用于情绪低落和易怒的抗抑郁药，如西酞普兰(Celexa^TM)、氟西汀 (Prozac^TM)、帕罗西汀(Paxil^TM)、舍曲林(Zoloft^TM)和曲唑酮(Desyrel^TM)；

(d)用于焦虑、烦躁、言语破坏性行为和反抗的抗焦虑药，如劳拉西 泮(Ativan^TM)和奥沙西泮(Serax^TM)；

(e)用于幻觉、妄想、攻击、情绪激动、敌意和不合作的抗精神病药 物，如阿立哌唑(Abilify^TM)、氯氮平(Clozaril^TM)、氟哌啶醇(Haldol^TM)、奥 氮平(Zyprexa^TM)、喹硫平(Seroquel^TM)、利培酮((Risperdal^TM)和齐拉西酮 (Geodon^TM)；

(f)情绪稳定剂，例如如卡马西平(Tegretol^TM)和双丙戊酸钠 (Depakote^TM)；

(g)烟碱α-7激动剂；

(h)mGluR5拮抗剂；

(i)H3激动剂；和

(j)淀粉样蛋白疗法的疫苗。

因此，在另一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，它包含：

i)本发明化合物或其可药用的盐；和

ii)至少一种选自下列的化合物：

(a)乙酰胆碱酯酶抑制剂，

(b)谷氨酸盐拮抗剂，

(c)抗抑郁药，

(d)抗焦虑药，

(e)抗精神病药物，

(f)情绪稳定剂，

(g)烟碱α-7激动剂，

(h)mGluR5拮抗剂，

(i)H3激动剂；和

ii)一或多种可药用赋形剂、稀释剂或载体。

在另一个实施方案中，本发明涉及本发明化合物或其可药用的盐以及 与之组合的另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂选自：

a)抗糖尿病药，例如胰岛素、胰岛素衍生物和拟似物；胰岛素促泌剂， 例如磺酰脲类，如格列吡嗪、格列本脲和亚莫利；促胰岛素磺酰脲受体配 体，例如氯茴苯酸类，如那格列奈和瑞格列奈；蛋白酪氨酸磷酸酶 -1B(PTP-1B)抑制剂，例如PTP-112；GSK3(糖原合酶激酶-3)抑制剂，例 如SB-517955、SB-4195052、SB-216763、NN-57-05441和NN-57-05445； RXR配体，如GW-0791和AGN-194204；钠依赖性葡萄糖协同转运蛋白 抑制剂，如T-1095；糖原磷酸化酶A抑制剂，例如BAY R3401；双胍类， 如二甲双胍；α-糖苷酶抑制剂，如阿卡波糖；GLP-1(胰高血糖素样肽-1)、 GLP-1类似物例如Exendin-4和GLP-1拟似物；DPPIV(二肽基肽酶IV) 抑制剂，例如维格列汀；

b)降血脂药，例如3-羟基-3-甲基-戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑 制剂，例如洛伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西伐他汀、美伐 他汀、维洛他汀、氟伐他汀、达伐他汀、阿托伐他汀、瑞舒伐他汀和利伐 他汀；角鲨烯合酶抑制剂；FXR(法尼酯X受体)和LXR(肝X受体)配体； 消胆胺；贝特类；烟酸胆汁酸结合树脂，如考来烯胺；贝特类；烟酸和其 它GPR109激动剂；胆固醇吸收抑制剂，如依泽替米贝；CETP抑制剂(胆 固醇酯转移蛋白抑制剂)和阿司匹林；

c)抗肥胖剂，例如奥利司他、西布曲明和大麻素受体1(CB1)拮抗剂， 例如利莫那班；和

d)抗高血压药，例如袢利尿剂，如依他尼酸、呋塞米和托拉塞米；血 管紧张素转换酶(ACE)抑制剂，例如贝那普利、卡托普利、依那普利、福 辛普利、赖诺普利、莫昔普利、培哚普利、喹那普利、雷米普利和群多普 利；Na-K-ATP酶膜泵抑制剂，例如地高辛；中性肽链内切酶(NEP)抑制剂； ACE/NEP抑制剂，例如奥马曲拉和法西多曲；血管紧张素II拮抗剂，如 坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、替米沙坦和缬沙，特别是缬 沙坦；肾素抑制剂，例如地替吉仑、占吉仑、特拉吉仑、阿利吉仑、RO66-1 132和RO-16866-1；β-肾上腺素能受体阻断剂，例如醋丁洛尔、阿替洛尔、 倍他洛尔、比索洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、普萘洛尔、索他洛尔和噻吗 洛尔；正性肌力药物，如地高辛、多巴酚丁胺和米力农；钙通道阻滞剂， 如氨氯地平、苄普地尔、地尔硫、非洛地平、尼卡地平、尼莫地平、硝 苯地平、尼索地平和维拉帕米；醛固酮受体拮抗剂；醛固酮合成酶抑制剂；

e)过氧化物酶体增殖物-激活剂受体激动剂，如非诺贝特、吡格列酮、 罗格列酮、替赛格列他(tesaglitazar)、BMS-298585、L-796449；在专利申 请WO2004/103995中具体描述的化合物，即实施例1-35的化合物或者 权利要求21中具体列示的化合物；或者在专利申请WO03/043985中具体 描述的化合物，即实施例1-7的化合物或者权利要求19中具体列示的化 合物；特别是(R)-1-{4-[5-甲基-2-(4-三氟甲基-苯基)-唑-4-基甲氧基]-苯磺 酰基}-2，3-二氢-1H-吲哚-2-羧酸或其盐。

因此，在一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，它包含：

i)本发明化合物或其可药用的盐；和

ii)至少一种选自下列的化合物：

a)抗糖尿病药，

b)降血脂药，

c)抗肥胖剂，

d)抗高血压药，

e)过氧化物酶体增殖物-激活剂受体激动剂；和

iii)一或多种可药用的载体或稀释剂。

其它具体的抗糖尿病化合物描述于Patel Mona，Expert Opin Investig  Drugs，2003，12(4)，623-633，图1-7。

在另一个实施方案中，本发明涉及本发明化合物或其可药用的盐以及 与之组合的另外的治疗剂，其中所述另外的治疗剂选自：

a)肌生成抑制蛋白(myostatin)受体的抑制剂，

b)IGF1受体的激活剂，

c)β2肾上腺素受体的激活剂，

d)TNF的抑制剂，和

e)雄激素受体的激活剂。

因此，在一个实施方案中，本发明提供了药物组合物，它包含：

i)本发明化合物或其可药用的盐；和

ii)至少一种选自下列的化合物：

a)肌生成抑制蛋白受体的抑制剂，

b)IGF1受体的激活剂，

c)β2肾上腺素受体的激活剂，

d)TNF的抑制剂，

e)雄激素受体的激活剂，和

iii)一或多种可药用的载体或稀释剂。

由编码、通用名或商品名所辨识的治疗剂的结构可以获自现行版的标 准汇编“默克索引(The Merck Index)”或数据库，例如Patents International  (例如IMS World Publications)。

实施例

NMR方法

在Varian Mercury400MHz或Bruker Avance400或600MHz仪器 记录氢谱。化学位移以相对于甲醇(δ3.31)、二甲基亚砜(δ2.50)或氯仿(δ 7.26)的ppm报道。

实施例1至17的色谱和LC/MS方法

快速色谱系统：

ISCO系统，CombiFlash Companion；IG Instrumenten-Gesellschaft  AG.Cartusch系统。

UPLC-MS系统(分析)：Waters

柱：Waters Acquity HSST31.8μm2.1x50mm，在50℃

洗脱剂：(A)水+0.05％甲酸+3.75mM乙酸铵；

(B)乙腈+0.04％甲酸；在1.4min内从2至98％B

流速：1.2mL/min；温度37℃

方法A

LaChrom Elite，Hitachi，HPLC系统

柱：VWR Chromolith SpeedRod RP-18e，3.5μm，4.6x50mm；

洗脱剂：水(+0.1％甲酸)：乙腈(0.08％甲酸)，在3.5min内从95∶5 至5∶95，保持95％B达1.0min，再平衡1.5min；

流速：1.5ml/min；温度37℃

实施例18至46的色谱和LC/MS方法

快速色谱系统：

Isolera Four，Biotage

制备型HPLC色谱：

Gilson GX281

柱：Sunfire C18，5μm，30x100mm；

洗脱剂：A：水(+0.1％TFA)

