具有改善稳定性的奥米沙班制剂

摘要

本发明涉及包含(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药用的酸性反应性化合物的药物组合物或者涉及所述组合物的含水溶液或混悬液，以及制备所述组合物的方法，以及使用所述组合物治疗患有通过给药Xa因子抑制剂可缓解的病症的受试者的方法。

说明书

技术领域

本发明涉及包含(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡 啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药用的酸性反应性化合 物的药物组合物或者涉及所述组合物的含水溶液或混悬液，以及制备所述组 合物的方法，以及使用所述组合物治疗患有通过给药Xa因子抑制剂可缓解 的病症的受试者的方法。

背景技术

(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰 基]氨基}丁酸甲酯(CAS编号193153-04-7)的国际非专利药品名称为奥米沙 班，并显示式I中所示的结构：

                  式I

WO97/24118中公开了(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1- 氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯在制备用于治疗患有或经受通过给 药Xa因子抑制剂可缓解的病症的患者的药物中的用途。

Xa因子是凝血级联中的次末端酶。Xa因子(fXa)是位于凝血级联的内源 性和外源性通道汇合处的关键性丝氨酸蛋白酶。fXa经凝血酶原酶络合物催 化凝血酶原向凝血酶的转化。它在凝血酶形成中的独特作用，加上它对血块 形成的增效作用，使它成为治疗性干预的有吸引力的靶标。

游离的Xa因子和在凝血酶原酶络合物中装配的Xa因子(Xa因子、Va 因子、钙和磷脂)都被奥米沙班所抑制。Xa因子抑制可通过在抑制剂和酶之 间直接形成络合物来获得并因此不依赖血浆辅因子抗凝血酶III。有效的Xa 因子抑制可通过经连续静脉内输注、大剂量静脉内给药或者任何其它肠胃外 途径给药所述化合物来实现，由此这实现了阻止Xa因子诱导的由凝血酶原 形成凝血酶的期望效应。体内实验已经证明，奥米沙班在啮齿类、犬的和猪 的血栓症模型中是非常有效的。除此之外，最近的临床发现表明，奥米沙班 在人类当中是有效的、安全的且良好耐受的并因此具有用于治疗急性冠脉综 合征的相当大的潜力(K.R.Guertin and Yong-Mi Choi;2007;Current Medicinal  Chemistry,Vol.14,No.23;p.2471-2481)。剂量范围临床试验中的临床发现表 明，在最高剂量方案时奥米沙班比未分级肝素更明显地降低凝血酶原片段1 +2(Cohen et al.,Circulation,Vol.115,No.20,May2007,pages2642-2651)，但 是所述临床发现并未显示年龄或肾损害的比较中的数据。另外的临床试验证 明，奥米沙班在具有稳定的冠状动脉疾病的患者中诱导剂量依赖的、快速直 接的Xa因子抑制，所述患者采用他们常用的结合给药法(comedication)，其 中某些患者具有轻度肾损害(Hinder et al.,Clinical Pharmacology and  Therapeutics,Vol.80,No.6,2006,pages691-702)。

开发了((2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基) 苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的注射和输注药物组合物用于临床研究。在终端灭 菌(高压灭菌)和稳定性研究期间所得观察结果中的一项是两种降解物的强烈 增加。一种所述降解物为(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基) 苯甲酰基氨基]-丁酸，并具有式II中所图解的结构：

                   式II

另一种所述降解物为(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4- 基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯，并具有式III中所图解的结构：

                    式III

在推荐的储存条件下，在含有(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的含水药物组合物中， (2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸和 (2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲 酯也达到升高的水平。

本发明的一个目的是寻找长期稳定的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基] 苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的药物组合物，所述 药物组合物不具有在终端灭菌或者长期储存期间出现的(2R,3R)-2-(3-甲脒基 -苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸或者(2R,3R)-2-(3-氨甲酰 基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的浓度增加的缺 点。

已经发现的是，在所述药品长期储存期间(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄 基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸或者(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基- 苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的形成是由以下相反 的效果(opposite effects)确定的：

-在高压灭菌期间，(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4- 基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的水平随着液体药物组合物pH的增加而 明显增加，然而在高压灭菌期间未观察到液体制剂的pH对 (2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁 酸形成的强烈影响。结论：药物组合物的pH越低越好！

-在长期储存期间，(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基) 苯甲酰基氨基]-丁酸的水平随着液体药物组合物pH的降低而明显增 加，然而在长期储存期间未观察到液体制剂的pH对(2R,3R)-2-(3-氨 甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯形成的 强烈影响。结论：药物组合物的pH越高越好！

已经发现的是，pH值低于5的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐的液体 药物组合物，对于限制由高压灭菌或长期储存相反效果的(2R,3R)-2-(3-甲脒 基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸和(2R,3R)-2-(3-氨甲酰 基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯两者的增加是有益 的。

低于5的pH提供了本发明药物组合物的明显优点，所述药物组合物为 (i)长期稳定的药物组合物以及(II)经高压灭菌(蒸汽灭菌)的无菌注射液，所述 高压灭菌法是简单、经济且安全的灭菌方法。

发明内容

本发明提供了(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶 -4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药用的酸性反应性化合物 的药物组合物。

