2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物及其制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物及其制备方法与应用。该类化合物如式I所示。该式I所示2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物，可经历多步有机合成反应制备，包括Mitsunobu Reaction、酸胺缩合等。该2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物对多种细胞株具有普适的高效抑制率，对制备抗肿瘤药物具有重要的意义。

说明书

技术领域

本发明涉及一种2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物及其制备方法与应用。

背景技术

作为药物活性化合物和药物化学合成骨架，吡啶-2,6-二甲酰基-喹啉-3（或-6）- 胺类似物的甲基盐（喹啉氮原子形成季铵盐）被报道具有抗癌活性。

在专利WO2004/072027A2(US2007/0232572A1)中，记载了甲基化的吡啶-2,6- 二甲酰基-喹啉-3（或-6）-胺的盐（喹啉氮原子形成季铵盐）对于端粒G-四链体有较 强的稳定作用，并且具有抗癌活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物及其制备方 法与应用。

本发明提供的2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物，其结构通式如式I所 示，

式I

所述式I中，R为-O(CH₂)mCH₃、-O(CH₂)nN(CH₃)₂、-O(CH₂)₂N(CH₂)₄、 -O(CH₂)₂N(CH₂CH₃)₂或-O(CH₂)₂NH[(COO(CH₃)₃)]；

m为1-4的整数；具体的，m为1、2、3、4、1-3或2-4的整数；

n为2或3。

具体的，所述式I所示化合物为如下化合物中的任意一种

另外，上述式I所示化合物在药学上可接受的盐，也属于本发明的保护范围。

其中，所述盐为无机酸盐或有机酸盐；

所述无机酸盐中的无机酸为盐酸、硫酸或磷酸；

所述有机酸盐中的有机酸为乙酸、三氟乙酸、丙二酸、柠檬酸或对甲苯磺酸。

本发明提供的制备所述式I所示化合物的方法，包括如下步骤：

将式II所示化合物2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酸和1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺于有机 溶剂中于-15—5℃进行反应1—3小时后；

再加入有机碱于-15—5℃进行反应0.5—1.5小时后；

再加入式III所示化合物4-取代-喹啉-2-氨的有机溶液于室温进行酸胺缩合反应 12—24小时，得到所述式I所示化合物；

式II

式III

所述式III中，R为-O(CH₂)mCH₃、-O(CH₂)nN(CH₃)₂、-O(CH₂)₂N(CH₂)₄、 -O(CH₂)₂N(CH₂CH₃)₂或-O(CH₂)₂NH[(COO(CH₃)₃)]；

m为1-4的整数；

n为2或3。

上述方法中，所述有机碱选自三乙胺、吡啶和哌啶中的至少一种；

所述有机溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷和1,2-二氯乙烷中的至少一种；

所述式III所示化合物4-取代-喹啉-2-氨的有机溶液中，溶剂选自二氯甲烷、三氯 甲烷和1,2-二氯乙烷中的至少一种。

式II所示化合物、式III所示化合物、1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺和有机碱的投 料摩尔比为0.5-1：1.0-2：1.0-2.5：1.0-2.5，具体为0.7：1.4：1.5：1.8；

所述方法具体可为如下步骤：

将式II所示化合物2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酸和1-氯-N,N,2-三甲基-1-丙烯胺于有机 溶剂中于0℃进行反应2小时后；

再加入有机碱于0℃进行反应1小时后；

再加入式III所示化合物4-取代-喹啉-2-氨的有机溶液于室温进行酸胺缩合反应12 小时，得到所述式I所示化合物；

上述本发明提供的式I所示化合物或所述盐在制备抑制肿瘤产品中的应用，也属 于本发明的保护范围。其中，所述肿瘤为乳腺癌、胃癌、宫颈癌、白血病、肝癌、肺 癌、结肠癌或肝癌。

