黄麻表达序列标签微卫星DNA标记

摘要

本发明涉及一种分子标记技术，具体涉及一种黄麻表达序列标签微卫星DNA分子标记。其步骤包括，开发新的微卫星位点，扩增微卫星位点的引物序列以及微卫星位点多态性分析。本发明的特征是，从GenBank公共数据库中下载黄麻表达序列标签，分离鉴定黄麻66个新的微卫星标记，筛选其中多态性丰富的10个微卫星标记CcSSR008、CcSSR013、CcSSR016、CcSSR024、CcSSR029、CcSSR040、CoSSR049、CoSSR050、CoSSR052和CoSSR053。本发明提供了66个黄麻的新的微卫星位点及扩增这66个微卫星位点的引物序列和扩增方法，可应用于黄麻属不同种间的遗传多样性分析，遗传连锁图谱构建以及分子标记辅助育种等研究。

说明书

技术领域

 本发明涉及一种分子标记技术，具体涉及一种黄麻表达序列标签微卫星DNA分子标记。

背景技术

微卫星（又称为简单重复序列，SSR）是由1-6个核苷酸组成的短序列串联重复多次而组成的一段DNA；其中，最常见的是二核苷酸和三核苷酸重复单元，如(CT)n，(AT)n，(ACC)n、(CGA)n和(AGA)n。由于微卫星侧翼序列相对保守，根据其侧翼序列设计引物，可用PCR 扩增出微卫星位点的序列。由于微卫星中重复单元的重复次数不同，因而扩增出的微卫星序列的长度呈现多态性。微卫星序列广泛存在于真核生物基因组中，而且随机分布，具有多态性较高，重复性和稳定性好等特点，是十分有效的分子标记，被广泛应用于遗传图谱构建、基因定位、遗传关系分析、品种鉴定等领域。如用微卫星标记分析黄麻的起源演化关系 (Kundu 等，2013，Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology，22 ： 372-381)、用微卫星 DNA 标记进行猪品种分类的专利申请“适于猪品种分类的猪微卫星DNA标记”（公开号CN1370834A）。

黄麻是椴树科(Tiliaceae)黄麻属(Corchorus)一年生草本植物，是重要韧皮纤维作物。在世界上黄麻产量与种植面积仅次于棉花，主要在亚洲(印度、孟加拉、中国和泰国)和拉丁美洲种植。生产上栽培的有长果种(Corchorus olitorius L.)和圆果种(Corchorus capsularis L.)，染色体数均为2n=2X=14。黄麻纤维细软、强力大、吸湿性好、散水快，可纺性好，用途十分广阔。

至今在黄麻基因组中已找到的近1000个微卫星标记，与此同时，黄麻微卫星DNA在基因定位和遗传多样性分析中的应用也迅速铺开，有关黄麻微卫星标记的专利争夺正逐步展开。但是，我国黄麻微卫星的研究仍十分有限，仅极少数实验室开始了有关工作。鉴于黄麻微卫星数目多，还有大量的未被发现，且它们具有重要的理论和应用价值，特别是GenBank公共数据库中还可能存在大量的微卫星位点。因此，在我国开展黄麻的微卫星的分离、鉴定和应用研究，开发具有我国知识产权的微卫星标记显得十分迫切和必要。

发明内容

 本发明的目的在于：分离和鉴定黄麻表达序列标签微卫星DNA标记，建立黄麻微卫星DNA的技术体系并利用这些分子标记进行黄麻遗传多样性分析。

本发明实现的技术方案：

所述黄麻微卫星DNA标记编号CcSSR001-CcSSR045、CoSSR046-CoSSR066，所对应的黄麻微卫星DNA标记引物序列为SEQ ID NO.1-132所示。

所述黄麻微卫星DNA标记编号CcSSR001-CcSSR045为圆果种黄麻EST-SSR，CoSSR046-CoSSR066为长果种黄麻EST-SSR。

所述的黄麻微卫星DNA标记编号CcSSR001-CcSSR045、CoSSR046-CoSSR066，其对应的表达序列标签GenBank ID 为112136062，112136096，112136110，112136120，112136121，112136129，194395676，194395679，194395680，194395697，194395700，194395710，194395722，194395729，194395733，194395738，194395740，194395754，194395756，194395782，194395791，194395793，194395795，194395797，194395807，194395858，194395868，194395881，222876067，222876073，222876092，222876097，222876103，222876143，260098990，260099036，260099099，365732691，365732703，365732731，375150553，375150558，375150561，375150562，375150586，311146658，311157368，311157371，150174518，1112000549，1112000555，1112000578，1112000581，1112000583，1112000590，1112000595，1112000596，1112000618，1112008416，1112008423，1112008466，1112008468，1112008500，1112008512，1112000586，1112000637。