B：乙腈

梯度：在20min内从95∶5至0∶100

流速：30mL/min

温度：24℃

LC-MS系统(分析)：

方法B

Agilent 1100 HPLC系列，其包括有化学电离的MS

柱：Symmetry C8，3.5μm，2x50mm；

洗脱剂：A：水(+0.1％TFA)

B：乙腈(+0.1％TFA)

梯度：在2min内从90∶10至5∶95

流速：1.0mL/min

温度：50℃

方法C

Waters Acquity UPLC，其包括有电喷雾离子化(ESI)的MS

柱：Waters Aquity HSS T3，1.8μm，2.1x50mm；

洗脱剂：A：水(+0.05％甲酸+3-75mM乙酸铵)

B：乙腈(+0.04％甲酸)

梯度：在1.40min内从98∶2至2∶98

流速：1.2mL/min

温度：50℃

方法D

带有电喷雾离子化的Waters 2795 Alliance HT HPLC仪器

柱：SunFire C18，3.5μm，4.6x20mm；

洗脱剂：A：水(+0.1％TFA)

B：乙腈(+0.1％TFA)

梯度：在4.0min内从95∶05至0∶100

流速：3.0mL/min

温度：45℃

缩写

aa      氨基酸

APCI    大气压化学电离

BINAP   2，2’-双(二苯基膦基)-1，1’-联萘

BOC     叔丁氧羰基

ca      约(大概)

conc.   浓缩的

d       天

DIPEA   N，N-二异丙基乙胺

DMF     二甲基甲酰胺

DMSO    二甲基亚砜

EDC     1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺

ESIMS   电喷雾离子化质谱

EtOH    乙醇

Et₂O    乙醚

h       小时

HATU    O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸 盐

HOBT    1-羟基苯并三唑三水合物

HPLC    高压液相色谱

HV      高真空(＜0.01毫巴)

IC₅₀    半数最大抑制浓度

i.V.    在真空下

LCMS    液相色谱质谱

min     分钟

MS      质谱

NMR     核磁共振波谱法

RT      保留时间

rt      室温

THF     四氢呋喃

TFA     三氟乙酸

UPLC    超高效液相色谱

实施例1：N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)乙酰胺

5-氨基-N′-羟基吡嗪-2-甲脒

向在EtOH(30mL)中的2-氨基-5-氰基吡嗪(Ark Pharm Inc)(4.87g， 40.5mmol)和盐酸羟胺(6.20g，89mmol)加入三乙胺(9.44g，93mmol)。将 该反应混合液在80℃搅拌1h。将沉淀过滤，用小体积的乙醇洗涤，并高 真空下干燥，得到5-氨基-N′-羟基吡嗪-2-甲脒(5.9g，38.5mmol，95％收 率)，为黄色粉末。HPLC RT＝0.593min(方法A)，ESIMS[M+H]⁺＝154

5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-胺

在室温向在干燥的THF(6mL)中的5-氨基-N′-羟基吡嗪-2-甲脒(1.12 g，7.31mmol)加入2，2，2-三氟乙酸酐(4.61g，21.94mmol)。然后将该暗黄 色溶液加热，并在回流温度搅拌16h。然后通过加入25mol％氨溶液以达 到碱性pH将反应淬灭。加入盐水，用乙酸乙酯萃取产物。将合并的有机 层经硫酸钠干燥，过滤，并减压蒸发有机溶剂。将得到的粗制残余物(3.75g) 溶于甲醇(20mL)中，并将得到的黄色溶液加热至回流温度达6h。随后将 溶剂蒸发，在高真空下干燥剩余的残余物。将粗制的产物溶于中乙酸乙酯， 用饱和的碳酸钠溶液和盐水洗涤。将有机层经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发 溶剂，得到Klaeust9-001-EXP0815-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪 -2-胺(1.84g，7.56mmol，66％收率)，为棕色固体。HPLC RT＝2.910min (方法A)，ESIMS[M+H]⁺＝232

N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)乙酰胺

向在吡啶(2.5mL)中的5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-胺(60 mg，0.26mmol)中加入乙酰氯(22.4mg，0.286mmol)。将该反应混合液在 室温搅拌2h。随后将该反应溶液减压蒸发，并将粗制残余物经快速色谱 (ISCO CombiFlash Rf；24g硅胶，二氯甲烷/甲醇)纯化，得到N-(5-(5-(三 氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)乙酰胺(20mg，0.07mmol，28％收 率)，为黄色粉末。HPLC RT＝3.053min(方法A)，ESIMS[M+H]⁺＝274， 1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.2(s，1H)，9.52(d，J＝1.38Hz，1H) 9.09(d，J＝1.51Hz，1H)2.20(s，3H)

实施例2：4-氰基-N-(5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)苯甲酰胺

使用与实施例1中所述类似的方法制备4-氰基-N-(5-(5-(三氟甲 基)-1，2，4-二唑-3-基)吡嗪-2-基)苯甲酰胺HPLC RT＝3.577min(方法 A)，ESIMS[M+H]⁺＝361，浅粉色粉末

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.92-11.95(m，1H)9.64- 9.66(m，1H)9.19-9.22(m，1H)8.21-8.24(m，1H)8.19-8.22(m，1H) 8.07-8.09(m，1H)8.05-8.07(m，1H)

实施例3：N-甲基-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

2-(甲基(吡啶-4-基甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈

在室温向2-(甲硫基)嘧啶-5-甲腈(Biofine International Inc.)(390mg， 2.58mmol)在1，4-二烷(3mL)中的溶液中加入N-甲基-1-(吡啶-4-基)甲胺 (Fisher Scientific International-Maybridge)(789mg，2.50mmol)。将得到 的反应混合液在微波炉中在170℃加热10h。随后将溶剂在高真空下蒸发， 并将剩余的油性残余物经快速色谱纯化(ISCO CombiFlash Rf；80g硅胶， 二氯甲烷/甲醇)，得到2-(甲基(吡啶-4-基甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(404mg， 1.65mmol，64％收率)，为黄色粉末。HPLC RT1.323min(方法A)；ESIMS [M+1]⁺226

N′-羟基-2-(甲基(吡啶-4-基甲基)氨基)嘧啶-5-甲脒

向2-(甲基(吡啶-4-基甲基)氨基)嘧啶-5-甲腈(400mg，01.78mmol)在乙 醇(6mL)中的混合液中加入盐酸羟胺(271mg，3.91mmol)和三乙胺(413 mg，4.08mmol)。将该黄色反应混合液加热至80℃，并搅拌1h。随后将 该反应混合液冷却至5℃，并搅拌。将沉淀的白色产物过滤掉，并在高真 空下干燥，得到N′-羟基-2-(甲基(吡啶-4-基甲基)氨基)嘧啶-5-甲脒(304mg， 1.12mmol，63％收率)，为白色粉末。HPLC RT0.570min(方法A)；ESIMS [M+1]⁺259

N-甲基-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2- 胺

将N′-羟基-2-(甲基(吡啶-4-基甲基)氨基)嘧啶-5-甲脒(300mg，1.162 mmol)在THF(4mL)中的混合液冷却至5℃，并滴加2，2，2-三氟乙酸酐(732 mg，3.480mmol)，然后将反应混合液在5℃搅拌15min。随后将该反应 混合液在高真空下浓缩，并将粗制的产物经快速色谱纯化(ISCO  CombiFlash Rf；40g硅胶，二氯甲烷/甲醇)。将含产物的级分合并，并减 压蒸发，并将残余物在高真空下干燥，得到N-甲基-N-(吡啶-4-基甲 基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺(302mg，0.889mmol，77 ％收率)，为白色粉末；Rt＝2.817min(方法A)，ESIMS[M+H]⁺＝337；¹H  NMR(400MHz，甲醇-d₄)d ppm8.89-9.16(m，2H)8.69-8.77(m，2H) 7.83-7.90(m，2H)5.22-5.28(m，2H)3.43(s，3H)；1H NMR(400MHz， DMSO-d6)δppm9.05-9.08(m，1H)8.91-8.93(m，1H)8.71(d，J＝6.27 Hz，2H)7.62(d，J＝5.90Hz，2H)5.13(s，2H)3.31(s，3H)

使用类似于为实施例3所述的方法制备以下的实施例4至17。

实施例4：N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺(TFA-盐)

HPLC RT3.973min(方法A)ESIMS[M+1]⁺322，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.89(s，1H)8.89(s，1H)8.69- 8.71(m，1H)7.30-7.35(m，4H)7.21-7.28(m，1H)4.59-4.64(m，2H)