本发明还提供了(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡 啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药用的酸性反应性化合 物的无菌药物组合物。

具体实施方式

本发明提供了(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶 -4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药用的酸性反应性化合物 的药物组合物。

本文所用的术语具有在本申请说明书中所定义的含义。

“可药用的酸性反应性化合物”指能够赋予(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基) 甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐 的含水溶液或混悬液低于5的pH的无毒化合物。示例性酸性反应性化合物 为柠檬酸、乙酸、乙醇酸(glycolic acid)、己二酸(adipic acid)、乳酸、丙酮酸 (pyruvic acid)、丙二酸(malonic acid)、琥珀酸、戊二酸(glutaric acid)、葡糖醛 酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、 羟基苯甲酸、透明质酸、乙酰水杨酸；或者无机酸，如盐酸；或者无机酸的 盐，如磷酸二氢钾；或者氨基酸，如甘氨酸及其盐；或者一种或多种所述酸 性反应性化合物的混合物。优选地，所述酸性反应性化合物为柠檬酸。

赋予(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯 甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐的含水溶液或混悬液低于5的pH的可 药用的酸性反应性化合物的必要量取决于相应的化合物，并可由本领域普通 技术人员通过以下方法确定：例如将含有约1mg的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨 基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的样品悬浮 或者溶解在约1mL的纯净水中并加入足量的可药用的酸性反应性化合物直 至在上清液中测量的pH低于5。上清液的pH用pH计或者通过pH指示剂 测量。

“缓冲溶液”是由弱酸及其共轭碱或者弱碱的混合物及其共轭酸的混合 物组成的水溶液。它具有以下性质：当向其中加入少量强酸或者强碱时溶液 的pH变化非常小。缓冲溶液在多种化学应用中用于将pH值保持在几乎恒 定值的工具。

“降解物”指在本发明的药物组合物制备之后产生的任何基于药物的物 质。如本领域中已知的，使用反相HPLC技术对样品进行杂质和降解物的分 析。

“冷冻干燥”也称作“冻干”，指脱水方法(dehydration process)。冷冻干 燥通过以下步骤进行：将物质冷冻，然后降低环境压力，并加热至足以使物 质中的冻结水从固相直接升华至气相。

“i.v.”指静脉内注射或输注并且是直接向静脉内给予液体物质。单词静 脉内简单地表示“在静脉内”。

“长期”指1至3个月。

“长期储存”指药物组合物在40℃和75%的相对湿度储存1至3个月。

“极长期”指3至6个月。

“极长期储存”指药物组合物在40℃和75%的相对湿度储存3至6个 月。

“mL”指毫升，定义为升的千分之一，并且还经常被SI导出单位名称 立方厘米所引用。

“非-ST抬高型心肌梗塞”指基于ACC/AHA、ESC及WHF共识的心肌 梗塞的定义；还参见非-ST抬高型急性冠脉综合征的诊断和治疗的指导方针； Eur Heart J,2007,28(13):1598-1660.

“生理盐水”或“等渗盐水”指具有约308mOsmol/L的摩尔渗透压浓度 (osmolarity)的0.9%的氯化钠水溶液，其显示与血浆大约相同的摩尔渗透压 浓度。

“奥米沙班”指(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶 -4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的国际非专利药品名称。

“患者”表示灵长类例如人，或者温血动物例如大鼠、小鼠、狗、猫或 豚鼠。

“病理状态”指患者的疾病、病症或病情，特别是其中Xa因子可发挥 作用的疾病、病症或病情。

“pH”是溶液酸度或碱度的量度(measure)。它近似但不等于p[H]，即溶 解的氢离子(H+)摩尔浓度的负对数(以10为底)。本发明固体药物组合物中的 pH测定通过将含有约1mg奥米沙班的药物组合物的样品悬浮或溶解在约1 mL的纯净水中来进行。上清液的pH是用pH计或者通过pH指示剂测定。 可使用pH指示剂(例如以溶液或者pH试纸形式的酚酞)或者使用电位分析法 测量pH。当需要0.2至0.5pH单位准确度时试纸是非常有用的。当需要更 高的精确度时，pH计是唯一有效的手段。在电位分析法中测量已知的参比 电极和测量pH用的电极之间的电位差。pH电极的电位取决于水合氢离子的 活度。这种相关性通过Nernst方程来描述，因此一旦已经测量了电位就可以 计算活度。作为第一个近似值，活度等同于离子浓度。pH计是用于电位分 析pH测量的装置。pH计只不过是精密的电压表，其与pH电极连接，并且 以这样的方式标度使得它不显示所测量的电位，而显示pH值。

“可药用盐”为碱性化合物(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的任何酸式盐，其能够 在临床前和临床使用的药物组合物中给药。形成合适盐的示例性无机酸包括 无机酸，如盐酸、磷酸和氨基磺酸；以及有机酸，如乙酸、柠檬酸、乳酸、 酒石酸、丙二酸、苯甲酸、氨基酸等。优选地，所述酸加成盐是衍生自无机 酸，优选盐酸。