从GenBank公共数据库中下载黄麻表达序列标签，利用SSRPrimer软件对其进行SSR位点查找，利用Primer 3.0软件设计SSR引物，利用这些SSR引物对黄麻属2个种6个不同类型材料，即长果近缘野生种黄麻、长果野生种黄麻、长果栽培种黄麻、圆果栽培种黄麻和圆果野生种黄麻，进行扩增。通过1.5%琼脂糖凝胶电泳研究这些SSR引物的PCR扩增特点。得到66个微卫星标记，确定了10个多态性丰富的微卫星标记CcSSR008、CcSSR013、CcSSR016、CcSSR024、CcSSR029、CcSSR040、CoSSR049、CoSSR050、CoSSR052和CoSSR053。

本发明的具体步骤是：

(1)黄麻表达序列标签SSR引物开发：从GenBank公共数据库(http://misuse.ncbi.nih.gov/)中下载黄麻表达序列标签EST(expressed sequence tags) 838条。利用网上的SSRPrimer工具(http://hornbill.cspp.latrobe.edu.au/ ssrdiscovery.html)搜索这些序列所包含的SSR。其筛选SSR的标准如下：二核苷酸重复次数>6次，三核苷酸重复次数>4次，四核苷酸重复次数>3次，五核苷酸重复次数>2次。利用Primer3软件对其进行SSR位点查找，并设计66了对引物。其中编号为CcSSR001-CcSSR045为圆果种黄麻EST-SSR，CoSSR046-CoSSR066为长果种黄麻EST-SSR，如表1所示。

表1  黄麻EST-SSR的引物编号及来源

(2) 不同黄麻品种的基因组DNA提取：采用CTAB法提取黄麻属2个种6个不同类型材料基因组DNA，这6个材料包括长果近缘野生种黄麻、长果野生种黄麻、长果栽培种黄麻、圆果栽培种黄麻和圆果野生种黄麻（表2）。

表2  供试黄麻种质资源的品种名称及来源

(3) SSR的PCR反应及电泳：PCR反应体积10 μL，反应体系组成为50 ng·μL^–1 DNA 2.0 μL，10 μmol·μL^–1引物0.5 μL，0.5 U Taq酶0.1 μL，10 mmol·L^–1 dNTPs 0.2 μL，10×PCR buffer 1 μL，50 mmol·L^–1 Mg²⁺ 0.8 μL，dd H₂O 5.4 μL。PCR反应程序为：94℃预变性3 min；94℃变性30 sec, 60℃退火30 sec, 72℃延伸45 sec, 共10个循环，每个循环退火温度降低0.5℃；94℃变性30 sec，55℃退火30 sec，72℃延伸45 sec，共35个循环；最后72℃延伸10 min，10℃保存10 min。Taq酶、dNTP等试剂购自上海生工生物技术有限公司，电泳方法为1.5%琼脂糖凝胶电泳。

(5) SSR的多态性和扩增效率分析：利用上述66对SSR引物对上述黄麻6个不同类型材料进行扩增。SSR的多态性和扩增效率如表3和图1所示。64对引物(97.0%)得到强且清晰的PCR产物，42对引物(63.6%)至少在2个材料间存在遗传差异，表现出多态性。其中，10对引物在这6个材料中表现出种间和种内多态性，如：CcSSR008、CcSSR013、CcSSR016、CcSSR024、CcSSR029、CcSSR040、CoSSR049、CoSSR050、CoSSR052和CoSSR053等。这些引物表现出丰富的多态性。

附图说明

图1 SSR标记(CoSSR050- CoSSR053)对黄麻6个不同类型材料扩增结果的电泳图，其中1: 黄麻179；2: 爱店野生黄麻；3:甜麻；4:宽叶长果；5：琼粤青；6：马里野生长果；M: DL2000。

图2 黄麻遗传多样性分析。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步的说明，其目的仅在于更好理解本发明的内容而非限制本发明的保护范围。

实施例1：开发了66个适用于黄麻遗传多样性分析的新微卫星标记。这66个微卫星标记编号分别为：CcSSR001-CcSSR045(圆果种黄麻EST-SSR)，CoSSR046-CoSSR066(长果种黄麻EST-SSR)，如表1所示。