实施例5：N-((2-氯吡啶-4-基)甲基)-N-甲基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺(TFA-盐)

HPLC RT3.977min(方法A)ESIMS[M+1]⁺371，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.88-9.10(m，2H)8.36(d， J＝5.14Hz，1H)7.38(s，1H)7.27(dd，J＝5.14，1.38Hz，1H)5.01(s，2H) 3.28(s，3H)

实施例6：N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.590min(方法A)ESIMS[M+1]⁺323，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.96-8.99(s，1H)8.85-8.87(s， 2H)8.77(d，J＝6.40Hz，2H)7.82(d，J＝6.40Hz，2H)4.83(d，J＝6.15Hz，2 H)

实施例7：N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT4.090min(方法A)ESIMS[M+1]⁺336，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.81-8.92(m，2H)8.69-8.76 (m，1H)7.28-7.44(m，4H)7.18-7.26(m，1H)5.23(s，1H)1.45-1.53(m， 3H)

实施例8：N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.623min(方法A)ESIMS[M+1]⁺337，黄色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.86-8.97(m，2H)8.69-8.78 (m，1H)8.56-8.64(s，1H)7.96-8.09(m，1H)7.51-7.59(m，1H)4.62- 4.71(m，2H)2.55-2.57(s，3H)

实施例9：N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.663min(方法A)ESIMS[M+1]⁺337，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)ppm8.94(br.s.，1H)8.88(d，J＝7.40 Hz，1H)8.82(br.s.，1H)8.68(d，J＝5.27Hz，2H)7.71(d，J＝5.14Hz，2H) 5.22-5.35(m，1H)1.53(d，J＝7.03Hz，3H)

实施例10：N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.640min(方法A)ESIMS[M+1]⁺323，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.92(d，J＝4.02Hz，2H)8.72- 8.78(m，1H)8.69(d，J＝1.38Hz，1H)8.56-8.62(m，1H)7.98-8.05(m，1 H)7.56-7.64(m，1H)4.69(d，J＝6.15Hz，2H)

实施例11：N-((6-甲基吡啶-2-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.693min(方法A)ESIMS[M+1]⁺337，白-黄色残余 物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.85-8.99(m，2H)8.68-8.78 (m，1H)7.79-7.92(m，1H)7.22-7.41(m，2H)4.72(d，J＝5.90Hz，2H) 2.55(s，3H)

实施例12：(R)-N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT4.070min(方法A)ESIMS[M+1]⁺336，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.85(d，J＝12.92Hz，2H)8.71 (d，J＝8.28Hz，1H)7.38-7.43(m，2H)7.32(t，J＝7.59Hz，2H)7.22(d， J＝7.28Hz，1H)5.23(m，1H)1.48(d，J＝6.90Hz，3H)

实施例13：(R)-N-(1-苯基丙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT4.227min(方法A)ESIMS[M+1]⁺350，白-灰色残余 物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.84(d，J＝12.55Hz，2H)8.67- 8.73(m，1H)7.40(d，J＝7.15Hz，2H)7.32(t，J＝7.59Hz，2H)7.18-7.25(m， 1H)4.89-5.07(m，1H)1.68-1.97(m，2H)0.90(t，J＝7.34Hz，3H)

实施例14：N-甲基-N-(2-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.820min(方法A)ESIMS[M+1]⁺351，白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.81-9.04(m，2H)8.68(d， J＝6.27Hz，2H)7.74(d，J＝6.15Hz，2H)4.05(t，J＝7.09Hz，2H)3.19(s，3H) 3.11-3.17(m，2H)

实施例15：N-(1-(吡啶-4-基)丙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.743min(方法A)ESIMS[M+1]⁺351，浅黄色残余 物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.91-8.96(m，1H)8.86-8.91 (m，1H)8.78-8.83(m，1H)8.70-8.75(m，2H)7.77-7.83(m，2H)5.08- 5.17(m，1H)1.81-1.90(m，2H)0.97(t，3H)

实施例16：N-(1-(2-甲基吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.610min(方法A)ESIMS[M+1]⁺351，涅白色残余物

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.80-8.96(m，2H)8.74(d， J＝8.03Hz，1H)8.37(d，J＝5.14Hz，1H)7.26(s，1H)7.19(d，J＝5.14Hz，1 H)5.08-5.25(m，1H)2.44(s，3H)1.48(d，J＝7.03Hz，3H)

实施例17：N-甲基-N-((2-甲基吡啶-4-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-2-胺

HPLC RT2.733min(方法A)ESIMS[M+1]⁺351，无色残余物

1H NMR(400MHz，甲醇-d₄)δppm8.87-9.15(m，2H)8.61(d， J＝6.15Hz，1H)7.79(s，1H)7.74(d，J＝6.15Hz，1H)5.23(s，2H)3.43(s，3 H)

2.77(s，3H)

在实施例18至26的制备中使用以下的胺

胺1：(R)-N1-苄基-N1-甲基丙烷-1，2-二胺

(R)-(1-(苄基(甲基)氨基)-1-氧代丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯

将BOC-D-Ala-OH(3.30，17.44mmol)和2.7mL(19.5mmol)三乙胺在 50mL THF中的溶液冷却至-30℃，并滴加氯甲酸异丁酯(2.47mL，18.8 mmol)进行处理。除去冷却浴，将该白色混悬液在室温搅拌3h。再次冷却 至0℃后，缓慢加入苄基甲胺(2.37mL，18.3mmol)和三乙胺(3.06mL，22.0 mmol)在10mL THF中的溶液。在环境温度搅拌过夜，随后加入30mL 饱和的碳酸氢钠溶液。减压除去大部分THF。然后将得到的水层用乙醚萃 取，将合并的有机层用水和盐水洗涤。浓缩i.V.得到粗制产物，将其经色 谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至60∶40)，得到无色油 状物形式的标题产物(4.09g，14.0mmol，80％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm7.15-7.42(m，5H)7.04(d， J＝7.53Hz，1H)4.54(d，J＝14.49Hz，1H)4.37-4.51(m，2H)2.95(s，3H) 1.38(s，9H)1.17(d，J＝1.00Hz，3H)

MS(APCI)m/e293(M+H)⁺RT＝1.98min(方法B)

(R)-(1-(苄基(甲基)氨基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯

将氢化铝锂在氩气气氛下缓慢加入冷却至0-5℃的以上制备的胺(2.9 g，9.42mmol)在乙醚(30mL)中的溶液中。将该混合液在该温度搅拌3h， 此时TLC分析显示没有原料留下。将该反应在冰浴温度通过后续小心地加 入1mL水、1mL20％氢氧化钠水溶液和另1mL的水淬灭。将该混合液 用乙酸乙酯稀释，并搅拌30mL。用乙酸乙酯/水进行萃取后处理，并i.V. 浓缩，得到足够纯(约90％)以直接用于下一个步骤的粗制的产物(2.6g， 8.41mmol，89％)。

¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δppm7.15-7.47(m，5H)4.60-4.84(m， 1H)3.76(s，2H)3.37-3.60(m，2H)2.23-2.42(m，1H)2.22(s，3H)1.46 (s，9H)1.15(d，J＝1.00Hz，3H)

MS(APCI)m/e279(M+H)⁺   RT＝1.54min(方法B)

(R)-N1-苄基-N1-甲基丙烷-1，2-二胺

将在最后的步骤得到的粗制的产物(1.0g，3.59mmol)用HCl溶液(9 mL，4M在二烷中)处理。在室温搅拌3h后水解完成。i.V.浓缩得到棕 色油状物，将其在乙酸乙酯和2N氢氧化钠水溶液之间分配。将有机层浓 缩后得到的粗制的棕色油性产物经色谱纯化(Biotage Isolera Four，二氯甲 烷/甲醇100∶0至90∶10)，得到黄色油状物形式的标题产物(230mg，1.29 mmol，36％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm7.17-7.36(m，5H)3.34-3.54 (m，2H)2.92-3.03(m，1H)2.00-2.19(m，5H)0.91(d，J＝6.21Hz，3H)

MS(APCI)m/e179(M+H)⁺   RT＝0.29min(方法B)

类似于胺1制备以下的胺：

胺2：(R)-N，N-二甲基丙烷-1，2-二胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.58(br.s.，1H)7.16-7.52(m， 3H)3.77(br.s.，1H)3.25(d，J＝12.99Hz，2H)2.83(d，J＝1.00Hz，6H)1.31 (d，J＝6.40Hz，3H)