具体的，所述乳腺癌细胞为人乳腺癌MCF-7细胞；所述胃癌细胞为人胃癌 BGC-823细胞；所述宫颈癌细胞为人宫颈癌Hela细胞；所述白血病细胞为人白血病 HL-60细胞；所述肝癌细胞为人肝癌HepG-2细胞；所述肺癌细胞为人肺癌A549细胞； 所述结肠癌细胞为人结肠癌HCT-8细胞；所述肝癌细胞为人肝癌BEL-7402细胞。

本发明提供的式I所示2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基-喹啉-2-胺衍生物，可经历两步 有机合成反应制备，包括Mitsunobu Reaction、酸胺缩合等。该2,2’-联吡啶-6,6’-二甲 酰基-喹啉-2-胺衍生物对多种细胞株具有普适的高效抑制率，对制备抗肿瘤药物具有重 要的意义。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所 述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径而 得。

式III化合物4-取代-喹啉-2-氨均是通过2-氨基喹啉酮与相应的醇进行Mitsunobu 反应制备而得：

具体如下步骤：

将相应醇或醇胺（5mmol）、2-氨基-喹啉酮（500mg,3.1mmol）、三苯基膦（1.65 g,6.3mmol）溶于新制的四氢呋喃溶液中（10ml），将体系降到0℃。偶氮二甲酸二异 丙酯（0.9ml,4.7mmol）在氩气保护下缓慢滴加到上述体系中。允许体系升至室温。 室温搅拌3天进行Mitsunobu反应，反应基本完全，停止反应后处理。经柱层析得到 相应产物，产率为61-73%。

4-甲氧基喹啉-2-氨：（白色固体，583mg，产率为67%），1H NMR(400MHz, DMSO)δ8.01(d,J=8.0Hz,1H),7.57(d,J=8.0Hz,1H),7.54(t,J=7.2Hz,1H),7.24(t, J=7.2Hz,1H),6.03(s,1H),4.79(s,br,2H),3.87(s,3H);13C NMR(100MHz,CDCl3) δ162.8,158.6,149.0,130.7,125.9,122.3,122.0,118.0,90.3,57.1;HRMS(ES)calculated  for C10H11N2O([M+H]+)m/z:175.08723,found175.08726.

4-乙氧基喹啉-2-氨：（白色固体，667mg，产率为71%），1H NMR(400MHz, DMSO)δ8.02(d,J=8.0Hz,1H),7.59(d,J=8.0Hz,1H),7.55(t,J=7.2Hz,1H),7.26(t, J=7.2Hz,1H),6.07(s,1H),4.76(s,br,2H),3.84(q,J=7.2Hz,2H),1.69(t,J=7.2Hz, 3H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ162.8,158.1,148.6,129.8,124.9,121.7,121.0,117.9, 89.9,58.0,15.8;HRMS(ES)calculated for C11H13N2O([M+H]+)m/z:189.10264, found189.10266.

4-丙氧基喹啉-2-氨：（白色固体，737mg，产率为73%），1H NMR(400MHz, DMSO)δ8.02(d,J=8.0Hz,1H),7.58(d,J=8.0Hz,1H),7.54(t,J=7.2Hz,1H),7.25(t, J=7.2Hz,1H),6.05(s,1H),4.81(s,br,2H),3.90(t,J=8.0Hz,2H),1.58-1.54(m,2H), 0.89(t,J=8.0Hz,3H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ162.7,158.4,148.9,130.2,125.5, 122.3,121.9,117.8,90.0,56.8,22.1,10.3;HRMS(ES)calculated for C12H15N2O([M+ H]+)m/z:203.11823,found203.11821.

4-丁氧基喹啉-2-氨：（白色固体，659mg，产率为61%），1H NMR(400MHz, DMSO)δ8.03(d,J=8.0Hz,1H),7.59(d,J=8.0Hz,1H),7.56(t,J=7.2Hz,1H),7.26(t, J=7.2Hz,1H),6.06(s,1H),4.77(s,br,2H),3.88(t,J=8.0Hz,2H),2.03-1.99(m,2H), 1.44-1.41(m,2H),0.72(t,J=8.0Hz,3H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ163.0,158.5, 148.7,130.5,125.8,122.2,122.3,117.9,91.3,58.1,26.1,15.6,9.9;HRMS(ES)calculated  for C13H17N2O([M+H]+)m/z:217.13409,found217.13406.

