磷酸替米考星中残留溶剂的检测方法

摘要

本发明涉及一种磷酸替米考星中残留溶剂的检测方法，该方法包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备，之后采用气相色谱法以顶空进样的方式将上述对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱仪中，根据外标法计算残留量。本发明通过对色谱条件的优选及供试品、对照品制备方法的试验，建立了磷酸替米考星中可能存在的残留物乙酸丁酯、正丁醇的气相色谱分析方法；通过对色谱分离系统的优化，建立了兽药磷酸替米考星中溶剂残留的检测方法，通过方法学验证试验研究表明：所建立的方法准确度高、专属性强、重现性良好，通过对兽药磷酸替米考星中残留溶剂量的控制，确保其安全性，从而更有效的防治牛、山羊、绵羊、奶牛、猪、鸡等动物感染性疾病。

说明书

技术领域

本发明涉及制药技术领域，特别是涉及一种磷酸替米考星中残留溶剂的检测 方法。

背景技术

替米考星是一种动物专用的新型大环内酯类抗生素，临床主要用于牛、猪、 鸡、绵羊、山羊、兔等感染性疾病，特别是用于畜禽呼吸道疾病，并取得显著疗 效。该药具有抗菌活性强、药代动力学特征优良、用量少、毒性小等特点。临床 应用表明：替米考星是一种安全有效的新型兽药，具有广阔的应用前景。

替米考星具有同泰乐菌素相似的广谱抗菌活性，对革兰氏阳性菌和某些革兰 氏阴性菌、霉形体、螺旋体等均有抑制作用，对胸膜肺炎放线杆菌、巴氏杆菌及 霉形体具有比泰乐菌素更强的抗菌活性。Inamoto等报道，替米考星(TMS)、金 霉素(CTC)、甲砜霉素(TP)和泰乐菌素(TS)对日本1980～1989年间从猪肺炎损害 部位分离出的61株多杀性巴氏杆菌和35株胸膜肺炎放线杆菌的抗菌作用，大多 数菌株对TMS、CTC、TP敏感。CTC和TP分别在3.13μg/ml和0.78μg/ml时 对51株(83.6%)和46株(75.4%)多杀性巴氏杆菌有抑制作用。TS对几乎所有菌 株的抗菌活性较低，MIC≥6.25μg/ml。TMS对23株(37.7%)多杀性巴氏杆菌的 MIC≥1.56μg/ml，但在3.13μg/ml时，TP和TMS分别能抑制32株(91.4%)和 33株(94.3%)放线杆菌，可见作为同一大环内酯类药物，泰乐菌素对两种细菌的 抗菌活性均不及替米考星。Salmon SA等用从美国、加拿大分离到的515株致病 菌对头孢噻呋、恩诺沙星、红霉素、磺胺二甲嘧啶、壮观霉素、林可霉素、磺胺 嘧啶/TMP、氨苄青霉素和替米考星等9种药物的敏感性进行测定。结果发现，抗 菌作用最强的是恩诺沙星和头孢噻呋，替米考星对巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌 活性中等。替米考星对鸡霉形体表现出较强的体外抗菌活性。Jordan等报道了 替米考星和泰乐菌素对家禽6株鸡败血霉形体和3株滑液霉形体的体外MIC值。 替米考星对6株鸡败血霉形体的MIC值分别为：＜0.0125、0.0025、0.0025，＞ 12.5、0.004、0.1、0.0125、0.006和0.025μg/ml；而泰乐菌素的MIC值则分 别为：＜0.0125、0.02、0.02、3.2、0.016、0.8、0.0125、0.025和0.025μ g/ml。Ziv等应用替米考星对从奶牛乳房炎分离的112株金黄色葡萄球菌和其它 致病菌进行MIC-90测定。结果替米考星对乳房炎金黄色葡萄球菌和链球菌均很 敏感，其中对化脓性链球菌活性最强(MIC-90为0.04μg/ml)。替米考星在小于 3.12μg/ml时能抑制90.8%的其它革兰氏阳性乳房炎致病菌。

综上所述，替米考星作为一种较新的大环内酯类抗生素，其较强的抗菌活性 和优越的药物动力学特征，使它在畜禽敏感菌引起的肺炎、巴氏杆菌病以及乳房 炎等疾病的防治方面发挥着重要作用。因此，建立磷酸替米考星的质量控制体系， 保证其产品质量就具有非常实际的意义。

磷酸替米考星的合成过程中，使用过乙酸丁酯及正丁醇，这些溶剂的残留不 仅降低产品的质量，同时会对药品的安全性带来影响，但原标准没有对这两项溶 剂进行测定，为此我们通过试验采用气相色谱法建立乙酸丁酯、正丁醇的检测方 法，并规定合理的限度，以确保磷酸替米考星的安全性。

