药物组合物、制备方法及其在制备用于治疗骨质疏松症的药物中的应用

摘要

本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，其制备步骤包括：1）将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用乙酸乙酯回流提取；2）将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用50-80%的乙醇提取；3）将步骤2）的固体残余物水煮提取；4）将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入碳酸钙粉末，水煮提取；5）将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成制剂。本发明提供的药物制备方法以及由其获得的药物组合物可以用于治疗肥大性脊椎炎，颈椎病，跟骨刺，增生性关节炎，大骨节病，也为临床治疗骨质疏松症提供了可能性。

说明书

技术领域

本发明涉及中药组合物、医药用途和制备方法。

背景技术

骨质疏松症(osteoporosis,OP)是指骨骼中单位体积内骨量减少、骨组织显微 结构异常、骨脆性增加、容易发生骨折的一种疾病，临床表现为骨密度(BMD) 降低，骨皮质变薄，髓腔增宽，骨小梁变小，易于骨折。骨质疏松症是一种常见 老年性疾病，全世界老年人中发病率已经超过25%，尤以亚洲和拉丁美洲发病率 最高。在老龄化趋势日异严重的当今社会，骨质疏松症的药物市场非常广大。

临床上常用于治疗骨质疏松症的药物有骨吸收抑制剂、骨形成促进剂和骨 矿化药物，如补钙剂、二磷酸盐、性激素、降钙素以及氟化物等，取得了一定的 疗效。中医药坚持“肾为先天之本”，“肾主骨”理论，以补肾为主，在补肾的同 时，也兼顾他脏，并注重活血、止痛、祛瘀、温寒、降火等，体现了中医的整体 观念。

目前，中医药治疗骨质疏松症常用补肾填精类、滋肝补肾类、健脾补肾加 活血化瘀类药物，均以补肾立论为根本。虽思路不同，选药各有分度，组方配伍 亦各具特色，但疗效显著却是共同之处。

由申请人生产多年的藤黄健骨片的主要制备原料为熟地黄、鹿衔草、肉苁 蓉、骨碎补、淫羊藿、鸡血藤和莱菔子，用于肥大性脊椎炎，颈椎病，跟骨刺， 增生性关节炎，大骨节病。现有技术对此无其他应用。其典型制备方法为：取 100份熟地黄、66份鹿衔草、66份骨碎补、66份鸡血藤、66份淫羊藿、66份肉 苁蓉和33份莱菔子，将淫羊藿、鹿衔草用8倍量75%的乙醇回流提取3次，每 次1小时，合并提取液，浓缩成稠膏；取其余药材，用水煎煮三次，每次1.5小 时，合并提取液，浓缩成稠膏，与之前的稠膏合并，制成干膏，制成0.5g/片的 片剂。

发明内容

本发明的一个目的是提出新的药物组合物。

本发明的另一个目的是为前述药物组合物提出一种新的医药应用。

本发明的另一目的是提出一种药物组合物的制备方法。

根据本发明，该药物组合物由下述方法制成:

1)将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用乙酸乙酯回流提取；

2)将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用50-80%的乙醇提取；

3)将步骤2）的固体残余物水煮提取；

4)将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入碳酸钙粉末，水煮提取；

5)将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成 制剂。

作为典型实施方式，该药物组合物由下述方法制成：

1)将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用3-5倍体积的乙酸乙酯回流提 取两次，每次1-1.5小时；

2)将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用3-5倍体积的60-75%的乙 醇提取1-2次，每次1-1.5小时；

3)将步骤2）的固体残余物水煮提取；

4)将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入总重10-20%的碳酸钙，水煮提取；

5)将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成 制剂。

优选地，该药物组合物由以下重量份的中药材制成：

本发明的第二方面涉及一种药物组合物在制备用于治疗骨质疏松症的药物 中的应用，所述药物组合物的制备原料主要包含熟地黄、鹿衔草、骨碎补、肉苁 蓉、淫羊藿、鸡血藤、和莱菔子。

优选地，所述药物组合物由以下重量份的中药材制成：

优选地，所述药物组合物由下述方法制成:

1)将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用乙酸乙酯回流提取；

2)将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用50-80%的乙醇提取；

3)将步骤2）的固体残余物水煮提取；

4)将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入总重5-15%的碳酸钙，水煮提取；

5)将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成 制剂。

进一步地，所述药物组合物由下述方法制成：

1)将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用3-5倍体积的乙酸乙酯回流提 取两次，每次1-1.5小时；

2)将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用3-5倍体积的50-75%的乙 醇提取1-2次，每次1-1.5小时；

3)将步骤2）的固体残余物水煮提取；

4)将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入总重10-20%的碳酸钙，水煮提取；

5)将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成 制剂。

本发明第三方面涉及一种药物组合物的制备方法，由下述方法制成:

1)将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用乙酸乙酯回流提取；

2)将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用50-80%的乙醇提取；

3)将步骤2）的固体残余物水煮提取；

4)将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入总重5-15%的碳酸钙，水煮提取；

5)将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成 制剂。

优选地，所述药物组合物由下述方法制成：

1)将鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子用3-5倍体积的乙酸乙酯回流提 取两次，每次1-1.5小时；

2)将步骤1）的固体残余物与熟地黄混合，用3-5倍体积的50-75%的乙 醇提取1-2次，每次1-1.5小时；

3)将步骤2）的固体残余物水煮提取；

4)将淫羊藿和肉苁蓉混合，加入总重10-20%的碳酸钙，水煮提取；

5)将上述各步的提取液浓缩物合并，得到药物成分，需要时加辅料制成 制剂。

进一步地，所述药物组合物由以下重量份的中药材制成：

熟地黄   80-120   鹿衔草   50-80

骨碎补   50-80    肉苁蓉   50-80

淫羊藿   50-80    鸡血藤   70-100

莱菔子   50-70。

本发明提供的药物制备方法以及由其获得的药物组合物可以用于治疗肥大 性脊椎炎，颈椎病，跟骨刺，增生性关节炎，大骨节病，也为临床治疗骨质疏松 症提供了可能性。

具体实施方式

本发明首次将藤黄健骨制剂用于制备治疗骨质疏松症的药物上。发明人曾 试图将传统的藤黄健骨片用于治疗骨质疏松症，但是未能测试出期望的效果。继 而，发明人对该藤黄健骨制剂的制备方法进行了诸多调整和尝试，幸运地发现一 种制备方法，由该制备方法获得的药物组合物在治疗骨质疏松症方面具有显著疗 效，因此提出本发明。

在本发明所涉及药物组合物的制备方面，一个技术手段是将淫羊藿和肉苁 蓉合并水煎，并且引入碳酸钙。优选将碳酸钙以粉末形式引入，投入量适宜为中 药材重量的10-20%之间。高于20%是不需要的，因为碳酸钙粉末在水中难溶。 通过对煎煮后碳酸钙的计量，未发现碳酸钙的量有显著减少。不希望受理论的束 缚，发明人猜想，碳酸钙的作用可能是，在沸腾温度下微量溶解的碳酸钙可能起 着细微调节PH值的作用，从而影响活性物质的析出。在本发明中，可以投入药 物材料5-20倍体积的水，其中8-15体积的水是优选的，例如为10-12倍体积。 水煎的时间可以3-8小时，其中优选3-6小时，典型地为4-5小时。该水煎通常 一次性完成。通过投入较高量的水和较长的水煎时间，可以促进碳酸钙在水煎中 发挥作用。

另一方面，在本发明中，将部分中药材分步提取。具体而言，将鹿衔草、 骨碎补、鸡血藤和莱菔子首先用较低极性的乙酸乙酯回流提取，以提高药材中低 极性物质的析出量。一种具体实施方式是，乙酸乙酯的用量是药材体积的3-5体 积，优选提取两次，每次1-1.5小时。尽管本发明没有尝试，可以设想用其他低 极性溶剂替代，例如氯仿、乙醚等，还可以设想用其他的提取手段，例如二氧化 碳超临界提取、借助类似液体介质的分子蒸馏技术、微波萃取技术等。

在乙酸乙酯提取鹿衔草、骨碎补、鸡血藤和莱菔子后，固体残余物与熟地 黄混合，用50-80%、优选60-75%的乙醇回流提取，典型地用3-5倍体积的乙醇 即可。每次提取1-1.5小时。

本发明中，还包括将前一步获得的固体残余物进行水煎煮，可以投入3-5倍 体积的水煎煮1-2两次，每次约1-1.5小时。

优选将上述获得的药物组合物制成片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、 咀嚼剂、糊剂。辅料可以根据剂型进行选择，辅料的选择是本领域所熟知。

实施例 本发明药物的制备

将60份鹿衔草、60份骨碎补、80份鸡血藤和50份莱菔子用4倍体积的乙 酸乙酯回流提取两次，每次1-1.5小时。将获得的固体残余物与100份熟地黄混 合，用4倍体积的70%的乙醇提取2次，每次1小时。所得固体残余物用4倍体 积的水煎煮2两次，每次1小时。将60份淫羊藿和60份肉苁蓉混合，加入总重 10%的碳酸钙粉末，以10倍体积的水煎煮5小时。将上述各步的提取液浓缩物 合并，得到干膏，制成0.5g/片的片剂。