4-(2-N,N-二甲胺基-乙氧基)喹啉-2-氨:（白色固体，610mg，产率为66%），1H NMR (400MHz,DMSO)δ7.98(d,J=8.0Hz,1H),7.58(d,J=8.0Hz,1H),7.53(t,J=7.2Hz, 1H),7.21(t,J=7.2Hz,1H),6.02(s,1H),4.82(s,br,2H),4.19(t,J=5.6Hz,2H),2.87(t,J =5.6Hz,2H),2.38(s,6H);13C NMR(100MHz,DMSO)δ162.7,158.2,148.4,130.2, 125.5,122.0,121.9,117.8,90.0,67.0,57.9,46.2;HRMS(ES)calculated for C13H18N3O ([M+H]+)m/z:232.1450,found232.1461.

4-(3-N,N-二甲胺基-乙氧基)喹啉-2-氨:（白色固体，870mg，产率为71%），1H NMR (400MHz,DMSO)δ7.99(d,J=8.0Hz,1H),7.59(d,J=8.0Hz,1H),7.54(t,J=7.2Hz, 1H),7.22(t,J=7.2Hz,1H),6.03(s,1H),4.78(s,br,2H),4.21(t,J=6.8Hz,2H),2.93(t,J =6.8Hz,2H),2.40(s,6H),1.80-1.77(m,2H);13C NMR(100MHz,DMSO)δ162.9, 158.5,148.7,130.3,125.7,122.1,121.6,118.8,89.7,67.4,58.2,45.9,21.3;HRMS(ES) calculated for C14H20N3O([M+H]+)m/z:246.16062,found246.16058.

4-(2-Boc-乙氧基)喹啉-2-氨：（白色固体，939mg，产率为62%），1H NMR(400MHz, CDCl3)δH7.97(d,J=8.0Hz,1H),7.59(d,J=8.0Hz,1H),7.54(t,J=7.2Hz,1H),7.23 (t,J=7.2Hz,1H),6.02(s,1H),5.00(s,br,1H),4.69(s,br,2H),4.16(t,J=5.0Hz,2H), 3.67(m,2H),1.45(s,9H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ162.3,158.0,155.9,148.5, 130.3,125.7,122.0,121.6,117.5,90.1,79.8,67.5,39.8,28.4;HRMS(ES)calculated for  C16H22N3O3([M+H]+)m/z:304.1650,found304.1668.

4-(2-N,N-二乙胺基-乙氧基)喹啉-2-氨：（白色固体，829mg，产率为64%），1H  NMR(400MHz,DMSO)δ7.98(d,J=8.0HZ,1H),7.59(d,J=8.0Hz,1H),7.55(t,J= 7.2Hz,1H),7.22(t,J=7.2Hz,1H),6.04(s,1H),4.86(s,br,2H),4.24(t,J=6.8Hz,2H), 2.91(t,J=6.8Hz,2H),2.43(q,J=7.2Hz,4H),1.01(t,J=7.2Hz,6H);13C NMR(100 MHz,DMSO)δ163.0,158.6,148.8,130.4,125.7,122.4,122.2,117.9,90.4,66.8,58.2,46.4, 19.6;HRMS(ES)calculated for C15H22N3O([M+H]+)m/z:260.17628,found 260.17625.

4-(2-吡咯-乙氧基)-喹啉-2-氨：（白色固体，874mg，68%），1H NMR(400MHz, CD3OD)δH8.00(d,J=8.0Hz,1H),7.53(d,J=8.0Hz,1H),7.48(t,J=8.0Hz,1H), 7.20(t,J=8.0Hz,1H),6.28(s,1H),4.33(t,J=6.8Hz,2H),3.10(t,J=6.8Hz,2H), 2.81-2.73(m,4H),1.94-1.82(m,4H);13C NMR(100MHz,CD3OD)δC163.0,160.3, 148.0,130.2,124.1,121.9,121.6,110.8,90.4,67.6,54.8,54.6,23.3;HRMS(ES) calculated for C15H20N3O([M+H]+)m/z:258.1606,found258.1611.