实施例2：确定出10个多态性丰富的微卫星标记CcSSR008、CcSSR013、CcSSR016、CcSSR024、CcSSR029、CcSSR040、CoSSR049、CoSSR050、CoSSR052和CoSSR053。如表3和图1所示。

表3  黄麻EST-SSR的多态性和扩增效率

ABCD表示电泳带型清晰等级。

实施例3：利用上述开发的微卫星标记分析黄麻属的遗传多样性分析。供试材料为来自11个国家和地区的黄麻长果近缘野生种黄麻、长果野生种黄麻、长果栽培种黄麻、圆果栽培种黄麻和圆果野生种黄麻共48份（表4）。利用NTsys软件对48份供试黄麻材料进行遗传相似系数计算。其中计算方法是非加权聚类分析（UPGMA），读带采取0、1方式，0表示无带，1表示有带。聚类分析结果显示，这10个微卫星标记能很好地用于黄麻的遗传多样性分析。聚类分析结果如图2所示，将48份黄麻材料划分为两大类，一类为圆果种，一类为长果种。

表 4  供试黄麻种质资源的品种名称及来源

本发明的积极效果如下：

(1)分离并鉴定了66个黄麻的微卫星标记，经在国际基因数据库中检索，证明为新的微卫星DNA标记。

(2)经将上述微卫星标记用于黄麻多态性分析，发现64对引物(97.0%)得到强且清晰的PCR产物，42对引物(63.6%)至少在2个材料间存在遗传差异，表现出多态性。其中，10对引物在这6个材料中表现出种间和种内多态性，如：CcSSR008、CcSSR013、CcSSR016、CcSSR024、CcSSR029、CcSSR040、CoSSR049、CoSSR050、CoSSR052和CoSSR053等。这些引物表现出丰富的多态性。多态性分析和扩增效率结果如表3和图1所示。

(3)经将上述微卫星标记用于黄麻属的遗传多样性分析，证明这66个微卫星标记适用于黄麻遗传多样性研究，聚类分析结果如图2所示。

序列表

                         SEQUENCE LISTING

 

<110>  福建农林大学

 

<120>  黄麻表达序列标签微卫星DNA标记

 

<130>  132

 

<160>  132  

 

<170>  PatentIn version 3.3

 

<210>  1

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  1

tgaaaggagc cgccatagat ctcc                                            24

<210>  2

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  2

ggatctttcg agctctggag tctgc                                           25

<210>  3

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  3

tgcccagccc tcagagccaa                                                 20

<210>  4

<211>  27

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  4

acagaacatg catccactca tatggac                                         27

<210>  5

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  5

gcccccaagc ttcacctcag c                                               21

<210>  6

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  6

tggttctcag cccttccatt cca                                             23

<210>  7

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  7

tcaggcgccg gagtttgtgc                                                 20

<210>  8

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  8

cacggggcta tggacgggga                                                 20

<210>  9

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  9

ggccggagga ggaggtggag                                                 20

<210>  10

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  10

tcaggcgccg gagtttgtgc                                                 20

<210>  11

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  11

cccactcttc ttgagtccag ctcca                                           25

<210>  12

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  12

tgtcgtccaa gcaaggtggc a                                               21

<210>  13

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  13

tccgcagcaa ccccaccaac                                                 20

<210>  14

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  14

acacaaggga gcaagagcta acaaca                                          26

<210>  15

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  15

ccacacccat gagcaactcc cc                                              22

<210>  16

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  16

cccacacaat attttaccag ggggca                                          26

<210>  17

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  17

ggctgcttcc tcttagagac caca                                            24

<210>  18

<211>  27

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  18

acatggcttg gttggttctt tctttct                                         27

<210>  19

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  19

tgtcgacacc ccttttggag ca                                              22

<210>  20

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  20

cgaccatcca cactgcaccc c                                               21

<210>  21

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  21

ccgccggttt cttaccatcc tcc                                             23

<210>  22

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  22

tcccggcgga ggaaacctga                                                 20

<210>  23

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  23

cgaccgcgcc ctcgaaagtg                                                 20

<210>  24

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  24

gccaccaccg tttcctcctc c                                               21

<210>  25

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  25

cccagtcgat gaaccgtgtt ggc                                             23

<210>  26

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  26

tggatcctgc ctgtacatga accca                                           25

<210>  27

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  27

tggcaccggt gatcctcttt gga                                             23

 

 