“RH”指相对湿度；将空气-水混合物的相对湿度定义为在规定温度混 合物中水蒸汽的分压与水的饱和蒸汽压的比率。

“灭菌”指有效地杀死或者消除来自药物组合物的可传播因子(agents)的 任何方法，所述可传播因子如真菌、细菌、病毒或孢子形式。灭菌可(例如) 通过应用热、化学试剂、辐照、高压或者过滤或者其组合来实现。

“蒸汽灭菌”指广泛使用的高压灭菌器中的热灭菌方法。高压灭菌器通 常使用加热到121℃至134℃的蒸汽。为了实现无菌，需要有效的保持时 间，至少在121℃保持15分钟或者至少在134℃保持3分钟。适当的高压 灭菌器处理将会灭活所有真菌、细菌、病毒及具有相当有抵抗力的细菌孢子。

“经过滤灭菌”指通常用于将被热、辐照或化学灭菌损坏的液体的方法。 孔径为0.2μm的过滤器将有效地除去细菌。如果还必须除去病毒，需要更 小的大约20nm的孔径。

“治疗有效量”表示在治疗所述病症或病情中有效的化合物的量。

“张力(Tonicity)”表示被半透膜所分离的两种溶液渗透压(通过两种溶液 的水电位来定义的)的量度。当描述活细胞浸入外部溶液的响应时常使用张 力。如同渗透压，张力仅受不能穿过膜的溶质影响，因为只有这些溶质产生 渗透压。能自由穿过膜的溶质不影响张力，因为在一定时间后它们在膜的两 侧将会是等浓度的。

“治疗(Treat)”或“处置(treating)”表示任何治疗或处置，其包括，但不 限于，减轻症状、暂时地或者永久地消除症状的病因(causation)，或者预防 或减缓症状的出现及所述病症或病情的进展。

(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰 基]氨基}丁酸甲酯的合成已经被公开，并通过本领域技术人员所熟知的方法 来完成。例如国际申请WO97/24118公开了合成的方法。

酸性反应性化合物的实例是有机酸，例如柠檬酸、乙酸、乙醇酸、乳酸、 丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸、 马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯基乙酸、透明质酸、乙酰水 杨酸、肉桂酸、水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、对甲苯磺酸以及磺酸(如甲磺酸和 2-羟基乙磺酸)或其盐或者一种或多种所述有机酸及其盐的混合物。酸性反应 性化合物的其它实例是无机酸，例如盐酸或磷酸或者无机酸的盐(如磷酸二 氢钾)，或者氨基酸及其盐或者一种或多种所述无机酸或氨基酸及其盐的混 合物。优选地，所述酸性反应性化合物为柠檬酸或柠檬酸钠或其混合物。

在本发明另外的实施方案中，向奥米沙班加入酸性反应性化合物在本发 明的药物组合物中产生约pH3至约pH4.5，或者约pH3.7至约pH4.3，约 pH3.8至约pH4.3，或者约pH4.0至约pH4.2的pH或者约pH4.0的pH。 在从所述药物组合物中取样后进行pH测定。pH用pH计或者通过pH指示 剂来测定。

在另外的实施方案中，本发明涉及注射用的含水药物组合物，其含有：

a)0.1mg/mL至60mg/mL(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯，或者1.5mg/mL至 50mg/mL或者5mg/mL至25mg/mL，

b)1mMol/L至1000mMol/L酸性反应性化合物或其盐或者其混合物， 或者20mMol至25mMol，或者4mMol至6mMol，以及

c)具有低于5.0的pH。

在另外的实施方案中，本发明涉及含水药物组合物，其含有0.8mg/mL 至30mg/mL(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基) 苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯，或者0.9mg/mL至26mg/mL，或者0.9mg/mL至 6mg/mL。在另外的实施方案中，本发明涉及含水药物组合物，其含有 2.0mg/mL至30mg/mL(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化 吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯，或者2.0mg/mL至25mg/mL，或者 16mg/mL至25mg/mL或者3.0mg/mL至6mg/mL。

在另外的实施方案中，本发明涉及含水药物组合物，其中使用缓冲溶液 作为酸性反应性化合物，其能够赋予(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐的组合 物的含水溶液或混悬液低于5.0的pH。在所述另外的实施方案中，向奥米沙 班加入缓冲溶液在含水药物组合物中产生约pH3至约pH5.0，或者约pH3 至约pH4.7，或者约pH3.5至约pH4.6或者约pH3.6至约pH4.3，约pH3.6 至约pH4.2，或者约pH3.6至约pH4.1的pH。

适合的缓冲液的示例性实例包含缓冲物质，例如柠檬酸及其钠盐或钾 盐、磷酸及其钠盐或钾盐或磷酸氢盐(hydrogen phosphate)或者磷酸氢二钠、 乙酸及其钠盐、乳酸及其盐、琥珀酸及其盐、酒石酸及其盐、抗坏血酸及其 盐、天冬氨酸及其盐、苯甲酸及其盐、己二酸及其盐、葡糖醛酸及其盐，或 者无机酸，例如盐酸或盐、氨基酸及其盐如甘氨酸或丝氨酸，或者这些缓冲 物质的混合物。优选的实例为柠檬酸和柠檬酸钠的混合物。这些混合物的实 例为柠檬酸与柠檬酸钠(柠檬酸一钠、柠檬酸二钠)和柠檬酸或者磷酸二氢钾 和磷酸氢钾。