实施例1

将式II所示化合物2,2'-联吡啶-6,6'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2- 三甲基-1-丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅 拌进行反应2小时后；

再加入三乙胺（250ul，1.8mmol）至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅拌进行 反应1小时后；

再将式III所示化合物4-甲氧基喹啉-2-氨（244mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液 （5ml）缓慢滴加到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去 溶剂，乙腈重结晶得到白色粉末（228mg，0.41mmol），产率59%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.13(s,br,2H),8.94(d,J=8.4Hz,2H),8.32(s,2H), 8.15(s,2H),7.95(s,4H),7.78(d,J=8.4Hz,2H),7.81(t,J=7.6Hz,2H),7.57(t,J=7.6 Hz,2H),4.38(s,6H);

13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.2,167.2,163.7,151.0,149.7,139.5,134.4,132.7, 127.6,125.8,123.5,121.3,118.8,113.9,98.4,58.3;

HRMS(ES)calculated for C32H25N6O4([M+H]+)m/z:557.13973,found 557.13970.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为甲氧基。

实施例2

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再加入有机碱三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴 温度下搅拌进行反应1小时后；

再将4-乙氧基喹啉-2-氨（263mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液（5ml）缓慢滴加 到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去溶剂，乙腈重结晶 得到白色粉末（253mg，0.43mmol），产率62%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,2H),8.86(d,J=8.4Hz,2H),8.33(s,2H), 8.19(s,2H),7.98(s,4H),7.82(d,J=8.4Hz,2H),7.79(t,J=7.6Hz,2H),7.58(t,J=7.6 Hz,2H),4.52(q,J=7.2Hz,4H),2.23(t,J=7.2Hz,6H);

13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.6,167.4,163.1,151.9,149.2,139.0,134.1,132.3, 127.2,125.4,123.1,121.34,118.2,113.3,98.7,67.3,29.3;

HRMS(ES)calculated for C34H29N6O4([M+H]+)m/z:585.22511,found 585.22509.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为乙氧基。

实施例3

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌进行反应1小时后；

再将4-丙氧基喹啉-2-氨（284mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液（5ml）缓慢滴加 到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去溶剂，乙腈重结晶 得到白色粉末（227mg，0.37mmol），产率53%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.01(s,br,2H),8.87(d,J=8.4Hz,2H),8.35(s,2H), 8.13(s,2H),7.92(s,4H),7.75(d,J=8.4Hz,2H),7.68(t,J=7.6Hz,2H),7.54(t,J=7.6 Hz,2H),4.56(t,J=7.2Hz,4H),2.26-2.21(m,4H),0.98(t,J=6.4Hz,6H);

13C NMR(100MHz,CDCl3)δ168.8,167.5,163.3,151.6,149.9,139.7,134.2,133.1, 128.0,126.0,123.9,121.7,119.2,114.1,98.8,67.7,33.2,19.5;

HRMS(ES)calculated for C36H33N6O4([M+H]+)m/z:613.25633,found 613.25634.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为丙氧基。

实施例4

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌进行反应1小时后；

再将4-丁氧基喹啉-2-氨（302mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液（5ml）缓慢滴加 到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去溶剂，乙腈重结晶 得到白色粉末（318mg，0.50mmol），产率71%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.04(s,br,2H),8.89(d,J=8.4Hz,2H),8.31(s,2H), 8.18(s,2H),7.98(s,4H),7.82(d,J=8.4Hz,2H),7.84(t,J=7.6Hz,2H),7.61(t,J=7.6 Hz,2H),4.56(t,J=6.0Hz,4H),2.36-2.33(m,4H),1.53-1.50(m,4H),0.84(t,J=6.4Hz, 6H);