胺3：(R)-N，N-二乙基丙烷-1，2-二胺

1H NMR(400MHz，MeOH-d₄)δppm3.89-4.03(m，1H)3.35-3.54 (m，5H)3.26-3.31(m，1H)1.49(d，J＝6.60Hz，3H)1.42(t，6H)

胺4：(R)-N，N-二乙基-3-甲基丁烷-1，2-二胺

1H NMR(400MHz，MeOH-d₄)δppm3.73-3.80(m，1H)3.37-3.53 (m，4H)3.21-3.32(m，2H)2.07-2.20(m，1H)1.43(d，J＝6.36Hz，6H) 1.12(dd，J＝6.85，1.71Hz，6H)

实施例18：(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

6-(N′-羟基脒基)烟酸

将6-氰基烟酸(1.50g，10.1mmol)溶于60mL EtOH中，并在室温用 过量的羟胺(3.0mL，50mmol，50％在水中)处理。将该黄色溶液搅拌12h 后，将该白色混悬液过滤，并用石油醚洗涤。收率：1.75g(9.66mmol，95 ％)白色固体。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm10.08(br.s，1H)9.01(d，J＝1.13 Hz，1H)8.21(dd，J＝8.28，2.07Hz，1H)7.89(d，J＝8.09Hz，1H)5.91(br.s， 2H)

MS(APCI)m/e182(M+H)⁺RT＝0.23min(方法B)

6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酸

将以上步骤制备的产物(800mg，4.42mmol)溶于22mL THF中，并 用三氟乙酸酐(1.9mL，13.5mmol)处理。将该反应混合液在60℃搅拌14h。 将该混合液浓缩i.V.，并将残余物混悬于乙酸乙酯/二氯甲烷中，得到标 题化合物(830mg，3.20mmol，73％)，为白色固体。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm13.81(br.s，1H)9.26(d，J＝1.56 Hz，1H)8.44-8.61(m，1H)8.29(d，J＝8.20Hz，1H)

MS(APCI)m/e260(M+H)⁺  RT＝1.74min(方法B)

(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟 酰胺

将之前步骤中制备的酸(125mg，0.482mmol)溶于1mL DMF中，用 DIPEA(337μL，1.93mmol)和HATU(257mg，0.675mmol)处理。搅拌 30min后。将(R)-N，N-二甲基丙烷-1，2-二胺二盐酸盐加入该混合液中，并 将小瓶再搅拌2h。将挥发物除去，并将残余物经HPLC(SunFire C18柱， 水/乙腈70∶30至20∶80)纯化，得到黄色泡沫形式的产物(85mg，0.25mmol， 51％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.22(s，1H)9.19(br.s，1H) 8.88(d，J＝8.47Hz，1H)8.48(dd，J＝8.19，1.79Hz，1H)8.34(d，J＝8.09Hz，1 H)4.39-4.59(m，1H)3.15-3.31(m，2H)2.74-2.92(m，6H)1.15-1.31 (m，3H)

MS(APCI)m/e344(M+H)⁺   RT＝1.44min(方法B)

类似于实施例18制备实施例19至23。

实施例19：N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.18(d，J＝2.07Hz，1H)8.62(d， J＝7.72Hz，1H)8.45(dd，J＝8.19，2.16Hz，1H)8.28(d，J＝8.28Hz，1H)4.10 -4.30(m，1H)2.44(br.s，1H)2.20(br.s，7H)1.17(d，J＝6.78Hz，3H)

MS(APCI)m/e344(M+H)⁺   RT＝1.42min(方法B)

实施例20：(S)-N-(1-羟基丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.19(s，1H)8.58(d，J＝8.09Hz， 1H)8.46(d，J＝8.09Hz，1H)8.27(d，J＝8.09Hz，1H)4.80(t，J＝5.55Hz，1 H)4.06(dt，J＝13.36，6.49Hz，1H)3.48(dt，J＝10.68，5.48Hz，1H)3.36- 3.43(m，1H)1.16(d，J＝6.59Hz，3H)

MS(APCI)m/e317(M+H)⁺   RT＝1.60min(方法B)

实施例21：(R)-N-(1-(芐基(甲基)氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm1.18(d，J＝6.59Hz，3H)2.18(s， 3H)2.38(dd，J＝12.14，7.25Hz，1H)2.44-2.48(m，1H)3.52(q，J＝13.36 Hz，2H)4.19-4.39(m，1H)7.17-7.26(m，1H)7.26-7.36(m，4H)8.28(d， J＝8.28Hz，1H)8.44(dd，J＝8.09，1.88Hz，1H)8.61(d，J＝8.09Hz，1H)9.18 (d，J＝1.51Hz，1H)

MS(APCI)m/e420(M+H)⁺   RT＝1.71min(方法B)

实施例22：(R)-N-(1-(二乙基氨基)-3-甲基丁-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.19(br.s.，1H)8.45(br.d， J＝7.50Hz，2H)8.29(d，J＝7.91Hz，1H)3.99-4.19(m，1H)2.49-2.66(m， 6H)1.88(dq，J＝13.01，6.52Hz，1H)0.98-1.17(m，6H)0.93(dd，J＝16.85， 6.68Hz，6H)

MS(APCI)m/e400(M+H)⁺   RT＝1.70min(方法B)

实施例23：(R)-N-(1-(二乙基氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.18(s，1H)8.62(br.s.，1H) 8.44(d，J＝1.00Hz，1H)8.28(d，J＝8.09Hz，1H)4.09-4.28(m，1H)2.61(m， 6H)1.19(d，J＝6.40Hz，3H)1.00(br.t，6H)

MS(APCI)m/e372(M+H)⁺   RT＝1.56min(方法B)

实施例24：(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶酰胺

5-(N’-羟基脒基)吡啶甲酸

向5-氰基吡啶甲酸(300mg，2.03mmol)在乙醇(20mL)中的溶液中加 入过量的羟胺(1.2mL，20.3mmol，50％在水中)。将得到的白色混悬液在 室温搅拌15h。过滤形成的固体，随后用少量的水洗涤，得到足够纯的用 于以下的环化步骤的粗制的产物(328mg，1.81mmol，89％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.10(dd，J＝8.20，2.34Hz，2H) 7.89-8.03(m，2H)6.03(s，3H)

MS(APCI)m/e182(M+H)⁺   RT＝0.19min(方法B)

5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶甲酸

将之前步骤得到的中间体(200mg，1.10mmol)混悬于11mL THF中， 用三氟乙酸酐(0.20mL，1.43mmol)处理，并在室温搅拌60h。将挥发物 在真空下除去，并将残余物溶于水和乙酸乙酯的混合液中。用碳酸氢钠溶 液中和水层，得到微棕色产物(209mg，0.071mmol，73％)，将其未经进 一步纯化地使用。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.30(d，J＝1.56Hz，1H)8.60 (dd，J＝8.20，1.95Hz，1H)8.24(d，J＝8.20Hz，1H)

MS(APCI)m/e260(M+H)⁺   RT＝1.70min(方法B)

(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡 啶酰胺

将以上制备的酸(110mg，0.424mmol)在4mL DMF中的溶液用 HATU(169mg，0.446mmol)和DIPEA(74μL，0.424mmol)处理。搅拌5 min后，加入(R)-N，N-二甲基丙烷-1，2-二胺的二盐酸盐和3当量的DIPEA (223μl，1.28mmol)在1ml DMF中的混合液。将得到的黄色混悬液搅拌2 h。用乙酸乙酯和水后处理后，将粗制的产物经色谱纯化(Biotage Isolera  Four，二氯甲烷/甲醇100∶0至90∶10)，得到黄色树脂形式的标题产物(68 mg，0.192mmol，45％)，用乙醚处理使将其结晶。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)ppm9.26(dd，J＝2.07，0.75Hz，1H) 8.70(d，J＝8.09Hz，1H)8.64(dd，J＝8.19，2.16Hz，1H)8.26(dd，J＝8.19， 0.66Hz，1H)4.08-4.26(m，1H)2.23(dd，J＝11.76，5.74Hz，2H)2.16(s，6 H)1.15-1.23(m，3H)

MS(APCI)m/e344(M+H)⁺   RT＝1.56min(方法B)