在本发明另外的实施方案中，在含水药物组合物中产生低于5.0pH的 缓冲溶液的浓度为1mMol/L至1000mMol/L或者20mMol至25mMol，或 者4mMol至6mMol。

在本发明另外的实施方案中，可向本发明的液体药物制剂中加入另外的 张力调节剂，得到摩尔渗透压浓度显示为260mOsmol/L至350mOsmol/L或 者约308mOsmol/L的溶液，其具有与血浆大约相同或相似的摩尔渗透压浓 度。

张力调节剂的示例性实例是盐，例如氯化钠或者糖(如葡萄糖)或者糖醇 (如甘露糖醇)。在通过高压灭菌进行灭菌的情况下，盐或者糖醇(例如甘露糖 醇)是优选的。取决于奥米沙班的浓度和酸性反应性化合物的浓度，盐的浓 度可以为0mg/mL至20mg/mL。取决于奥米沙班的浓度和酸性反应性化合物 的浓度，葡萄糖或糖醇(如甘露糖醇)的浓度可以为0mg/mL至约60mg/mL。 整个溶液的张力不应超过限度并且摩尔渗透压浓度为260mOsmol/L至350 mOsmol/L。

本发明的含水药物组合物可通过以下方法制备：将(2R,3R)-2-{3-[氨基 (亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其 可药用盐和酸性反应性化合物以相应的需要量，加入水中，需要时水加入本 申请所列举的各种其它成分，然后混合适当的时间。

在另外的实施方案中，本发明涉及(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药 用的酸性反应性化合物在水溶液中的无菌药物组合物或者所述组合物的混 悬液。

在另外的实施方案中，本发明涉及pH低于5.0的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚 氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药 用盐、可药用的酸性反应性化合物和水的无菌含水药物组合物或者所述组合 物的混悬液。

无菌药物组合物可通过对本发明药物组合物进行灭菌来制备。灭菌指有 效杀死或消除来自药物组合物的可传播因子的任何方法，所述可传播因子如 真菌、细菌、病毒或孢子形式。灭菌可通过应用热、化学物质、辐照、高压 或者过滤来实现。蒸汽灭菌是优选的灭菌方法并指在高压灭菌器中的热灭菌 方法。高压灭菌器通常使用加热到121℃至134℃的蒸汽。为了实现无菌， 需要有效的保持时间，至少在121℃保持15分钟或者至少在134℃保持3 分钟。如果具有溶液或粉末的小瓶又包装在布层中，因为它们需要更长时间 达到需要的温度，所以对于液体和器械需要额外的灭菌时间。

本发明的无菌液体药物组合物可通过以下方法制备：以需要的量，将 (2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨 基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药用的酸性反应性化合物加入水中，并且需 要时任选地具有多种本文所列举的其它成分，然后灭菌。灭菌可通过应用热、 化学试剂、辐照、高压或者过滤来实现。

一般而言，混悬液可通过以下方法制备：将已灭菌的(2R,3R)-2-{3-[氨基 (亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其 可药用盐和可药用的酸性反应性化合物加入到含有分散介质和本文所列举 的其它成分的无菌媒介物中。

注射或输注的粉剂是固体、无菌物质或者物质的混合物，其包含分布在 它们最终的容器中的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡 啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯和可药用的酸性反应性化合物，并且当与 规定体积的规定无菌液体振摇时迅速形成澄清的且实际上无颗粒的溶液。溶 解后，它们满足注射或输注用的要求。可使用本领域已知的任何混合技术进 行所述物质的混合。

肠胃外使用的冷冻干燥产品被认为是注射或输注用的粉剂。

在提供固体形式的奥米沙班和可药用的酸性反应性化合物组合物中，可 将奥米沙班和可药用的酸性反应性化合物及本发明药物组合物的任选另外 组分混合成粉剂。可使用本领域已知的任何混合技术进行该混合。优选使用 高剪切混合器、V-共混器(或其它双壳共混器)、料箱共混器(bin blender)或 Turbula混合器-振荡器进行该混合。共混通常进行足够的时间从而确保完全 混合。一旦制得所述共混物，通过本领域已知的操作制备固体形式。

在供无菌药物组合物制备用的无菌粉剂情况下，优选的制备方法可包括 真空干燥和冷冻干燥技术，这可得到(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和可药 用的酸性反应性化合物及任选加上本文所列举的任何其他成分(例如来自其 先前无菌过滤溶液或蒸汽灭菌溶液的那些)的粉剂。所制备的粉剂的灭菌可 通过应用热、化学试剂或辐照来实现。蒸汽灭菌是优选的灭菌方法并且指在 高压灭菌器中热灭菌的方法。在适当小瓶或媒介物中粉剂是已灭菌的。

可将无菌粉剂储存，直到通过加入预灭菌的适当溶剂(如水)然后将组合 物混合来制备无菌注射液。还可以加入预灭菌的适当溶剂并储存所制备的液 体药物组合物。

在另外的实施方案中，本发明涉及供注射用的含水药物组合物，长期储 存后其含有不超过约8.0%的(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4- 基)苯甲酰基氨基]-丁酸的最高杂质水平。在某些实施方案中，(2R,3R)-2-(3- 甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸的最高杂质水平为 0.3%至4.0%，或者0.4%至3.0%，或者0.4%至1.8%，或者0.4%至0.8%， 或者0.43%至0.7%。

