一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法

摘要

本发明公开了一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：（1）选取带有寄生才女虫的珍珠贝，打开壳体，露出壳体上的才女虫洞穴，预处理后获得才女虫洞穴；（2）在才女虫洞穴两端各设一个开口，自开口处注入麻醉液，等待3～5分钟后，完全打开才女虫洞穴，暴露出洞穴内的才女虫；（3）将才女虫取出，置于装有解麻醉剂的容器中，使才女虫苏醒，获得完整的才女虫个体，其中从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min。该方法能避免由于才女虫的挣扎而引起的虫体断裂或死亡，或误伤、误断虫体，能获取活体的、完整的才女虫。

说明书

技术领域

本发明涉及一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法。

背景技术

才女虫病是珍珠贝养殖中最常见、危害极大的寄生虫病，能够钻入贝壳内，形成各种形 状的洞穴，俗称珍珠贝“黑心肝病”。由于才女虫具有极强的钻孔能力，能够钻穿贝壳，侵入 到珍珠贝实质组织，所以经常使珍珠贝的各种器官发生炎症、萎缩等病变，严重影响珍珠贝 的生长与发育，甚至导致珍珠贝大规模死亡。活体特征是才女虫形态分类的重要依据，获得 活体的才女虫也是研究才女虫习性、建立幼虫培养技术所必备的条件。完整的虫体是形态分 类最基本的条件，失去才女虫的任何一部分都有可能导致分类上的错误。所以，获得活体、 完整的才女虫对种类鉴定和生活史的研究都具有重要的意义。才女虫隶属于环节动物门多毛 纲，是一种柔软、容易断裂的虫体，所以，想获取完整的才女虫具有一定的难度。而珍珠贝 寄生的才女虫由于具有洞栖习性，坚硬贝壳的庇护和虫体本身柔软易断的特性使得获取完整 活体才女虫的难度更大。

发明内容

本发明的目的在于一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，该方法能避免由于才女虫 的挣扎而引起的虫体断裂或死亡，或误伤、误断虫体，能获取活体的、完整的才女虫。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的 方法，含以下步骤：

（1）选取带有寄生才女虫的珍珠贝，打开壳体，露出壳体上的才女虫洞穴，预处理后获 得才女虫洞穴；

（2）在才女虫洞穴两端各设一个开口，自开口处注入麻醉液，等待3～5分钟后，完全打 开才女虫洞穴，暴露出洞穴内的才女虫；

（3）将才女虫取出，置于装有解麻醉剂的容器中，使才女虫苏醒，获得完整的才女虫个 体，其中从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min。

本发明步骤（1）中所述的预处理包括去除才女虫洞穴周边的珍珠贝内脏，并采用过滤海 水清洗。

本发明步骤（2）中所述开口的长度优选为0.5～1.5cm。

本发明步骤（2）中所述麻醉液为氯化镁MgCl₂和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化 镁MgCl₂的浓度为0.2～0.4mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.11～0.14mol/L。

本发明所述氯化镁MgCl₂的浓度为0.3mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。

本发明每个开口注入麻醉液的用量为10～15μL。

本发明步骤（3）中所述的解麻醉剂为过滤海水。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

（1）现有技术并不使用麻醉剂，而是直接挑开洞穴分离才女虫，这样得到完整才女虫的 比率低，且耗时长，得到的不完整的才女虫的示意图见图5；而本发明首次在挑取才女虫时使 用麻醉剂，既能提高获得虫体的完整率，又能缩短挑取虫体时间；

（2）本发明申请人对麻醉时间和麻醉剂剂量进行了探索发现，用纯粹海水作为溶剂配置 的MgCl₂溶液更容易导致虫体反应剧烈、挣扎或麻醉过度而导致死亡，而应用生理盐水 （0.12mol/L NaCl溶液）作为溶剂配置MgCl₂溶液具有以下优点：由于才女虫属于海水寄生虫， 淡水配置的生理盐水对其具有一定的麻醉作用，但是麻醉作用不够强；但是，若与MgCl₂混 合配置麻醉剂却能达到很好效果，生理盐水的等渗作用同时能防止才女虫脱水而死，也能减 轻才女虫的挣扎，增加虫体的完整率，虫体也具有更高的苏醒率。