实施例25：(R)-3-氯-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶酰胺

3-氯-5-(N′-羟基脒基)吡啶甲酸

向3-氯-5-氰基吡啶甲酸(240mg，1.315mmol)在乙醇(10mL)中的溶液 中加入过量的羟胺(0.80mL，13.0mmol，50％在水中)。将得到的白色混 悬液在室温搅拌过夜。过滤形成的固体，随后用少量的乙醇、乙醚和石油 醚洗涤，得到用于以下的环化步骤的足够纯的所需产物(277mg，1.22 mmol，93％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)ppm10.00(br.s，1H)8.71(d，J＝1.56 Hz，1H)8.08(d，J＝1.95Hz，1H)6.06(s，2H)

MS(APCI)m/e216(M+H)⁺   RT＝0.18min(方法B)

3-氯-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶甲酸

将3-氯-5-(N′-羟基脒基)吡啶甲酸(320mg，1.41mmol)混悬于10mL THF中，用三氟乙酸酐(0.60mL，4.23mmol)处理，并在60℃在微波炉中 搅拌2h。将该混合液冷却，将挥发物在真空下除去，并将残余的油状物从 少量的乙酸乙酯和乙醚中结晶。用石油醚冲洗，并在HV下干燥后，得到 浅褐色结晶(320mg，1.09mmol，77％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)14.36(br.s，1H)9.17(s，1H)8.63(s， 1H)

MS(APCI)m/e250[(M+H)⁺-CO₂]RT＝1.87min(方法B)

(R)-3-氯-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基) 吡啶酰胺

将在4mL THF中的以上制备的酸(155mg，0.528mmol)用HOBT(93 mg，0.607mmol)和EDC·HCl(127mg，0.660mmol)处理，随后加入(R)-N，N- 二甲基丙烷-1，2-二胺的二盐酸盐(111mg，0.634mmol)和DIPEA(258μL， 1.48mmol)在1mL THF中的溶液。将得到的混合液在70℃搅拌1h。用 乙酸乙酯和水后处理后，将粗制的产物经色谱纯化(Biotage Isolera Four， 二氯甲烷/甲醇100∶0至95∶5)，得到黄色结晶形式的标题产物(59mg，0.156 mmol，30％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)ppm9.15(d，J＝1.56Hz，1H)8.59(m， J＝2.00Hz，2H)3.98-4.24(m，1H)3.35(m，J＝2.00Hz，1H)3.24-3.30(m， 1H)2.48-2.52(m，6H)1.11-1.20(m，3H)

MS(APCI)m/e378(M+H)⁺   RT＝1.58min(方法B)

实施例26：(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-甲酰胺

2-(N′-羟基脒基)嘧啶-5-甲酸

向2-氰基嘧啶-5-甲酸(4.70mg，31.5mmol)在乙醇(300mL)中的溶液 中加入过量的羟胺(19mL，315mmol，50％在水中)。将得到的白色混悬 液在室温搅拌1h。过滤形成的固体，随后用甲醇洗涤，得到纯形式的所需 产物(5.7g，31mmol，98％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)ppm10.29(br.s，1H)9.09(s，2H) 6.77-8.55(m，1H)5.88(br.s，2H)

MS(APCI)m/e183(M+H)⁺   RT＝0.167min(方法B)

2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-甲酸

将以上制备的中间体(4.0g，22.0mmol)混悬于110mL THF中，用3 当量的三氟乙酸酐(9.3mL，66mmol)处理，并在75℃搅拌5天。将该混 合液冷却，将挥发物在真空下除去，并将残余物用乙醚研磨。得到产物， 为浅褐色固体(2.50g，9.51mmol，43％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)ppm9.45(s，2H)

MS(ESI)m/e261(M+H)⁺   RT＝1.35min(方法C)

(R)-N-(1-(二甲基氨基)丙-2-基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧 啶-5-甲酰胺

将(R)-N，N-二甲基丙烷-1，2-二胺的二盐酸盐(97mg，0.554mmol)溶于 4.5mL THF中，并用HOBT(81mg，0.531mmol))EDC.HCl(111mg， 0.577mmol)和DIPEA(322μL，1.845mmol)处理。搅拌约1分钟后，加入 以上制备的酸(120mg，0.461mmol)。在70℃继续搅拌1h，然后将该反 应混合液冷却，并溶于乙酸乙酯和水中。将i.V.浓缩后得到的粗制的产物 经制备型HPLC纯化(Sunfire C18柱，水/乙腈95∶5至70∶30)，得到所需 产物的TFA盐。经由SPE PL-HCO₃MP-树脂柱(Varian)过滤，得到游离 碱(150mg，0.414mmol，90％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)ppm9.39(s，2H)8.74(d，J＝8.16Hz， 1H)4.20(dt，J＝14.21，7.01Hz，1H)2.43(dd，J＝12.11，7.59Hz，1H)2.24 (dd，J＝12.11，6.84Hz，1H)2.19(s，6H)1.19(d，J＝6.65Hz，3H)

MS(APCI)m/e345(M+H)⁺   RT＝1.274min(方法B)

实施例27：N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-3-胺

5-氨基-N′-羟基吡啶-2-甲脒

将氨基2-氰基吡啶(2.0g，16.79mmol)在乙醇(150mL)中的混悬液在 室温用过量的羟胺(10.08mL，168mmol，50％在水中)处理。将该微红色 混合物i.V.体积减少至50mL后，加入乙醚。将可溶性部分与少许胶粘的 物质分离，并将有机层i.V.浓缩。将得到的粗制的物质从Et₂O重结晶，得 到浅褐色固体形式的产物(1.48g，9.73mmol，58％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)ppm9.42(s，1H)7.86(d，J＝2.42Hz， 1H)7.51(d，J＝8.48Hz，1H)6.91(dd，J＝8.48，2.62Hz，1H)5.46-5.65(m， 4H)

MS(APCI)m/e153(M+H)⁺   RT＝0.162min(方法B)

2，2，2-三氟-N-(6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-3-基)乙酰胺

和

6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-3-胺

将以上步骤中制备的物质(703mg，4.62mmol)在THF(40mL)中的溶 液通过滴加三氟乙酸酐(1.3mL，9.24mmol)在10℃进行处理。除去冷却 浴，并继续搅拌过夜。将该混合液在饱和的碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯之间 分配，将合并的有机层用水洗涤，并i.V.浓缩。将得到的黄-橙色残余物用 二氯甲烷研磨，得到含两种产物的混合物的浅褐色固体。橙色滤液主要包 含三氟乙酰胺，将其经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯 100∶0至70∶30)，得到白色固体(299mg，0.91mmol，20％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm11.79(s，1H)8.94(s，1H)8.25 (d，J＝8.59Hz，1H)8.02(d，J＝8.59Hz，1H)

MS(APCI)m/e327(M+H)⁺   RT＝2.12min(方法B)

将浅褐色固体经HPLC纯化(SunFire C18柱，水/乙腈：97∶3至70∶30)， 得到微粉色固体形式的游离的苯胺(139mg，0.60mmol，13％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.08(d，J＝2.62Hz，1H)7.80(d， J＝8.48Hz，1H)7.02(dd，J＝8.48，2.62Hz，1H)6.22(s，1H)

MS(APCI)m/e231(M+H)⁺   RT＝1.56min(方法B)

N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-3-胺

将以上制备的胺(150mg，0.652mmol)、苄基溴(100μl，0.85mmol) 和碳酸铯320mg(0.98mmol)在2.6mL DMF中的混合液在微波炉中在 140℃加热。30分钟后转化完成，并将该深色的混悬液在乙酸乙酯和水之 间分配。将有机层用盐水洗涤，干燥，并浓缩，得到黄色树脂。纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至70∶30)，得到黄色固体(98mg，0.208 mmol，32％)。

mp81-84℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.18(d，J＝2.73Hz，1H)7.82(d， J＝8.59Hz，1H)7.31-7.43(m，5H)7.23-7.31(m，1H)7.03(dd，J＝8.59， 2.73Hz，1H)4.41(d，J＝5.86Hz，2H)

MS(APCI)m/e321(M+H)⁺   RT＝2.17min(方法B)

实施例28：N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

6-(苄基氨基)烟腈

将氨基烟腈(2.0g，16.8mmol)、苄基溴(2.6mL，21.8mmol)和碳酸 铯(7.7g，23.6mmol)在60mL DMF中的混合液在110℃搅拌2h。i.V.浓 缩，并用水/乙酸乙酯后处理，随后经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷 /乙酸乙酯100∶0至70∶30)，得到产物，为白色固体(161mg，0.77mmol， 4％)。

mp133-134℃

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)ppm8.40(d，J＝2.07Hz，1H)8.12(t， J＝5.55Hz，1H)7.70(d，J＝8.66Hz，1H)7.28-7.42(m，4H)7.16-7.28(m， 1H)6.61(br.s，1H)4.54(br.s，2H)