在另外的实施方案中，本发明涉及供注射用的含水药物组合物，长期储 存后其含有不超过约5.0%的(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶 -4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的最高杂质水平。在某些实施方案中， (2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲 酯的最高杂质水平为0.7%至4.5%，或者0.8%至4.0%，或者0.9%至3.5%， 或者1.2%至2.2%，或者1.4%至2.0%。

在另外的实施方案中，本发明涉及供注射用的含水药物组合物，其含有 不超过约13%的最高总杂质水平。在一些实施方案中，所述总杂质水平为 1.0%至8.5%，或者1.1%至8.0%，或者1.3%至6.0%，或者1.6%至4.0%， 或者1.8%至3.5%。

(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰 基]氨基}丁酸甲酯和其盐中的酸抗衡离子的相对量是可变化的并取决于(例 如)在制备盐时所选择的具体酸和所使用的方法。优选地，针对约每个当量 的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基] 氨基}丁酸甲酯，本发明的盐包含约一当量的酸。

(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰 基]氨基}丁酸甲酯的酸加成盐可通过以下方法制备：将游离的碱溶于含有适 当酸的水溶液或含水醇溶液或其它适合的溶剂中或者向其中加入适当的酸， 并通过蒸发溶液分离所述盐，或者通过游离的碱与酸在有机溶剂中反应，在 该情况下所述盐可直接分离和/或可通过对溶液进行浓缩获得。

本发明的药物组合物可用于抑制Xa因子。相应地，本发明提供了治疗 或预防能够通过抑制Xa因子的产生来调节的病理状态的方法。

能够用本发明的药物组合物治疗的病理状态的实例包括，例如，急性心 肌梗塞(AMI)、非-ST抬高型心肌梗塞、不稳定型心绞痛、血栓栓塞、与血 栓溶解疗法有关的急性血管闭塞、经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)、短暂性 缺血发作、卒中、间歇性跛行和再狭窄。

本申请描述的药物组合物由于它们抑制凝血级联中的次末端酶，即Xa 因子，而非凝血酶的一般能力，由此可特别地用于抑制血液凝固。根据文献 中所描述的试验，包括体内试验和体外试验，本发明范围之内的药物组合物 可表现出显著的药理学活性，体外测定被认为与人和其它哺乳动物中的药理 学活性有关联。例如，可抑制游离的Xa因子和在凝血酶原酶络合物中装配 的因子(Xa因子、Va因子、钙和磷脂)。Xa因子抑制可通过在抑制剂和酶之 间直接形成络合物来获得并因此不依赖血浆辅因子抗凝血酶III。有效的Xa 因子抑制可如下实现：通过连续静脉内输注、大剂量静脉内给药或者任何其 它合适途径给予本发明的药物组合物，使得期望的效果得以实现，即防止由 凝血酶原经Xa因子诱导形成凝血酶。

除了它们在抗凝血疗法中的用途，Xa因子抑制剂可用于治疗或者预防 其中凝血酶的产生可发挥病理学作用的其它疾病。例如，已经提出，凝血酶 由于它通过细胞表面凝血酶受体的特异性裂解和激活来调节多种不同细胞 型的能力，而对慢性和退行性疾病(如关节炎、癌症、动脉粥样硬化和阿尔 茨海默病)的发病率和死亡率有作用。Xa因子的抑制可有效地阻断凝血酶产 生并因此抵消凝血酶对多种细胞型的任何病理学作用。

肠胃外递送可注射的含水药物组合物的方法是本领域众所周知的。例 如，可注射的含水药物组合物可以具体的剂型静脉内递送。所述剂型可以静 脉内输注剂量递送。

一般而言，在成年人群中，(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的适合输注剂量可以 为0.07mg/Kg体重/小时至0.14mg/Kg体重/小时。另外的适合剂量可以为 0.08mg/Kg体重/小时至0.12mg/Kg体重/小时。所述剂型还可以静脉内大剂 量递送。一般而言在成年人群中，(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄 基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯的适合输注剂量可以 为0.07mg/Kg体重至0.14mg/Kg体重。权衡患者安全性和有效性的适合剂 量还将会是在大约0.08mg/kg体重的i.v.大剂量后接近0.1mg/kg体重/小时 的剂量。

所述可注射的剂型可以与其它药品一起给药，所述药品例如糖蛋白 IIb/IIa抑制剂、未分级的肝素、低分子量肝素、伊诺肝素或氯吡格雷。可选 择地，所述可注射的剂型可以与血液稀释剂组合，所述血液稀释剂包括但不 限于香豆定(coumadin)、华法林或阿司匹林。

本发明的液体可注射药物组合物可通过以下方法制备：将 (2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨 基}丁酸甲酯或其可药用盐和酸性反应性化合物或缓冲液以需要的量加入水 中，需要时任选地加入本申请所列举的各种其它成分，然后搅拌适当时间。