13C NMR(100MHz,CDCl3)δ169.0,167.9,164.5,151.7,150.4,140.2,135.1,133.2, 128.3,126.4,124.2,122.0,119.5,114.6,99.1,68.0,36.4,21.3,13.6;

HRMS(ES)calculated for C38H37N6O4([M+H]+)m/z:641.28763,found 641.28766.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为丁氧基。

实施例5

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌进行反应1小时后；

再将4-(2-N,N-二甲胺基-乙氧基)喹啉-2-氨（323mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液 （5ml）缓慢滴加到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去 溶剂，乙腈重结晶得到白色粉末（277mg，0.41mmol），产率59%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.09(s,2H),8.91(d,J=8.4Hz,2H),8.35(s,2H),8.14 (s,2H),7.95(s,4H),7.80(d,J=8.4Hz,2H),7.81(t,J=7.6Hz,2H),7.62(t,J=7.6Hz,2H), 4.57(t,J=5.6Hz,4H),3.39(t,J=5.6Hz,4H),2.98(s,12H);

13C NMR(100MHz,CDCl3)δ169.7,168.7,165.2,152.5,150.5,141.1,135.9,134.5, 129.1,127.3,124.9,122.8,120.1,115.2,99.4,68.8,47.9,40.0;

HRMS(ES)calculated for C38H39N8O4([M+H]+)m/z:671.3094,found671.3103.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为-O(CH₂)₂N(CH₃)₂。

实施例6

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌进行反应1小时后；

再将4-(3-N,N-二甲胺基-乙氧基)喹啉-2-氨（343mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液 （5ml）缓慢滴加到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去 溶剂，乙腈重结晶得到白色粉末（313mg，0.45mmol），产率64%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.18(s,2H),8.90(d,J=8.4Hz,2H),8.29(s,2H),8.12 (s,2H),7.92(s,4H),7.81(d,J=8.4Hz,2H),7.83(t,J=7.6Hz,2H),7.59(t,J=7.6Hz,2H), 4.55(t,J=6.8Hz,4H),3.58(t,J=6.8Hz,4H),3.01(s,12H),2.01-1.99(m,4H);

13C NMR(100MHz,CDCl3)δ170.1,169.2,165.7,153.0,151.7,141.5,136.4,134.7, 129.6,126.8,124.5,122.3,119.8,114.9,99.4,69.7,59.1,44.4,19.3;

HRMS(ES)calculated for C40H43N8O4([M+H]+)m/z:699.34073,found 699.34081.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为-O(CH₂)₃N(CH₃)₂。

实施例7

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌进行反应1小时后；

再将4-(2-吡咯-乙氧基)喹啉-2-氨（360mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液（5ml） 缓慢滴加到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去溶剂，乙 腈重结晶得到白色粉末（334mg，0.46mmol），产率66%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.17(s,2H),8.93(d,J=8.4Hz,2H),8.41(s,2H),8.19 (s,2H),8.05(s,4H),7.88(d,J=8.4Hz,2H),7.91(t,J=7.6Hz,2H),7.67(t,J=7.6Hz,2H), 4.62(t,J=6.8Hz,4H),3.46(t,J=6.8Hz,4H),3.08-2.95(m,8H),1.99-1.96(m,8H);13C  NMR(100MHz,CDCl3)δ170.1,169.1,165.6,152.9,151.6,141.4,136.3,134.6,129.5, 127.7,125.4,123.2,120.7,115.8,100.0,69.1,58.4,57.9,21.8;HRMS(ES)calculated for  C42H43N8O4([M+H]+)m/z:723.34073,found723.34076.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为-O(CH₂)₂N(CH₂)₄。