<210>  28

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  28

cccctgggga tctcttcttc cttcc                                           25

<210>  29

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  29

gctttgtgat tgtttcaaag gtggct                                          26

<210>  30

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  30

aggcattagg ccttgtagag aaacca                                          26

<210>  31

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  31

ggggcaacca aaccaaatga gaagc                                           25

<210>  32

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  32

agcgttcagc ttgttcagcg agt                                             23

<210>  33

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  33

tcgatgtcat aaggagccgt gcc                                             23

<210>  34

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  34

atgaactccc tgaacaacaa cccaaa                                          26

 

<210>  35

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  35

agtggcaatg caggtgacgg t                                               21

<210>  36

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  36

gccccatgat cagacggctc t                                               21

<210>  37

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  37

ccaccaccac caccaccagc                                                 20

<210>  38

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  38

ggcctgcttc tgagccctgc                                                 20

<210>  39

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  39

gggttcagtc cgttctggac tctt                                            24

<210>  40

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  40

cgtcggaaat ggtttttgat tgacgg                                          26

<210>  41

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  41

gggggtgatt tttagggttt gagtga                                          26

 

 

<210>  42

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  42

gccttcccaa gggtgacgcc                                                 20

<210>  43

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  43

tcgaagtctt acgcttgcca cct                                             23

<210>  44

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  44

gacgtcgtcg tccggaccct                                                 20

<210>  45

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  45

ggacaactct catgttccca cgca                                            24

<210>  46

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  46

aagcccccga ccggttttcg                                                 20

<210>  47

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  47

ggggattacc gatgccgcga                                                 20

<210>  48

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  48

caccacccac caccgcacaa                                                 20

<210>  49

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  49

tgccagctct aaggacaggt tca                                             23

<210>  50

<211>  27

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  50

agcaagttct aagttcccaa gttggtt                                         27

<210>  51

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  51

gggcacgctt tcgcctgtct                                                 20

<210>  52

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  52

accaatccac ccagcttcaa agtcc                                           25

<210>  53

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  53

acagccgtgc atggcgaagt                                                 20

<210>  54

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  54

tgaggcttgc aaacaggagg gt                                              22

<210>  55

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  55

tgtcgtccaa gcaaggtggc a                                               21

<210>  56

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  56

cccactcttc ttgagtccag ctcca                                           25

<210>  57

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  57

ccagagcaac tgcttctgaa agcg                                            24

<210>  58

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  58

ccgattgtat aaagtgcaag gccga                                           25

<210>  59

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  59

gccggcaagc agctcgaaga                                                 20

<210>  60

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  60

actggaggac ggcgagcttg a                                               21

<210>  61

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  61

gccacaccca tgagcaactc cc                                              22

<210>  62

<211>  27

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  62

ccagggggca tgcaaatttt tcaatca                                         27

<210>  63

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  63

aggaccggat tgttccacgc a                                               21

<210>  64

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  64

tgctgagctt ctcctcagct ct                                              22

<210>  65

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  65

gctcggggcc gactcgttac                                                 20

<210>  66

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  66

gcccctgccg ctcccaattt                                                 20

<210>  67

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  67

gccgagctcc aacgtggcaa                                                 20

<210>  68

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  68

ggcggcggcg ttgttgtttt                                                 20

<210>  69

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  69

gcccgggcag gtactagggt                                                 20

<210>  70

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  70

agcactcctt tcttctcgtg acct                                            24

 

 

<210>  71

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  71

ccgcccgggc aggtactact                                                 20

<210>  72

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  72

tcctcctctc cttcctcccc tt                                              22

<210>  73

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  73

tgtctcgcct tgcttttcag ggc                                             23

 

<210>  74

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  74

gcaggtacta gacccgccga                                                 20

 

 

<210>  75

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  75

ggcccactga ttctcccgac g                                               21

<210>  76

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

<400>  76

tgctgatttc gccagggtcg                                                 20

 

<210>  77

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  77

tgctaagcct ctcttctgtt ctgct                                           25

 

<210>  78

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  78

acaaagcagc aagctgggca ct                                              22

 

 

<210>  79

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  79

tggcacaggg aattgcaacc ca                                              22

 

 

<210>  80

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  80

tcgagtggga agtgacttgg aca                                             23

 

 

<210>  81

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  81

tcaacaccat ccatccatcc atcca                                           25

 

 

<210>  82

<211>  27

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  82

ggtttctctt ctcttgtttg cccaggt                                         27

 

 

<210>  83

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  83

gccccatgct ttcaccattt tccc                                            24

 