附图说明

图1是本发明实施例1中选取的带有才女虫洞穴的珍珠贝，其中箭头所指的为才女虫洞 穴；

图2是本发明实施例1中才女虫头部、尾部伸出洞穴外的示意图；

图3是本发明实施例1中才女虫在洞穴内麻醉后的完整才女虫；

图4是本发明实施例1中解麻醉后的完整的才女虫，该才女虫触手、尾部都齐全；其中 1为尾部，2为头部；

图5是不完整的才女虫的示意图，该才女虫的头部无触手，尾部断裂。

具体实施方式

实施例1

本实施例提供的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：

（1）用尖嘴钳在珍珠贝贝壳边缘撕开一道小口，螺丝刀自小口内插入将贝壳撬开，小心 除去洞穴旁边的内脏，过滤海水将洞穴区域冲洗干净，珍珠贝中的才女虫洞穴如图1中所示；

（2）分别在距洞穴两端1cm处用解剖刀切开一个小口，用解剖针挑开贝壳碎屑，直至 将洞穴两端挑开长度约1cm的开口，才女虫头部、尾部伸出洞穴外的示意图如图2中所示；

（3）取样枪吸取10～15μL麻醉液，自洞穴开口处缓缓将其注入，洞穴两端都注入 10～15μL，注入麻醉剂后等待3～5min，这时虫体处于麻醉状态，可以避免其挣扎而导致断裂 等现象，两端共注射入麻醉剂20～30μL，其中麻醉液的用量非常重要，如果麻醉液用量过多， 则会导致才女虫虫体不能苏醒而引起死亡，如果麻醉液用量过少，则不能起到足够的麻醉作 用，会导致后续的才女虫不能完整及时的取出；麻醉时间也很重要，如麻醉时间过短，则才 女虫虫体麻醉不足，会动，则不能取出完整的才女虫虫体，如麻醉时间过长，则会导致才女 虫虫体死亡，不能取出活体的才女虫，具体关于麻醉时间的研究见下表1中所示。

其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl₂的浓度 为0.3mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L，配制过程为：在100mL蒸馏水中，加入MgCl₂2.85g，加入Nacl0.7g，然后高温高压灭菌、保存待用。

表1麻醉时间实验结果

表1中的实验结果表明，麻醉1min并不能使虫体完全不动，麻醉效果不明显，而麻醉 30min后，虫体苏醒率却很低，故麻醉时间应控制在3～15分钟以内，最佳是在3～5min内。

（4）用解剖刀在距离洞穴1cm左右的边缘处切开小口，然后用解剖针挑开碎屑，逐步 向洞穴方向挑，直至将洞穴完全打开，暴露出洞穴内的才女虫，在洞穴内麻醉后的完整才女 虫见图3中所示；

（5）用镊子将才女虫小心从洞穴内夹出，将其置于装有解麻醉剂（过滤海水）的平皿中， 虫体会在3～5min内苏醒，从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min，从注入麻醉 剂到开始解麻醉，一般时间控制在10min，最多不能超过15min，否则才女虫不能苏醒，解麻 醉后的完整的才女虫如图4中所示，该才女虫触手、尾部都齐全；其中1为尾部，2为头部； 而不采用麻醉剂时，不完整的才女虫的示意图如图5中所示，该才女虫的头部无触手，尾部 断裂。

其中解麻醉剂过滤海水通过以下方法获得：用真空抽滤泵将海水通过孔径为0.22μm的过 滤膜，过滤后的海水即为解麻醉剂。

实施例2

本实施例提供的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：

（1）用尖嘴钳在珍珠贝贝壳边缘撕开一道小口，螺丝刀自小口内插入将贝壳撬开，小心 除去洞穴旁边的内脏，过滤海水将洞穴区域冲洗干净；

（2）分别在距洞穴两端1cm处用解剖刀切开一个小口，用解剖针挑开贝壳碎屑，直至 将洞穴两端挑开长度约1cm的开口；

（3）取样枪吸取10～15μL麻醉液，自洞穴开口处缓缓将其注入，洞穴两端都注入 10～15μL，注入麻醉剂后等待3～5min，这时虫体处于麻醉状态，可以避免其挣扎而导致断裂 等现象，两端共注射入麻醉剂20～30μL，其中麻醉液的用量非常重要，如果麻醉液用量过多， 则会导致才女虫虫体不能苏醒而引起死亡，如果麻醉液用量过少，则不能起到足够的麻醉作 用，会导致后续的才女虫不能完整及时的取出；麻醉时间也很重要，如麻醉时间过短，则才 女虫虫体麻醉不足，会动，则不能取出完整的才女虫虫体，如麻醉时间过长，则会导致才女 虫虫体死亡，不能取出活体的才女虫；

其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl₂的浓度 为0.2mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.11mol/L。

