公开/公告号CN103575841A
专利类型发明专利
公开/公告日2014-02-12
原文格式PDF
申请/专利权人 洛阳惠中兽药有限公司;
申请/专利号CN201210257529.2
申请日2012-07-23
分类号G01N30/88(20060101);
代理机构北京华夏正合知识产权代理事务所(普通合伙);
代理人韩登营
地址 471000 河南省洛阳市洛南新区政和路15号
入库时间 2024-02-19 22:23:04
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2016-02-03
授权
授权
2014-03-12
实质审查的生效 IPC(主分类):G01N30/88 申请日:20120723
实质审查的生效
2014-02-12
公开
公开
技术领域
本发明涉及一种七清败毒颗粒质量控制方法,特别是指一种对七 清败毒颗粒中黄芪苷和大黄素的含量同时进行测定的方法。
背景技术
七清败毒颗粒是一种常见的兽药方,具有清热解毒,燥湿止泻等 功效。药方含黄芩、虎杖、白头翁、苦参、板蓝根、绵马贯众、大青 叶等,主要用于湿热泄泻,雏鸡白痢,同时也用于防治猪繁殖与呼吸 综合症、温和性猪瘟、圆环病毒、蓝耳病毒、流感病毒和禽温和型流 感、非典型新城疫、慢性呼吸道病、传染性支气管炎、传染性喉气管 炎、法氏囊病、减蛋综合症、禽肠毒综合症等,还具有增强免疫、降 低应激反应等功效,并可作为保健佳品使用。因此,七清败毒颗粒在 市场上得到普遍认可。由于七清败毒颗粒药物中黄芪苷、大黄素的作 用,黄芪苷、大黄素含量对七清败毒颗粒的质量控制非常重要。《中 华人民共和国兽药典》(2010年二部)公开了一种使用薄层色谱法进 行七清败毒颗粒质量控制的方法,但该七清败毒颗粒的质量标准只对 黄芩苷、虎杖、大黄素、靛蓝和靛玉红的鉴别,没有具体的含量测定 项,因此,对七清败毒颗粒质量控制难以达到量化的标准。
由于七清败毒颗粒是一种含多组分复杂成分的兽药复方中药,由 于成分复杂,造成含量不易控制,使中药的安全性和有效性受到影响。
发明内容
有鉴于此,本发明的主要目的在于提供一种使用HPLC色谱法同 时测定黄芪苷和大黄素含量的方法,以实现对七清败毒颗粒的质量控 制。
即本发明提供了一种七清败毒颗粒质量控制方法,为使用HPLC 色谱法同时测定黄芪苷和大黄素含量。
优选地,本发明所述的质量控制方法,包括以下步骤:
A、分别制备黄芪苷和大黄素的标准样品;
B、制备七清败毒颗粒的供试样品;
C、将所述的黄芪苷和大黄素的标准样品、和七清败毒颗粒的供 试样品分别经HPLC色谱层析法处理,比较计算获得七清败毒颗粒的 供试样品中的黄芪苷和大黄素的含量。
即本发明是通过将黄芪苷的标准样品和大黄素的标准样品、和七 清败毒颗粒的供试样品分别经HPLC色谱层析法处理,以获得黄芪苷 的标准样品和大黄素的标准样品的标准曲线后,与七清败毒颗粒的供 试样品经HPLC色谱层析法处理的色谱曲线对照,以获得七清败毒颗 粒的供试样品中的黄芪苷和大黄素的含量。
为了充分释放七清败毒颗粒的供试样品,可以使用有机溶剂进行 提取;更优选地,使用乙醇进行提取;更优选地,使用70%的乙醇对 七清败毒颗粒的供试样品进行提取;也可以使用本领域常用的其他任 何有机溶剂提取。
为了充分释放七清败毒颗粒的供试样品,还可以使用机械处理的 方法对七清败毒颗粒的供试样品进行处理;优选地,可以对七清败毒 颗粒进行研磨处理;更优选地,可以对七清败毒颗粒进行超声震荡处 理;也可以使用本领域常用的其他机械处理的方法对七清败毒颗粒的 供试样品进行处理。
本发明的七清败毒颗粒质量控制方法中,使用了HPLC色谱法对 黄芪苷的标准样品和大黄素的标准样品、和七清败毒颗粒的供试样品 进行处理,其中,HPLC色谱法中使用的色谱柱为反相色谱柱;优选 地,HPLC色谱法中使用的色谱柱为C18柱。
优选地,所述的HPLC色谱层析法中使用的流动相为乙腈-水-磷 酸。优选地,所述的HPLC色谱层析法中流动相比例为乙腈-水-磷酸 =22:78:0.2。
优选地,所述的HPLC色谱层析法中的流速为1ml/min;检测波 长:270nm;柱温:35℃。
由上可以看出,本发明提供了一种HPLC色谱法测定法,同时测 定七清败毒颗粒中的黄芪苷和大黄素含量,解决了七清败毒颗粒的质 量控制问题。
发明效果
本发明参考2010版兽药典二部黄芩中黄芩苷和虎杖中大黄素的 含量的检测方法,结合实际情况进行适当改进,并经方法学验证。该 七清败毒颗粒的含量控制方法操作简单,实现了对有效成分种类复杂 的中药产品中有效成分量化控制要求,使产品的质量水平提升,具有 商业上推广的前景。
附图说明
图1为黄芪苷的标准样品和大黄素的标准样品的色谱图;
图2为阴性对照的色谱图;
图3为七清败毒颗粒的供试样品的色谱图。
具体实施方式
本发明实施例中使用的C18柱是指反相ODS柱(十八烷基硅烷 键合硅胶填料,Octadecylsilyl,简称ODS柱),通过本发明的实施 例,本领域技术人员知晓所有的C18柱都可以用来实现本发明,如 waters 的色谱柱等都可以实现本发明。
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点 将会随着描述更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明 的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发 明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或 替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1HPLC法同时测定七清败毒颗粒中黄芩苷和大黄素的含量
本发明实施例中HPLC色谱条件为:
色谱柱:Agilent-C18(150mm X 4.6mm,5um)。
流动相:乙腈-水-磷酸(22:78:0.2)
流速:1ml/min;检测波长:270nm;柱温:35℃。
对照品溶液制备:取60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品和大黄素 对照品各适量,精密称定,置同一25ml量瓶中,加入70%的乙醇使 溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含黄芩苷0.3mg、大黄素20ug 的对照品溶液。
供试品溶液制备:取研细的供试品约0.2g,精密称定,置25ml 量瓶中,加入70%的乙醇20ml,超声振荡提取15min后,放冷至室 温,加70%的乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶 液。
测定法:精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul,注入液相色谱 仪,记录色谱图,以外标法按峰面积计算,即得。
本发明的含量测定方法采用的色谱条件、样品处理方法均为新方 法。
1、仪器与试剂、样品
仪器:Waterse2695高效液相色谱仪;UV2489紫外检测器。
试剂:甲醇、乙睛为色谱纯;冰醋酸为分析纯;水为二次重蒸水。
对照品:黄芩苷(110715-201014)、大黄素(110756-201110)购 自中国兽医药品监察所
样品:七清败毒颗粒,由洛阳惠中兽药有限公司生产。{[处方]黄芩 100g虎杖100g白头翁80g苦参80g板蓝根100g绵马贯众60g大 青叶40g;[制法]以上7味,加水煎煮2次,第一次2小时,第二 次1小时,煎液滤过,滤液合并,80℃以下减压浓缩至相对密度为 1.30~1.35(55℃),得清膏,加入适量的蔗糖和糊精,混匀,制成 颗粒,干燥,制成560g,即得。}
2色谱条件:
色谱柱:Agilent-C18(150mm X 4.6mm,5um)。
流动相:乙腈-水-磷酸(22:78:0.2)
流速:1ml/min;检测波长:270nm;柱温:35℃。
3溶液的制备:
①对照品溶液的制备:
a.取60℃减压干燥4h的黄芩苷对照品适量,精密称定,置25ml 量瓶中,加入70%的乙醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每毫升含 黄芩苷0.3mg的对照品溶液。
b.取60℃减压干燥4h的大黄素对照品适量,精密称定,加甲醇 制成每1m1约含大黄素20ug的对照品溶液。
②供试品溶液的制备:取研细的供试品约0.2g,精密称定,置 25ml量瓶中,加入70%的乙醇20ml,超声振荡提取15min后,放冷 至室温,加70%的乙醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为供试 品溶液。
③阴性样品的制备:取未加黄芩和虎杖的样品,按供试品溶液的制 备方法制备,按要点2中的色谱条件测定,结果见图2。在与对照品 图谱(图1)比较可见,在对照品图谱中黄芩苷、大黄素峰出现的位 置上未见有峰出现。
4标准曲线的制备:
分别取要点3中对照品溶液5,10,20,30,50ul,注入高效液相 色谱仪,按照要点2的色谱条件,得到图1的色谱图,测定峰面积。 以对照进样量为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线, 得回归方程黄芩苷:y=93186x+25150,R2=0.9993;大黄素: y=6021.2x-22.043,R2=0.9991。结果表明黄芩苷在1.5~15ug,大黄素 在100~1000ng范围内线性关系良好。
5精密度试验:
取七清败毒颗粒1份,按要点3项下②中方法制备供试液,取供 试液10ul,按上述色谱条件测定,结果如图3。连续重复进样6次, 以外标法计算黄芩苷和大黄素的含量,结果测得RSD分别为1.34% 和2.16%。
6回收率测定:
取己知含量的七清败毒颗粒6份,精密称定,分别向其中加 入黄芩苷对照品溶液10ml、大黄素对照品溶液10ml按3项下②中方 法制备供试液,在要点2的色谱条件下测定各自含量,计算回收率。 结果平均回收率分别为98.05%、97.94%,RSD分别为1.93%、2.08%。
7样品测定:
分别取相同工艺制备的12个批号七清败毒颗粒样品(批号: 100501、100502、100503、100504、100601、100602、100603、 100604、100702、100703、100704、100801洛阳惠中兽药有限 公司生产),按3项下②中方法制备供试液,分别精密吸取对照品溶 液和供试品溶液10ul,按上述色谱条件,测定,计算样品中黄芩苷和 大黄素的含量。经对12批样品进行黄芩苷和大黄素含量测定,结果 如下表1。其中黄芩苷最高值为17.186mg/g,最低值为14.534mg/g, 大黄素最高值为1.307mg/g,最低值为1.009mg/g。根据黄芪药材中 黄芩苷的限量为9.0%,虎杖药材中大黄素的限量为0.6%,计算得本 品中黄芩苷的理论含量为16.07mg/g,大黄素为1.07mg/g。考虑到大 生产过程中的损失,将本品中黄芩苷的含量的限度定为每克颗粒中不 少于12.5mg,大黄素为0.8mg/g,以控制内在质量。
表1使用本发明的方法对12批样品的测定结果
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明, 凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等, 均应包含在本发明的保护范围之内。
机译: 对南清七并沼害虫的控制成分和害虫控制方式无效
机译: 仁久南七郎之汤町良次堂土生清
机译: 仁久南七郎之汤町良次堂土生清