液体药物组合物还可含有在配置药物组合物中常规采用的其它组分。所 述组分的实例之一为卵磷脂。它在本发明组合物中用作乳化剂，其量可为约 0.05wt%至约1wt%(重量百分比)，以及其中范围和具体量的所有组合和亚组 合。更优选地，乳化剂可以约0.1wt%至约0.5wt%的量来使用。可使用的组 分的其它实例为抗微生物的防腐剂，例如苯甲酸或尼泊金(parabens)；助悬剂， 如聚山梨酯80。这些任选组分的选择和它们在本发明组合物中的使用浓度 在本领域普通技术人员的水平之内并且将会从下文所提供的操作实施例中 得到更好的理解。

一般而言，水、适合的油、盐水及二醇(如丙二醇或聚乙二醇)可以是液 体药物组合物的适合溶剂。液体药物组合物的适合溶液可通过以下方法制 备：将(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰 基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐和酸性反应性化合物溶于所述溶剂中，并且 必要时加入缓冲物质。另外可加入抗氧化剂，例如单独或者组合加入亚硫酸 氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸。还可使用EDTA钠。

用于给予(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基) 苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐的有用的药物剂型举例说明如下：

可注射的

适于通过注射给药的肠胃外组合物可通过以下方法制备：将1mg至 30mg/mL按重量计的(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡 啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯或其可药用盐在1mL至200mL的水中搅 拌，并在搅拌下加入2mg/mL至4mg/mL按重量计的柠檬酸钠和2mg/mL至 4mg/mL的柠檬酸一水合物及5mg/mL至8mg/mL氯化钠。最后通过加入氢 氧化钠或盐酸将pH调节至pH4。将所制备的溶液过滤并装入适当的小瓶中。 将溶液和小瓶在高压灭菌器中通过蒸汽灭菌来灭菌。高压灭菌器通常使用加 热到121℃至134℃的蒸汽。为了实现灭菌，可使用至少15分钟的保持时 间。

下列非限制性实施例举例说明发明人制备并使用本发明药物组合物的 优选方法。

实施例

实施例1-化合物(V)的制备

TsOH为具有式CH₃C₆H₄SO₃H的对甲苯磺酸。TsOH指一水合物。向反 应器中装入化合物(IV)(100.0g)和无水四氢呋喃(THF)(320g)。将所得混悬 液冷却下来至-20±3℃并历时55分钟加入六甲基二硅叠氮锂(lithium  hexamethyldisilazide)(LiHMDS)(475.6克,1.3M的THF溶液)并在-20±3℃ 搅拌20分钟。然后历时40分钟将α-溴-间苄基腈在THF中的溶液(65.1g在 181g THF中的溶液)装入反应器同时维持温度在-20±3℃并搅拌另外30分 钟。向反应器中装入固体苯甲酸(126.6克)。然后加入水(1000g)并将混合物 在65±3℃夹套温度和200-233毫巴真空蒸馏。蒸馏至57℃的恒定釜温度 且45℃的恒定顶温度后，停止蒸馏。向热溶液中加入甲苯(432g)并搅拌同 时冷却下来至10±2℃。然后过滤所得混悬液并用水(250克)和甲苯(432克) 洗涤滤饼。在氮气流下将化合物(V)在45-50℃～350毫巴真空干燥24小时 直至恒定重量。分离的固体重76.0克(62.0%产率)。

实施例2-化合物(VII)的制备

将化合物(V)在二氯甲烷和碳酸钠水溶液之间分配。将有机相(其含有(V) 的游离碱)用另外的碳酸钠水溶液洗涤并减压蒸馏并将溶剂用二甲基甲酰胺 (DMF)置换。对该该溶液测定(V)的wt/wt含量。向(VI)(相对于(V)的1.0当 量)在DMF中的混悬液加入2当量的4-甲基吗啉和1.1当量的O-苯并三唑-1- 基-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)。将该混合物在环境温度搅拌直至 酯活化完全(约90分钟)。加入化合物(V)(1当量)的DMF溶液并将所得溶液 搅拌过夜，在此之后HPLC表明反应完全。在75℃加入水并将混合物冷却 至使产物结晶。将混合物冷却至5℃，过滤，并用水洗涤滤饼。在70℃将 产物减压干燥。

实施例3-化合物(VIII)的制备

在充分搅拌的反应器中，使450mL二氯甲烷中的45g化合物(VII)与在 450g水中的61g单过氧酞酸镁(基于可用的氧66.4%,1.5当量)反应至少5 小时，直至反应完全。分离各相并相继用等体积的水、5%碳酸氢钠水溶液 和水洗涤有机相。将所得溶液浓缩至大约40wt%溶液并用180g的甲基异丁 基酮(MIBK)稀释。进一步蒸馏除去残留的二氯甲烷，用适当晶体引晶，并 冷却得到产物，为结晶性固体。将晶体过滤，用30g的MIBK冲洗，并在 50℃减压干燥，得到41.8g的化合物(VIII)(89.3%产率)。

