一种抗ROS氧化胁迫高效分泌表达外源蛋白的基因工程菌及其构建方法

摘要

一种能抗ROS氧化胁迫的高效分泌表达重组外源蛋白的基因工程菌及其构建方法，属于基因工程技术领域。本发明通过自克隆表达毕赤酵母(Picha pastoris)N-乙酰转移酶基因mpr1来降低诱导过程中细胞所受到的氧化胁迫。本发明以P.pastoris总DNA为模板经过PCR的方法获得N-乙酰转移酶基因mpr1，用pPICZ或者pPIC3.5系列构建mpr1表达载体，转化P.pastoris，从而实现了N-乙酰转移酶Mpr1在细胞内的过表达，以提升酵母抗氧化胁迫的能力。以胞外分泌表达来源于黑曲霉的α-葡萄糖苷酶P.pastoris对照菌为例，当在工业级发酵培养基中发酵培养时，胞内过表达mpr1基因的重组菌的ROS含量同对照相比降低了62％，细胞活性则提高了14％；同时，目的蛋白α-葡萄糖苷酶的降解也被抑制。本菌株对研究进一步提高P.pastoris重组表达异源蛋白的表达效率具有很好的利用价值。