（4）用解剖刀在距离洞穴1cm左右的边缘处切开小口，然后用解剖针挑开碎屑，逐步 向洞穴方向挑，直至将洞穴完全打开，暴露出洞穴内的才女虫；

（5）用镊子将才女虫小心从洞穴内夹出，将其置于装有解麻醉剂（过滤海水）的平皿中， 虫体会在3～5min内苏醒，从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min，从注入麻醉 剂到开始解麻醉，一般时间控制在10min，最多不能超过15min，否则才女虫不能苏醒。

其中解麻醉剂过滤海水通过以下方法获得：用真空抽滤泵将海水通过孔径为0.22μm的过 滤膜，过滤后的海水即为解麻醉剂。

实施例3

本实施例提供的获取珍珠贝贝壳内寄生才女虫的方法，含以下步骤：

（1）用尖嘴钳在珍珠贝贝壳边缘撕开一道小口，螺丝刀自小口内插入将贝壳撬开，小心 除去洞穴旁边的内脏，过滤海水将洞穴区域冲洗干净；

（2）分别在距洞穴两端1cm处用解剖刀切开一个小口，用解剖针挑开贝壳碎屑，直至 将洞穴两端挑开长度约1cm的开口；

（3）取样枪吸取10～15μL麻醉液，自洞穴开口处缓缓将其注入，洞穴两端都注入 10～15μL，注入麻醉剂后等待3～5min，这时虫体处于麻醉状态，可以避免其挣扎而导致断裂 等现象，两端共注射入麻醉剂20～30μL，其中麻醉液的用量非常重要，如果麻醉液用量过多， 则会导致才女虫虫体不能苏醒而引起死亡，如果麻醉液用量过少，则不能起到足够的麻醉作 用，会导致后续的才女虫不能完整及时的取出；麻醉时间也很重要，如麻醉时间过短，则才 女虫虫体麻醉不足，会动，则不能取出完整的才女虫虫体，如麻醉时间过长，则会导致才女 虫虫体死亡，不能取出活体的才女虫；

其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl₂的浓度 为0.4mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.14mol/L。

（4）用解剖刀在距离洞穴1cm左右的边缘处切开小口，然后用解剖针挑开碎屑，逐步 向洞穴方向挑，直至将洞穴完全打开，暴露出洞穴内的才女虫；

（5）用镊子将才女虫小心从洞穴内夹出，将其置于装有解麻醉剂（过滤海水）的平皿中， 虫体会在3～5min内苏醒，从注入麻醉液到开始解麻醉，时间控制在10～15min，从注入麻醉 剂到开始解麻醉，一般时间控制在10min，最多不能超过15min，否则才女虫不能苏醒。

其中解麻醉剂过滤海水通过以下方法获得：用真空抽滤泵将海水通过孔径为0.22μm的过 滤膜，过滤后的海水即为解麻醉剂。

实施例4

与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其 中氯化镁MgCl₂的浓度为0.1mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。

实施例5

与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂和氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其 中氯化镁MgCl₂的浓度为0.6mol/L，氯化钠NaCl的浓度为0.12mol/L。

对照实施例1

与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl₂的浓度为0.1mol/L。

对照实施例2

与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl₂的浓度为0.3mol/L。

对照实施例3

与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化镁MgCl₂的蒸馏水溶液，其中氯化镁MgCl₂的浓度为0.6mol/L。

对照实施例4

与实施例3不同的是，其中，麻醉液为氯化钠NaCl的蒸馏水溶液，其中氯化钠NaCl的 浓度为0.12mol/L。

上述实施例1、4、5和对照实施例1-4中的麻醉效果如下表2中所示：

表2实施例1、4、5和对照实施例1-4的麻醉效果实验结果

表2中的实验结果表明，0.12mol/L Nacl溶液对虫体具有一定的麻醉作用；0.1mol/L MgCl₂溶液麻醉作用不明显，虫体在挑取过程中活动剧烈，取得完整虫体的几率小；0.6mol/L MgCl₂溶液麻醉作用明显，但是滴加麻醉剂开始阶段发现，虫体反应比滴加原池水反应更加 激烈，进入麻醉阶段时间也很短，苏醒率比其他浓度组明显降低；0.3mol/L MgCl₂溶液具有 较高的完整虫体率和苏醒率，是实验组中最适合的浓度；另外，MgCl₂—Nacl混合液的麻醉 作用总体都比单独使用MgCl₂溶液或Nacl溶液要好，0.12mol/L NaCl溶液是生理盐水的浓 度，不但具有一定的麻醉作用，而且具有维持渗透压的作用，能够避免才女虫细胞破裂，不 会让细胞过分吸水或脱水，这样能保证麻醉后的才女虫有更好的苏醒率。

本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。本发明的上述实 施例都只能认为是对本发明的说明而不是限制，凡是依据本发明的实质技术对以上实施例所 作的任何细微修改、等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。