实施例4-化合物(IX)的制备

向200-mL夹套反应烧瓶中装入化合物(VIII)(50.0g,116mmol)和甲醇 (50mL)。将该混合物冷却至-5℃并在建立部分真空(约100托)后密封。加 入无水HCl(52.2g,1.43mol)同时维持反应温度低于0℃。在封闭条件下将 反应混合物在0±1℃搅拌。16小时后，反应完全(经HPLC检测(VIII)少于 2A%)。向中间产物溶液中加入无水甲醇(100mL)同时维持温度低于5℃。 将溶液用NH₃(27.7g,1.62mol)处理，保持温度低于0℃。在将混合物温热 至室温之前，pH检查由溶于蒸馏水的等分溶液构成(8-10的pH表明足够的 氨气负载量)。将反应混合物在20℃搅拌过夜，在该点反应是完全的。

实施例5液体药物组合物的生产方法(Manufacturing Process)

所述液体药物组合物制备如下：

I.在由惰性材料(例如不锈钢或玻璃)制成的容器(vessel)中，搅拌的同时 将(2R,3R)-2-{3-[氨基(亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基] 氨基}丁酸甲酯(量见表1)溶于注射用水中。

II.在由惰性材料(例如不锈钢或玻璃)制成的容器中，搅拌的同时将氯 化钠、柠檬酸一水合物和柠檬酸钠(二水合物)(量见表1)溶于注射用水中直 至完全溶解。搅拌的同时向所述溶液中加入来自步骤I的(2R,3R)-2-{3-[氨基 (亚氨基)甲基]苄基}-3-{[4-(1-氧化吡啶-4-基)苯甲酰基]氨基}丁酸甲酯溶液。

必要时，使用氢氧化钠溶液(例如1M氢氧化钠)或者稀盐酸(例如1M 盐酸)调节pH值。加入注射用水来调节最终重量。

III.颗粒负载减少的过滤：

使用已灭菌的具有0.2μm标称孔径的膜滤器(例如聚偏氟乙烯、聚醚砜 或者聚酰胺)将来自步骤II的溶液过滤。

IV.将来自步骤III的溶液灌装到已灭菌的无色注射小瓶中。

然后将注射小瓶用具有插入密封盘的已灭菌flip-off盖或者用注射塞和 具有撕开盖的法兰盖封闭。

V.按照Ph.Eur./USP通过在高压灭菌器中的饱和蒸汽对密封的容器进 行灭菌(例如在≥+121℃下≥15分钟)。

VI.检查已灭菌容器是否有粗污染物(coarse contaminants)、完整的密封 和颗粒物。

所使用设备的灭菌方法

通过蒸汽对过滤设备(作为直接与产品接触的设备的部分)、注射塞和具 有插入密封盘的flip-off盖灭菌，例如在≥+121℃持续至少15分钟 (Ph.Eur./USP)。

所制备的液体药物组合物的组成在表1中给出：

表1

实施例 A B C 奥米沙班[mg] 1.000 5.000 50.000 柠檬酸一水合物[mg] 2.53 2.53 2.53 柠檬酸钠二水合物[mg] 3.15 3.15 3.15 氯化钠[mg] 7.00 7.00 7.00 注射用水 至1.007mL 至1.007mL 至1.007mL

实施例6依赖于pH和重复高压灭菌的杂质水平

如实施例5中所述，制备含有1mg/mL奥米沙班的液体药物组合物。使 用氢氧化钠溶液(1M氢氧化钠)或者稀盐酸(1M盐酸)调节为适当的pH值。

通过HPLC分析(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯 甲酰基氨基]-丁酸甲酯和(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基) 苯甲酰基氨基]-丁酸的含量并显示在表2和3中。

表2：(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨 基]-丁酸甲酯的增加；通过HPLC测量值并以%为单位给出。

表3：(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]- 丁酸的增加；通过HPLC测量值并以%为单位给出。

(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁 酸甲酯的水平在最低pH时是最低的，而(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1- 氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸的水平则在pH4时显示最小值。

终端灭菌

在≥15分钟/≥+121℃的标准条件下在高压灭菌器中进行终端灭菌。

奥米沙班、(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰 基氨基]-丁酸甲酯和(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲 酰基氨基]-丁酸的测定通过如下梯度高效液相色谱系统(HPLC)来进行：

流动相A

通常，将8.16g的无水磷酸二氢钾转移到玻璃烧杯中。加入2000mL 的水并使用pH-计用磷酸(约4mL)调节至2.15的pH。通过1.5μm过滤器过 滤流动相。

流动相A的稳定性：在室温1个月

流动相B

通常，向500mL的乙腈中加入500mL的流动相。混合并脱气。

流动相B的稳定性：在室温1个月

梯度：

对于标准物的分析和系统适应性测试(不适于空白!)，梯度可以下列方式 缩短：

操作

实施例7依赖于奥米沙班浓度和高压灭菌的杂质水平

如实施例5中所述，制备含有1、5或50mg/mL奥米沙班的液体药物组 合物。使用氢氧化钠溶液(1M氢氧化钠)或者稀盐酸(1M盐酸)调节为适当的 pH值。

如实施例6中所述，通过HPLC分析(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄 基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的含量并显示在表4中。