MS(APCI)m/e210(M+H)⁺   RT＝1.67min(方法B)

6-(苄基氨基)-N′-羟基吡啶-3-甲脒

将以上制备的产物(150mg，0.72mmol)溶于10mL EtOH中，并在室 温用过量的羟胺(0.21mL，3.58mmol，50％在水中)处理。搅拌过夜后， 将该混合液浓缩，得到166mg白色粗制产物，将其未经纯化地用于下一个 步骤中。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.34(s，1H)8.24(d，J＝2.34Hz， 1H)7.53-7.70(m，1H)7.14-7.40(m，6H)6.48(d，J＝8.59Hz，1H)5.65(s， 2H)4.37-4.55(m，2H)

MS(APCI)m/e243(M+H)⁺   RT＝0.53min(方法B)

N-苄基-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

将之前步骤制备的粗制的羟基吡啶-3-甲脒(145mg，0.57mmol)溶于 EtOH中，并用三氟乙酸酐(160μl，1.14mmol)和DIPEA(0.30mL，1.71 mmol)处理。在室温搅拌16h后该反应完成。用乙酸乙酯萃取后处理，经 色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至80∶30)，得到无色 残余物形式的产物(123mg，0.38mmol，67％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.09(d，J＝1.95Hz，1H)8.57 (dd，J＝8.59，2.34Hz，1H)7.79(d，J＝8.59Hz，1H)7.15-7.38(m，5H)5.18 (s，2H)

MS(APCI)m/e321(M+H)⁺   RT＝1.88min(方法B)

实施例29：N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

6-氟-N′-羟基吡啶-3-甲脒

将6-氟烟腈(1.00g，8.19mmol)在EtOH(14mL)中的溶液用过量的盐 酸羟胺(1.195g，17.2mmol)和溶于14mL水中的1.81g(13.1mmol)碳酸钾 处理。加入催化量的8-羟基醌(0.015g，0.106mmol)，并将得到的溶液在 回流下搅拌4h。减压除去大部分的乙醇，并将残余物水溶液用乙酸乙酯萃 取。将合并的有机层用盐水洗涤，并浓缩，得到产物，为橙色固体(1.53g， 7.43mmol，91％收率)，将其未经纯化地用于下一个步骤中。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.84(s，1H)8.51(d，J＝2.45Hz， 1H)8.21(td，J＝8.25，2.57Hz，1H)7.21(dd，J＝8.56，2.93Hz，1H)6.01(s，2 H)。

3-(6-氟吡啶-3-基)-5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑

将三氟乙酸酐(1.58mL，11.2mmol)滴加至之前的步骤中制备的粗制 的产物(1.153g，7.43mmol)溶于25mL THF中的混悬液中。在室温搅拌2 h后该反应完成。除去THF，并将残余物混悬于氢氧化钠水溶液中，并用 乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机层，i.V.浓缩后，得到用于下一个步 骤的足够纯的棕色、油性固体状的标题化合物(1.32g，5.66mmol，76％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.94(d，J＝2.69Hz，1H)8.64 (ddd，J＝8.62，7.64，2.57Hz，1H)7.49(dd，J＝8.56，2.20Hz，1H)

ESIMS m/e234(M+H)⁺   RT＝2.10min(方法D)

N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

将以上制备的氟化物(50mg，0.214mmol)、1-苯基乙胺(33μL，0.257 mmol)和DIPEA(112μL，0.643mmol)在70μL正丁醇中的溶液在封闭管 中在100-105℃搅拌16h。将该反应混合液浓缩，并将残余物溶于乙酸乙 酯/水中。将有机层浓缩，并将粗制的物质经HPLC(SunFire C18柱，水/ 乙腈95∶5至0∶100)纯化。经由SPE PL-HCO₃MP-树脂柱(Varian)过滤，得 到游离碱(15.1mg，0.452mmol，21％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.52-8.63(m，1H)7.83-7.97 (m，2H)7.36-7.43(m，2H)7.28-7.36(m，2H)7.17-7.25(m，1H)6.59- 6.72(m，1H)5.05-5.27(m，1H)1.47(d，J＝7.09Hz，3H)。

ESIMS m/e335(M+H)⁺   RT＝1.97min(方法D)

实施例30：N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

6-((吡啶-3-基甲基)氨基)烟腈

将吡啶-3-基甲胺(0.40mL，3.93mmol)加入6-氯烟腈(300mg，2.165 mmol)、碳酸钾(748mg，5.41mmol)和催化量的碘化铜(I)在5.5mL DMF 中的混合液中。将反应小瓶置于微波炉中，并在120℃搅拌30min。在真 空下除去DMF，并将残余物在乙酸乙酯和水之间分配。蒸发有机层，得到 深绿色粗制产物，将其经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯 100∶0至70∶30)，得到淡粉色结晶形式的纯产物(250mg，1.177mmol，54 ％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.53(s，1H)8.42-8.46(m，1H) 8.40(d，J＝1.69Hz，1H)8.14(t，J＝5.65Hz，1H)7.61-7.80(m，2H)7.34 (dd，J＝7.72，4.89Hz，1H)6.61(d，J＝8.66Hz，1H)4.56(d，J＝5.27Hz，2H)

MS(APCI)m/e211(M+H)⁺   RT＝0.43min(方法B)

N′-羟基-6-((吡啶-3-基甲基)氨基)吡啶-3-甲脒

将以上制备的中间体(197mg，0.937mmol)溶于8mL EtOH中，并在 室温用过量的羟胺(0.6mL，10mmol，50％在水中)处理。将溶液在室温搅 拌24h后，将该白色混悬液过滤掉，并用乙醚冲洗。收率：140mg(0.547 mmol，59％)微粉色粉末。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.37(s，1H)8.54(s，1H)8.42(d， J＝4.52Hz，1H)8.19-8.29(m，1H)7.70(d，J＝7.91Hz，1H)7.63(dd， J＝8.75，2.16Hz，1H)7.27-7.37(m，2H)6.50(d，J＝8.66Hz，1H)5.67(s，2 H)4.51(d，J＝6.02Hz，2H)

MS(APCI)m/e244(M+H)⁺   RT＝020min(方法R)

N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

将最后步骤中制备的化合物(140mg，0.576mmol)在5.5ml THF中的 溶液用0.3mL(2.13mmol)三氟乙酸酐处理。将该反应混合液在室温搅拌 1.5h。将挥发物蒸发，并将残余物经色谱纯化(Biotage Isolera Four，二氯 甲烷/甲醇100∶0至95∶5)，在用乙醚洗涤后，得到产物，为米白色固体(140 mg，0.392mmol，90％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.74(br.s，1H)8.63(br.s，2H) 8.13(br.s，2H)7.99(d，J＝8.09Hz，1H)7.70(br.s，1H)6.76(d，J＝8.47Hz， 1H)4.68(br.s，2H)

MS(APCI)m/e322(M+H)⁺   RT＝1.48min(方法B)

类似于实施例30制备实施例31和32

实施例31：N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.78(d，J＝6.40Hz，2H)8.58(s， 1H)8.25(t，J＝5.65Hz，1H)7.96-8.09(m，1H)7.86(d，J＝6.02Hz，2H) 6.83(d，J＝8.47Hz，1H)4.83(d，J＝5.65Hz，2H)

MS(APCI)m/e322(M+H)⁺   RT＝1.50min(方法B)

实施例32：N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.71(br.s，1H)8.62(br.s，1H) 8.31(d，J＝7.15Hz，1H)8.14(br.s，1H)8.00(d，J＝8.09Hz，1H)7.79(d， J＝7.53Hz，1H)6.77(d，J＝8.66Hz，1H)4.56-4.76(m，2H)2.65(br.s，3 H)

MS(APCI)m/e336(M+H)⁺   RT＝1.54min(方法B)