发明内容

本发明的目的就在于提供一种磷酸替米考星中残留溶剂的检测方法。

本发明采用下述技术方案实现：

一种磷酸替米考星中残留溶剂的检测方法，其特征在于采用气相色谱法，以 顶空进样的方式进行检测。

所述气相色谱法检测过程为：

1）对照品溶液的制备：精密称取乙酸丁酯和正丁醇对照品适量，加水制成 每1ml分别含乙酸丁酯、正丁醇各50μg的溶液，取10ml置顶空瓶中，加盖密封；

2）供试品溶液的制备：取磷酸替米考星样品0.25g，精密称定，置25ml容 量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取10ml置顶空瓶中，加盖密封；

3）测定：以顶空进样的方式将上述对照品溶液和供试品溶液注入气相色谱 仪中，根据外标法计算残留量，

其中色谱条件为：以聚乙二醇为固定相的Rtx-WAX毛细管柱（柱长30m，内 径0.53mm，膜厚1.0μm），柱温为恒温：30～60℃；用氢火焰离子化检测器检测， 检测器温度240～260℃；进样口温度200℃；柱流量1.0～2.0ml/min；载气： 高纯氮气；

顶空条件：气化室温度80℃加热20～40min，进样量1ml。本发明的磷酸替 米考星中残留溶剂的检测方法，试验过程发现：两种溶剂以水为溶剂，直接进样， 造成水在色谱柱中残留，影响后期的试验准确性及峰形，为此采用顶空进样，有 效的解决了上述问题；恒温检测简单、易操作。优化检测方法后建立了磷酸替米 考星中可能存在的残留物乙酸丁酯、正丁醇的气相色谱分析方法；并对新建立的 检测方法进行了验证。

验证结果表明：准确度试验的平均回收率为：101.8%、95.48%，相对标准偏 差RSD:2.20%、1.25%；精密度试验的RSD分别为1.69%、1.24%；线性关系良好， 相关系数γ=0.9997、0.9998；专属性试验考察无阴性干扰。试验证明所建立的 方法准确度高、专属性强、重现性良好，通过对兽药磷酸替米考星中残留溶剂量 的控制，确保其安全性，从而更有效的防治牛、山羊、绵羊、奶牛、猪、鸡等动 物感染性疾病。

附图说明

图1为乙酸乙酯标准曲线图；

图2为正丁醇标准曲线图。

具体实施方式

样品名称：磷酸替米考星，(来源：宁夏泰瑞制药股份有限公司)。

仪器：岛津GC-2014气相色谱仪

色谱条件：色谱柱：以聚乙二醇（PEG）为固定相的Rtx-WAX毛细管柱（柱 长30m，内径0.53mm，膜厚1.0μm），柱温为恒温：30～60℃；用氢火焰离子化检 测器检测，检测器温度240～260℃；进样口温度200℃；柱流量1.0～2.0ml/min； 载气：高纯氮气；顶空条件：气化室温度80℃加热20～40min，进样量1ml。

对照品溶液的制备：精密称取乙酸丁酯、正丁醇对照品适量，加水制成每 1ml分别含乙酸丁酯、正丁醇各50μg的溶液，取10ml置顶空瓶中，加盖密封， 80℃加热20～40min，顶空进样1ml。

供试品溶液的制备方法：取本品约0.25g，精密称定，置25ml容量瓶中， 加水溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取10ml置顶空瓶中，加盖密封，80℃加 热20～40min，顶空进样1ml。

含量测定：将上述对照品溶液和供试品溶液采用顶空进样的方式注入到气相色谱 仪中，通过绘制的标准曲线采用外标法计算含量。本发明中，替米考星中含乙酸 丁酯不得大于5000ppm，含正丁醇不得大于5000ppm。

式中Ax为供试品溶液的峰面积；

Ar为对照品溶液的峰面积；

Cr为对照品溶液的浓度；

Cx为供试品溶液的浓度。

精密度：取含量测定项下供试品溶液，重复进样5次，结果乙酸乙酯与正丁醇 的峰面积RSD分别为1.69%、1.24%，重复性良好（见表1）。

表1  乙酸乙酯、精密度试验结果表

线性试验：精密称取乙酸乙酯、正丁醇对照品适量，用水制成每1ml含60μg/ml 的储备溶液，分别精密量取上述储备液1.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml，置10ml 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。依法进样，以峰面积为纵坐标，溶液浓 度为横坐标，计算回归方程分别为y=328491x-2E+06  r＝0.9997， y=3E-05x+1.4492  r＝0.9998。试验结果表明，乙酸乙酯、正丁醇在6.0～ 60μg/ml范围内，呈良好的线性关系。测定结果见表2，线性关系曲线图见图1。

表2  乙酸乙酯、正丁醇测定线性范围

回收率试验：取已知含量的磷酸替米考星供试品（本公司生产，批号G811130705， 乙酸乙酯、正丁醇均未检出）9份，各0.25g，精密称定，分别按照所确定限度 的80%，100%，120%加入乙酸乙酯（1）对照品溶液（50.25μg/ml）、正丁醇(2) 对照品溶液（51.8μg/ml）0.8ml、1.0ml、1.2ml，照测定法项下的提取方法及测 定法提取并测定，结果平均回收率分别为：101.80%，RSD:2.20%；95.48%， RSD:1.25%(见表3)。

表3：乙酸乙酯准确度试验结果