表4：(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨 基]-丁酸甲酯的增加；通过HPLC测量值并以%为单位给出。

n.t.表示未测试

(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁 酸甲酯的水平不取决于奥米沙班的浓度或者小瓶体积。额外的高压灭菌导致 较高的(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]- 丁酸甲酯水平，这不依赖于奥米沙班的浓度或者小瓶体积。

实施例8依赖于pH和储存时间的杂质水平

如实施例5中所述，制备含有1mg/mL奥米沙班的液体药物组合物。使 用氢氧化钠溶液(1M氢氧化钠)或者稀盐酸(1M盐酸)调节为适当的pH值。 将准备的小瓶高压灭菌一次并在40℃和75%RH(相对湿度)储存。

如实施例6中所记载的，通过HPLC分析(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄 基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯和(2R,3R)-2-(3-甲脒基- 苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸的含量并显示在表5和6 中。

表5：(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨 基]-丁酸甲酯的增加；通过HPLC测量值并以%为单位给出。

表6：(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]- 丁酸的增加；通过HPLC测量值并以%为单位给出。

(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸 的水平随着较低的pH增加较快，而(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧 化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的水平在不同pH值是平行的 (parallel)，这表明随着储存时间的推移相同的斜率和增加比率。

实施例9依赖于酸性反应性化合物和储存时间的杂质水平

基本上如实施例5中所述，制备含有1mg/mL奥米沙班的液体药物组合 物。不同于实施例5中所使用的柠檬酸一水合物和柠檬酸钠二水合物，使用 酒石酸、琥珀酸、苹果酸和磷酸，浓度为22.8mMol/L。为了比较，还包括 无酸性反应性化合物的样品。在所有样品(还包括“无”样品)中使用氢氧化 钠溶液(1M氢氧化钠)或者稀盐酸(1M盐酸)调节为适当的pH值。对所准备 的小瓶高压灭菌一次并在40℃和75%RH(相对湿度)储存。

终端灭菌

在≥15分钟/≥+121℃的标准条件下在高压灭菌器中进行终端灭菌。

奥米沙班、(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰 基氨基]-丁酸甲酯和(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲 酰基氨基]-丁酸的测定通过如下梯度高效液相色谱系统(HPLC)来进行并显 示在表7中：

流动相A

将6.8g的无水磷酸二氢钾转移至玻璃烧杯中并加入2000mL的水。使 用pH-计用磷酸(约0.5mL)，将pH值调节至3.1。

流动相B

向800mL的乙腈中加入200mL的流动相A，然后混合并脱气。

流动相B的稳定性：在室温1个月

梯度：

操作

表7：储存时间开始和1个月后式II和式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

表8：储存时间开始和2个月后式II和式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

表9：储存时间开始和3个月后式II和式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸 的水平随着较低/较高的pH增加较快，而(2R,3R)-2-(3-氨甲酰基-苄 基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯的水平在不同pH值是 平行的，这表明随着储存时间的推移相同的斜率和增加比率。两种趋势都不 依赖于所使用的酸性反应性化合物。

实施例10依赖于柠檬酸和储存时间的杂质水平

如实施例9中所述，制备含有1mg/mL奥米沙班的液体药物组合物。使 用柠檬酸，浓度为22.8mmol/L。使用氢氧化钠溶液(1M氢氧化钠)或者稀盐 酸(1M盐酸)调节为适当的pH。将所准备的小瓶高压灭菌一次并在40℃和 75%RH(相对湿度)储存。

如实施例9中所记载的，通过HPLC分析(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄 基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸(式II)和(2R,3R)-2-(3-氨甲酰 基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯(式III)的含量并显 示在表10中。

表10：储存时间开始和1个月后式II和式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

表11：储存时间开始和2个月后式II和式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

表12：储存时间开始和3个月后式II和式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

实施例11依赖于酸性反应性化合物、pH和重复高压灭菌的杂质水平

基本上如实施例5中所述，制备含有1mg/mL奥米沙班的液体药物组合 物。不同于实施例5中所使用的柠檬酸一水合物和柠檬酸钠二水合物，使用 酒石酸、琥珀酸、苹果酸、柠檬酸和磷酸，浓度为22.8mMol/L。为了比较， 还包括无酸性反应性化合物的样品。在所有样品(还包括“无”样品)中使用 氢氧化钠溶液(1M氢氧化钠)或者稀盐酸(1M盐酸)调节为适当的pH值。将 准备的小瓶高压灭菌一次并经终端灭菌两次。在≥15分钟/≥+121℃的标准条 件下在高压灭菌器中进行终端灭菌。

如实施例9中所公开的，通过HPLC分析(2R,3R)-2-(3-甲脒基-苄 基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸(式II)和(2R,3R)-2-(3-氨甲酰 基-苄基)-3-[4-(1-氧化-吡啶-4-基)苯甲酰基氨基]-丁酸甲酯(式III)的含量并显 示在表13和14中。

表13：高压灭菌开始和1次或者2次后式II的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

<表示小于*偏离数据(outlying data)

表14:高压灭菌开始和1次或者2次后式III的水平；通过HPLC测量 值并以%为单位给出。

式III的水平高于式II的水平并以与高压灭菌次数的线性依赖性增加。 式II和式III的杂质水平取决于所测试液体药物组合物的pH值并且不取决 于所使用的酸性反应性化合物。