比较例 传统药物的制备

取100份熟地黄、66份鹿衔草、66份骨碎补、66份鸡血藤、66份淫羊藿、 66份肉苁蓉和33份莱菔子，将淫羊藿、鹿衔草用8倍量75%的乙醇回流提取3 次，每次1小时，合并提取液，浓缩成稠膏；取其余药材，用10倍量的水煎煮 三次，每次1.5小时，合并提取液，浓缩成稠膏，与之前的稠膏合并，制成干膏， 制成0.5g/片的片剂。

骨质疏松症临床表现为骨密度(BMD)降低，骨皮质变薄，髓腔增宽，骨小梁 变小，易于骨折。如果被破骨细胞吸收骨质形成的凹陷未被新骨填满，形成的新 骨量少于被吸收的骨量时即发生负平衡，从而导致总骨量的丢失，引起骨质疏松 症。原发性骨质疏松症是由于雌激素缺乏，继发性骨质疏松症可能与钙吸收障碍、 维生素D缺乏、胆汁淤积、制动固定术、酒精中毒及药物包括皮质激素、免疫 抑制剂的应用和肾功能的减退等有关。

较理想的骨质疏松症动物模型有去卵巢、糖皮质激素和维甲酸模型。雌性 大鼠卵巢切除后，松质骨的骨转换加快，骨量减少，骨强度下降，类似于人正常 绝经后的骨丢失状态。超生理剂量的糖皮质激素可直接抑制成骨细胞的活性，造 成骨丢失和骨代谢紊乱，与临床糖皮质激素引起的继发性骨质疏松很相似。维甲 酸是维生素A的衍生物，能明显影响骨代谢，减少骨松质和骨皮质容量，改变 骨组织微结构的病理，骨小梁数量下降，骨髓腔增大，皮质骨变薄，其组织形态 学表现与人类骨质疏松症有较好的相似性。

为测试本发明药物组合物对骨质疏松症的治疗效果，采用这三种常见病因 引起的骨质疏松症的动物模型为研究对象，考察本药物对相关指标的影响，并与 比较例药物、依普黄酮阳性对照药进行比较。下文将作详细描述。

对去卵巢骨质疏松模型大鼠的影响

取10月龄雌性SD大鼠，以2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，75%酒精消毒皮 肤，于背部脊柱两侧各作2cm纵切口，分离肌肉后，可见淡黄色脂肪团卵巢， 用小镊子拉出脂肪团，在卵巢下端穿一丝线，结扎，切除卵巢及余线，将组织推 回腹腔，缝合切口（空白组仅进行假手术：只切开皮肤，分离肌肉，然后缝合切 口）。所有动物常规饲养，16周后造成骨质疏松模型。

造模后按体重随机分成模型组、依普黄酮组、比较例高剂量组、实施例低、 中、高剂量组。按表1剂量灌胃给药30天后处理动物。取血测定血清钙、磷、 碱性磷酸酶，雌二醇、皮质酮、降钙素。本发明使用的依普黄酮由湖北四环制药 有限公司生产，批号：091102。0.2g/片。

表1藤黄健骨片对去卵巢骨质疏松模型大鼠血液生化的影响

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

从表1可见，在血液生化指标方面，与空白组比较，模型组大鼠血清钙明 显降低，血清磷、碱性磷酸酶显著升高；与模型组比较，实施例高剂量组和依普 黄酮组大鼠血清钙、碱性磷酸酶有显著性差异，而比较例高剂量组也显示出差异， 但是差异不如实施例组显著。

表2藤黄健骨片对去卵巢骨质疏松模型大鼠血清激素的影响

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

从表2可见，在血清激素水平方面，与空白组比较，模型组大鼠血清降钙 素、皮质酮、雌二醇均有显著性降低；与模型组比较，实施例中、高剂量组和依 普黄酮组大鼠血清降钙素、皮质酮、雌二醇均有显著性差异，明显升高，，而比 较例高剂量组也显示出差异，但是差异不如实施例组显著。

对地塞米松骨质疏松模型大鼠的影响

取SD大鼠，雌雄各半，体重180～200g，肌肉注射地塞米松1mg/kg，2次 /周，连续6周，造成骨质疏松模型，空白组注射生理盐水。造模后大鼠按体重 随机分成模型组、依普黄酮组、比较例高剂量组、实施例低、中、高剂量组。按 表3剂量灌胃给药14天后处理动物，进行：1）血液生化指标测定：于末次给药 1h后取血测定血清钙、碱性磷酸酶，雌二醇、皮质酮、降钙素，结果见表3；2） 骨力学测定：处死动物后，取左侧股骨做骨力学测定，包括最大弯曲力、抗弯强 度与断裂挠度，结果见表4；3）病理组织形态学检测：处死动物后，取右侧股 骨上段固定、脱钙、横向与纵向切片，片厚6μm，染色。用自动彩色图像分析系 统采图，以关节软骨下1mm以外的松质骨区域，用40倍镜取两个视野观察， 取平均值，计算平均骨小梁密度、骨小梁面积百分比、皮质骨面积百分比，结果 见表5。