实施例33：N-苄基-3-氯-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

6-(苄基氨基)-5-氯烟腈

将6-氨基-5-氯烟腈(200mg，1.30mmol)、苄基溴(200μL，1.70mmol) 和碳酸铯(636mg，1.95mmol)的混合液在4mL DMF中在微波炉中在 140℃搅拌30分钟。i.V.浓缩，并用水/乙酸乙酯后处理，随后经色谱纯化 (Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至70∶30)，得到产物，为白色 固体(150mg，0.62mmol，48％)。

mp112-114℃

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.39(d，J＝1.88Hz，1H)8.17(t， J＝6.15Hz，1H)8.11(d，J＝2.01Hz，1H)7.17-7.33(m，5H)4.65(d，J＝6.27 Hz，2H)

MS(APCI)m/e244，246(M+H)⁺   RT＝2.15min(方法B)

6-(苄基氨基)-5-氯-N′-羟基吡啶-3-甲脒

将以上制备的产物(67mg，0.275mmol)溶于7mL EtOH中，并在室 温用过量的羟胺(81μL，1.37mmol，50％在水中)处理。搅拌18h后将该 混合液浓缩，得到75mg无色油状物，将其未经纯化地用于下一个步骤中。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.51(s，1H)8.23(d，J＝1.95Hz， 1H)7.82(d，J＝1.95Hz，1H)7.06-7.42(m，6H)5.78(s，2H)4.62(d， J＝6.25Hz，2H)

MS(APCI)m/e277，279(M+H)⁺   RT＝1.43min(方法B)

N-苄基-3-氯-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

将在以上步骤中制备的粗制的产物(65mg，0.223mmol)溶于5mL THF中，并用三氟乙酸酐(63μl，0.44mmol)和DIPEA(117μL，0.67mmol) 处理。将该反应混合液在室温搅拌过夜。用乙酸乙酯/饱和的碳酸氢钠水溶 液萃取后处理，随后经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯 100∶0至80∶20)，得到黄色树脂形式的所需产物(66mg，0.186mmol，83％ 历经2步骤)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.61(s，1H)8.12(s，1H)7.99 (br s，1H)7.32-7.22(m，5H)4.70(br s，2H)

MS(APCI)m/e355，357(M+H)⁺   RT＝2.52min(方法B)

类似于实施例33制备实施例34至38。

实施例34：(R)-3-氯-N-(1-苯基乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.52-8.65(m，1H)8.11(d， J＝1.88Hz，1H)7.56(d，J＝8.09Hz，1H)7.42(d，J＝7.53Hz，2H)7.31(t， J＝7.62Hz，2H)7.16-7.24(m，1H)5.44(quin，J＝7.25Hz，1H)1.56(d， J＝7.15Hz，3H)

MS(APCI)m/e369，371(M+H)⁺   RT＝2.65min(方法B)

实施例35：3-氯-N-(吡啶-4-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δ8.57(d，J＝1.69Hz，1H)8.47(d， J＝4.52Hz，2H)8.16(d，J＝1.88Hz，1H)8.10(t，J＝5.93Hz，1H)7.28(d， J＝5.08Hz，2H)4.69(d，J＝6.02Hz，2H)

MS(APCI)m/e356，358(M+H)⁺   RT＝1.72min(方法B)

实施例36：3-氯-N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.51-8.69(m，1H)8.48(d， J＝5.65Hz，2H)8.08-8.24(m，1H)7.70(d，J＝7.91Hz，1H)7.39(d，J＝5.65 Hz，2H)5.39(t，J＝7.15Hz，1H)1.56(d，J＝7.15Hz，3H)

MS(APCI)m/e370，372(M+H)⁺   RT＝1.77min(方法B)

实施例37：3-氯-N-(吡啶-3-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.61(d，J＝1.88Hz，1H)8.56(s， 1H)8.43(d，J＝3.39Hz，1H)8.13(d，J＝1.88Hz，1H)8.08(t，J＝6.02Hz，1 H)7.72(d，J＝7.72Hz，1H)7.32(dd，J＝7.72，4.89Hz，1H)4.69(d，J＝6.02 Hz，2H)

MS(APCI)m/e356，358(M+H)⁺   RT＝1.72min(方法B)

实施例38：3-氯-N-((6-甲基吡啶-3-基)甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)ppm8.61(br.s，1H)8.43(br.s，1H) 8.12(br.s，1H)8.03(br.s，1H)7.61(br.s，1H)7.09-7.27(m，1H)4.64 (br.s，2H)2.41(br.s，3H)

MS(APCI)m/e370，372(M+H)⁺   RT＝1.81min(方法B)

实施例39：3-氯-N-(吡啶-2-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

5-氯-6-((吡啶-2-基甲基)氨基)烟腈

将催化量的醋酸钯(II)(7.8mg，0.035mmol)和外消旋的BINAP(23 mg，0.035mmol)加入脱气的甲苯(5mL)中。在室温搅拌5分钟后加入5，6- 二氯烟腈(200mg，1.156mmol)和2-吡啶甲基胺(166μL，1.619mmol)。在 室温继续搅拌10分钟，然后加入碳酸钾(811mg，5.78mmol)，并将温度 升至100℃达12h。将得到的深色混悬液浓缩i.V.，并将粗制的物质经色 谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至60∶40)，得到所需产 物，为黄色泡沫(115mg，0.47mmol，41％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.51(d，J＝4.69Hz，1H)8.39(d， J＝1.95Hz，1H)8.07-8.21(m，2H)7.67-7.80(m，1H)7.25(t，J＝7.22Hz，2 H)4.74(d，J＝5.86Hz，2H)

MS(APCI)m/e245(M+H)⁺   RT＝0.80min(方法B)

5-氯-N′-羟基-6-((吡啶-2-基甲基)氨基)吡啶-3-甲脒

将以上制备的腈(100mg，0.409mmol)溶于2mL EtOH中，并在室温 用过量的羟胺(61μL，2.04mmol，50％在水中)处理。将该黄色溶液搅拌 12h后，将挥发物除去，留下白色固体(100mg，0.360mmol，88％)，将 其未经纯化地用于下一个步骤中。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm9.51(s，1H)8.51(d，J＝4.30Hz， 1H)8.22(d，J＝1.95Hz，1H)7.84(d，J＝1.95Hz，1H)7.65-7.77(m，1H) 7.35(t，J＝5.66Hz，1H)7.16-7.29(m，2H)5.78(s，2H)4.69(d，J＝5.47Hz， 2H)

MS(APCI)m/e356(M+H)⁺   RT＝1.75min(方法B)

3-氯-N-(吡啶-2-基甲基)-5-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

将之前的步骤制备的化合物(100mg，0.36mmol)溶于2mL THF中， 并用三氟乙酸酐(70μL，1.08mmol)处理。将小瓶置于微波炉中，并在室 温搅拌12h。用乙酸乙酯、水和碳酸氢盐溶液后处理，i.V.浓缩有机层后， 得到粗制产物，将其经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯 100∶0至65∶35)，得到标题化合物，为白色固体(15mg，0.042mmol，12％ 历经2步骤)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.60(d，J＝1.69Hz，1H)8.52(d， J＝4.14Hz，1H)8.17(d，J＝1.69Hz，1H)8.00(br.s.，1H)7.74(s，1H)7.23- 7.31(m，2H)4.78(d，J＝5.46Hz，2H)

MS(APCI)m/e356(M+H)⁺   RT＝1.75min(方法B)

实施例40：N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3-胺

3-氯-6-碘哒嗪

将二氯哒嗪(5.0g，32.9mmol)溶于24mL47％氢碘酸中。加入碘化钠 (6.4g，42.8mmol)，并将该混合液在40℃搅拌24h。将该浓稠的黄色混 悬液冷却，并倾入碎冰(100g)和浓氢氧化钠溶液(30mL)的混合物中。将该 产物用二氯甲烷萃取，并将有机层浓缩i.V.。将残余物溶于少量的乙醚中。 通过加入石油醚可将标题化合物结晶。收率：6.50g(27.0mmol，82％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.21(d，J＝8.98Hz，1H)7.68(d， J＝8.98Hz，1H)

MS(APCI)m/e241，243(M+H)⁺)⁺   RT＝1.02min(方法B)

6-氯哒嗪-3-甲腈

将3-氯-6-碘哒嗪(2.75g，11.44mmol)溶于15mL乙腈中，并处理用 氰化铜(I)(2.05g，22.88mmol)。将该混合液在微波炉中在160℃加热30 分钟。将该黑色反应混合液加入100mL二氯甲烷中，并经由Hyfio过滤。 将有机相浓缩，并经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/二氯甲烷100∶0 至30∶70)，得到产物，为白色固体(1.21g，8.67mmol，76％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.46(d，J＝8.98Hz，1H)8.28(d， J＝8.98Hz，1H)