 

<210>  84

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  84

tgctttgcaa ggatgggacg act                                             23

 

 

<210>  85

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  85

tctcagcaca caagttcgca cac                                             23

 

 

<210>  86

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  86

caagcataaa ttgcaacgac acctga                                          26

 

 

<210>  87

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  87

ggcccactga ttctcccgac ga                                              22

 

 

<210>  88

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  88

tctgcctccg tcgaagatga gc                                              22

 

 

<210>  89

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  89

agctcgcata cccgacccgt                                                 20

 

 

<210>  90

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  90

gcatcggttt ggggcggaca                                                 20

 

 

<210>  91

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  91

gcgcaagctc gttcaagccg                                                 20

 

 

<210>  92

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  92

agcagcagca gcagctccac                                                 20

 

 

<210>  93

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  93

ccgcgtccgc cttcatcaca                                                 20

 

 

<210>  94

<211>  26

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  94

cctctctctc ttccttagct ggagca                                          26

 

 

<210>  95

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  95

ggtggtggtg gtggtggtgg                                                 20

 

 

<210>  96

<211>  27

<212>  DNA

<213> 人工序列

 

 

<400>  96

agggacattc caaagtcctc atcatca                                         27

 

 

<210>  97

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  97

ggcacgaggg aacatcaacc a                                               21

 

 

<210>  98

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  98

aaaggagccg ccatagatct cca                                             23

 

 

<210>  99

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  99

tggtgcccca tagccaccag a                                               21

 

 

<210>  100

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  100

atgtgaacct aggcggcggg                                                 20

 

 

<210>  101

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  101

tcgttctcag cccttccatt cca                                             23

 

 

<210>  102

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  102

cggccggggg attcgacaac                                                 20

 

 

<210>  103

<211>  24

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  103

actggctgct agactaccaa cgta                                            24

 

 

<210>  104

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  104

tacgcccctg cagcatccct                                                 20

 

 

<210>  105

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  105

ttgccaggcc agcatggagc                                                 20

 

 

<210>  106

<211>  19

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  106

gtggccatta cggccgggg                                                  19

 

 

<210>  107

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  107

caccaccagc agcgacggaa                                                 20

 

 

<210>  108

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  108

ggcgctggtg cttcctctgg                                                 20

 

 

<210>  109

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  109

ttgcccgacc ccgatgacga                                                 20

 

 

<210>  110

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  110

cattacggcc gggggcgaag                                                 20

 

 

<210>  111

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  111

ccattacggc cggggcgaag                                                 20

 

 

<210>  112

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  112

atgggagtgc cgttttcgca                                                 20

 

 

<210>  113

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  113

cctctcctga gtcctgtctg ggc                                             23

 

 

<210>  114

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  114

tgtcagcaga tcctgttgca gttgt                                           25

 

 

<210>  115

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  115

atggcggtga cattggtcca c                                               21

 

 

<210>  116

<211>  27

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  116

aaggatgggg aagagagaaa gtagggc                                         27

 

 

<210>  117

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

 

<400>  117

cgtacagtca tctctgcttg cttgt                                           25

 

 

<210>  118

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  118

caccccagac cgttggcaca                                                 20

 

 

<210>  119

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  119

gagtggccat tacggccggg                                                 20

 

 

<210>  120

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  120

agtttgagcc ggcgctgtca                                                 20

 

 

<210>  121

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  121

acgaggaagg gccaagtgcg                                                 20

 

 

<210>  122

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  122

cggccggggg atctctcctt                                                 20

 

 

<210>  123

<211>  23

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  123

agcagagcca tctcagtcat gga                                             23

 

 

<210>  124

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  124

acggccgggc acaacatagt                                                 20

 

 

<210>  125

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  125

ggcggcaagg acacgtggaa                                                 20

 

 

<210>  126

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  126

gagtggccat tacggccggg                                                 20

 

 

<210>  127

<211>  25

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  127

tgttggtggt caggacaagg tatgc                                           25

 

 

<210>  128

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  128

ttgtgctggc tatgccccct                                                 20

 

 

<210>  129

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  129

tcctctcagc caccacggcg                                                 20

 

 

<210>  130

<211>  21

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  130

acgggtcagc cattccaacc a                                               21

 

 

<210>  131

<211>  22

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  131

gcgaaaagtc caccaaagcc gc                                              22

 

 

<210>  132

<211>  20

<212>  DNA

<213>  人工序列

 

<400>  132

gagtggccat tacggccggg                                                 20