表3藤黄健骨片对地塞米松骨质疏松模型大鼠骨力学的影响（n=10）

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

由表3可见，与空白组比较，模型组雌雄大鼠股骨的最大弯曲力、抗弯强度与断裂挠 度均有显著性降低；与模型组比较，实施例三个剂量组大鼠的最大弯曲力、抗弯强度与断裂 挠度均有不同程度的显著性差异，依普黄酮组的抗弯强度与断裂挠度有显著性差异，而比较 例组则未显示此显著效果。

表4藤黄健骨片对地塞米松骨质疏松模型大鼠血清激素的影响（n=10）

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

血液生化与激素指标：表4可见，与空白组比较，模型组大鼠血清钙、降 钙素、皮质酮、雌二醇明显降低，血清碱性磷酸酶显著升高；与模型组比较，藤 黄健骨片高剂量组大鼠血清钙、碱性磷酸酶、降钙素、皮质酮、雌二醇有显著性 差异，明显升高，而比较例组则未显示此显著效果。

表5藤黄健骨片对地塞米松骨质疏松模型大鼠股骨组织形态学的影响（n=10）

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

病理组织形态学：表5可见，模型组大鼠股骨的骨小梁细小疏松、排列紊 乱不规则，骨小梁密度下降，骨小梁面积百分比及皮质骨面积百分比减少。经藤 黄健骨片治疗后，症状有所改善。藤黄健骨片低、中、高剂量组大鼠的骨小梁密 度、骨小梁面积百分比及皮质骨面积百分比与模型组比较有显著性差异，而比较 例组则未显示此显著效果。

对维甲酸骨质疏松模型大鼠的影响

取雄性SD大鼠，体重140～160g，按75mg/kg维甲酸（以1%纤维素溶液 配成1.5%浓度）灌胃，1次/日，连续2周后停药，常规饲养，4周后造成骨质疏 松模型，按体重随机分成模型组、依普黄酮组、比较例高剂量组、实施例低、中、 高剂量组。按表6剂量灌胃给药14天后处理动物，进行：1）骨密度测定：于末 次给药1h后2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉动物，测定大鼠的全身平均骨密度，骨 矿含量及脂肪组织百分比，结果见表6；2）血液生化指标测定，测定骨密度后， 取血测定血清钙、磷、碱性磷酸酶，结果见表7；3）骨病理组织形态学检测： 处死动物后取左侧股骨上段固定、脱钙、横向及纵向切片，片厚6μm，染色。用 自动彩色图像分析系统采图，以关节软骨下1mm以外的松质骨区域，用40倍 镜取两个视野，计算平均值，测量平均骨小梁密度、骨小梁面积百分比、皮质骨 面积百分比，结果见表8。

表6藤黄健骨片对地塞米松骨质疏松模型大鼠骨密度的影响

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

由表6可见，与模型组比较，实施例高剂量组大鼠的骨密度、组织含量及 依普黄酮组骨密度有显著性差异，比较例高剂量组大鼠也显示出显著差异。

表7藤黄健骨片对维甲酸骨质疏松模型大鼠血液生化的影响（n=10）

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

由表7可见，与空白组比较，模型组大鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶均有显 著性降低；与模型组比较，实施例高剂量组大鼠血清钙、磷、碱性磷酸酶均有显 著性差异，明显升高，而比较例组则未显示此显著效果。

表8藤黄健骨片对维甲酸骨质疏松模型大鼠股骨组织形态学的影响（n=10）

与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

由表8可见，模型组大鼠股骨的骨小梁密度下降，骨小梁面积百分比及皮 质骨面积百分比减少。藤黄健骨片低、中、高剂量组大鼠的骨小梁密度、骨小梁 面积百分比及皮质骨面积百分比与模型组比较有显著性差异，而比较例组则未显 示此显著效果。

通过上述试验证实，本发明的药物组合物对去卵巢、地塞米松、维甲酸骨 质疏松模型大鼠的血清生化指标及股骨病理症状有明显的改善作用，对原发性和 继发性骨质疏松均有较好的治疗作用，为增加藤黄健骨制剂骨质疏松症的功能主 治提供了依据。试验还显示，本发明的药物组合物还能抑制由醋酸引起的小鼠扭 体反应，对福尔马林致小鼠疼痛的I相反应和II相反应均有一定的镇痛作用，还 能抑制大鼠棉球肉芽组织增生，提高氢化可的松肾虚模型组小鼠的胸腺系数、睾 丸重量、小鼠碳粒廓清K及校正指数α。因此兼有镇痛、抗炎、补肾的作用。