MS(APCI)m/e138，140(M+H)⁺   RT＝0.58min(方法B)

6-(苄基氨基)哒嗪-3-甲腈

将6-氯哒嗪-3-甲腈(0.72g，5.16mmol)溶于17mL乙腈中，并加入苄 基溴(0.75mL，6.86mmol)和DIPEA(1.8mL，10.3mmol)。将该混合液在 微波炉中在20℃加热30分钟。用水/乙酸乙酯对该微橙色溶液后处理，得 到橙色固体，将其经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0 至60∶40)，得到产物，为白色固体(640mg，4.00mmol，77％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.32(br.s，1H)7.73(d，J＝9.37 Hz，1H)7.30-7.43(m，4H)7.22-7.30(m，1H)6.94(d，J＝9.37Hz，1H) 4.65(br.s，2H)

MS(APCI)m/e211(M+H)⁺   RT＝1.77min(方法B)

6-(苄基氨基)-N′-羟基哒嗪-3-甲脒

将6-(苄基氨基)哒嗪-3-甲腈(340mg，1.62mmol)溶于15mL EtOH中， 并在室温用过量的羟胺(1.0mL，17mmol，50％在水中)处理。在室温将该 溶液搅拌，逐渐生成白色混悬液。5h转化完成。将该白色混悬液过滤掉， 并i.V.干燥。收率：335mg(1.35mmol，83％)白色固体。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.83(s，1H)7.66(t，J＝5.45Hz， 1H)7.61(d，J＝9.49Hz，1H)7.29-7.38(m，4H)7.21-7.27(m，1H)6.87(d， J＝9.49Hz，1H)5.81(br.s，2H)4.59(d，J＝5.85Hz，2H)

MS(APCI)m/e244(M+H)⁺   RT＝0.85min(方法B)

N-苄基-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3-胺

将以上步骤制备的产物(200mg，0.82mmol)溶于4mL吡啶中，并用 三氟乙酸酐(0.7mL，5.0mmol)处理，产生剧烈的反应。将该混合液在微 波炉中在90℃搅拌30分钟，随后用水/饱和的碳酸氢钠溶液和乙酸乙酯后 处理。将合并的有机层用水和盐水洗涤。将粗制的产物经色谱纯化(Biotage  Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至70∶30)，得到白色固体形式的所需产 物(78mg，0.243mmol，30％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.17(br.s，1H)7.89(d，J＝9.41 Hz，1H)7.37-7.42(m，2H)7.32-7.37(m，2H)7.24-7.29(m，1H)7.03(d， J＝9.41Hz，1H)4.64-4.74(m，2H

MS(APCI)m/e322(M+H)⁺   RT＝1.87min(方法B)

类似于实施例40制备实施例41至43。

实施例41：(R)-N-(1-苯基乙基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.48(d，J＝8.91Hz，1H)7.83(d， J＝8.91Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)5.91(q，J＝6.94Hz，1H)1.54-1.72(m， 3H)

MS(APCI)m/e336(M+H)⁺   RT＝2.37min(方法B)

实施例42：(S)-N-(1-苯基乙基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.48(d，J＝8.91Hz，1H)7.83(d， J＝8.91Hz，1H)7.26-7.38(m，5H)5.91(q，J＝6.94Hz，1H)1.54-1.72(m， 3H)

MS(APCI)m/e336(M+H)⁺   RT＝2.35min(方法B)

实施例43：N-(吡啶-4-基甲基)-2-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)嘧啶-5-胺(TFA盐)

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.74(d，J＝4.89Hz，2H)8.41(br. s，1H)7.92-8.03(m，1H)7.79(d，J＝5.08Hz，2H)7.17(d，J＝9.22Hz，1H) 4.90(d，J＝5.46Hz，2H)

MS(APCI)m/e323(M+H)⁺   RT＝1.34min(方法B)

实施例44：(R)-N-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-三氟甲基-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

(R)-6-((1-(吡啶-4-基)乙基)氨基)烟腈

将(R)-1-(吡啶-4-基)乙胺(500mg，2.56mmol)加入6-氯烟腈(300mg， 2.165mmol)、碳酸钾(1.20g，8.7mmol)和催化量的碘化铜(I)(25mg，0.13 mmol)在10mL DMF中的混合液中。将反应小瓶置于微波炉中，并在120℃ 搅拌18h。控制反应得到显示完全转化的红色混悬液。将该混合液冷却， i.V.除去DMF，并将残余物在乙酸乙酯和水之间分配。蒸发有机层，得到 粗制产物，将其经色谱纯化(Biotage Isolera Four，庚烷/乙酸乙酯100∶0至 70∶30)，得到棕红色固体形式的纯产物(129mg，0.575mmol，27％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm8.44-8.53(m，2H)8.32(d， J＝1.96Hz，1H)8.14(d，J＝7.34Hz，1H)7.71(dd，J＝8.93，2.32Hz，1H) 7.34(m，2H)6.52-6.73(br.d.，1H)5.10(br.m.，1H)1.45(d，J＝7.10Hz，3 H)

MS(APCI)m/e225(M+H)⁺   RT＝0.51min(方法B)

(R)-N′-羟基-6-((1-(吡啶-4-基)乙基)氨基)吡啶-3-甲脒

将以上制备的中间体(90mg，0.36mmol)溶于4mL EtOH中，并在室 温用过量的羟胺(0.22mL，3.6mmol，50％在水中)处理。将该溶液在室温 搅拌过夜后，将该溶液浓缩i.V.。收率：100mg(0.35mmol，99％)米白色 固体。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm9.35(s，1H)8.46(d，J＝4.71Hz， 2H)8.15(s，1H)7.61(d，J＝8.66Hz，1H)7.30-7.37(m，3H)6.50(d，J＝8.66 Hz，1H)5.64(br.s.，2H)5.02(t，J＝6.87Hz，1H)1.42(d，J＝6.78Hz，3H)。

MS(APCI)m/e258(M+H)⁺   RT＝0.18min(方法B)

R)-N-(吡啶-4-基)乙基)-5-(5-三氟甲基-1，2，4-二唑-3-基)吡啶-2-胺

将最后步骤中制备的化合物(40mg，0.155mmol)在2ml THF中的溶 液用110μL(0.77mmol)三氟乙酸酐处理。将该反应混合液在室温搅拌18 h。将挥发物蒸发，并将残余物经色谱纯化(Biotage Isolera Four，二氯甲 烷/甲醇100∶0至95∶5)，在用乙醚洗涤后，得到产物，为米白色固体(140mg， 0.392mmol，90％)。

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.77(d，J＝6.21Hz，2H)8.51(s， 1H)8.19(d，J＝6.59Hz，1H)8.01(dd，J＝8.85，2.26Hz，1H)7.90(d，J＝6.02 Hz，2H)6.81(d，J＝8.28Hz，1H)5.22-5.34(m，1H)1.52(d，J＝6.96Hz，3 H)

MS(APCI)m/e336(M+H)⁺   RT＝1.59min(方法B)

类似于实施例40制备实施例45。

实施例45：(R)-N-(1-(吡啶-4-基)乙基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)哒嗪-3-胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆)δppm8.49(d，J＝5.83Hz，2H)8.19(br. d.，1H)7.88(d，J＝9.41Hz，1H)7.39(d，J＝5.83Hz，2H)7.04(d，J＝9.41Hz， 1H)5.25(br.m.，1H)1.51(d，J＝6.96Hz，3H)

MS(APCI)m/e337(M+H)⁺   RT＝1.33min(方法B)

类似于实施例26制备实施例46。

实施例46：(R)-N-(1-(苄基(甲基)氨基)丙-2-基)-6-(5-(三氟甲基)-1，2，4-二唑-3-基)烟酰胺

¹H NMR(600MHz，DMSO-d₆，在100℃记录以避免看到单个旋转异 构体的信号)δppm9.39(s，1H)9.36(s，1H)8.85(d，J＝7.70Hz，1H)7.50 (d，J＝3.30Hz，2H)7.42(dd，J＝3.91，1.59Hz，3H)4.47-4.73(m，1H)4.36 (d，J＝13.08Hz，1H)4.22(d，J＝13.08Hz，1H)3.28(dd，J＝12.96，9.05Hz，1 H)3.17(dd，J＝13.00，9.00Hz，1H)2.75(s，3H)1.31(d，J＝6.60Hz，3H

MS(APCI)m/e421(M+H)⁺   RT＝1.65min(方法B)。