实施例8

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌进行反应1小时后；

再将4-(2-N,N-二乙胺基-乙氧基)喹啉-2-氨（363mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液 （5ml）缓慢滴加到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去 溶剂，乙腈重结晶得到白色粉末（305mg，0.42mmol），产率60%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.17(s,2H),8.98(d,J=8.4Hz,2H),8.38(s,2H),8.21 (s,2H),8.03(s,4H),7.96(d,J=8.4Hz,2H),7.88(t,J=7.6Hz,2H),7.65(t,J=7.6Hz,2H), 4.56(t,J=7.2Hz,4H),3.22(t,J=7.2Hz,4H),2.58(q,J=7.6Hz,8H),1.12(t,J=7.6Hz, 12H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δ171.1,170.0,165.5,152.8,151.5,141.3,136.2,132.7, 134.5,129.3,127.6,125.3,123.1,120.6,113.9,100.2,69.1,61.4,47.9,20.1;HRMS(ES) calculated for C42H47N8O4([M+H]+)m/z:727.37203,found727.37201.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为 -O(CH₂)₂N(CH₂CH₃)₂。

实施例9

将化合物2,2'-联吡啶-3,3'-二甲酸（171mg，0.7mmol）与1-氯-N,N,2-三甲基-1- 丙烯胺（200ul，1.50mmol）溶于二氯甲烷中，将体系置于冰水浴温度，搅拌进行反 应2小时后；

再将三乙胺（250ul，1.8mmol）缓慢滴加至上述体系中，继续在冰水浴温度下搅 拌反应1小时后；

再将4-(2-Boc-乙氧基)喹啉-2-氨（424mg，1.4mmol）的二氯甲烷溶液（5ml）缓 慢滴加到体系中，反应体系室温搅拌反应过夜。反应完全后，停止。旋去溶剂，乙腈 重结晶得到白色粉末（359mg，0.44mmol），产率63%。

该产物的结构确认结果如下：

1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.16(s,2H),8.87(d,J=8.4Hz,2H),8.43(s,2H),8.22 (s,2H),8.05(s,4H),7.99(t,J=7.6Hz,2H),7.84(t,J=7.6Hz,2H),7.75(t,J=7.6Hz,2H), 5.13(s,br,2H),4.42(t,J=6.4Hz,4H),3.74-3.70(m,4H),1.56(s,18H);13C NMR(100 MHz,CDCl3)δ171.2,169.9,166.7,154.0,152.7,142.5,137.4,135.7,130.6,128.8,126.5, 124.3,121.8,116.9,101.4,68.7,47.2,43.4,19.3;HRMS(ES)calculated for C44H47N8O8 ([M+H]+)m/z:815.35169,found815.35168.

由上可知，该产物结构正确，为归属式I的目标化合物，其中，R为 -O(CH₂)₂NH[(COO(CH₃)₃)]。

实施例10

将实施例5得到的式I所示化合物（100mg，0.15mmol）溶于2ml二氯甲烷/1ml 三氟乙酸，室温搅拌1小时。停止反应，旋去溶剂，得到三氟乙酸的盐（135mg,0.15mmol, 100%）。

该产物的结构确认数据如下：

Anal.Calcd for C₄₂H₄₀F₆N₈O₈：C,56.12;H,4.49;N,12.47.Found:C,56.23;H.4.43; N,12.73.

由上可知，该产物结构正确。

2,2’-联吡啶-6,6’-二甲酰基--喹啉-2-胺衍生物的体外抗肿瘤药物筛选实验是以肿 瘤细胞为研究对象，通过MTT比色法检测样品体外抗肿瘤活性。MTT比色法能够检 测肿瘤细胞的存活和生长，其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性 MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan），并沉积于细胞中，而死细胞无 此功能。二甲基亚砜（DMSO）能够溶解细胞中的甲臜，以酶联免疫检测仪在570nm 波长处测定其吸光值，通过吸光值的变化反应肿瘤细胞的存活和生长状况。

具体实验步骤：

肿瘤细胞于37℃、5%CO₂及饱和湿度环境下培养于含10%胎牛血清1640培养 基中，细胞呈对数增长时进行传代，调整细胞浓度至1×104个/ml，接种200μl于96 孔培养板。待细胞贴壁生长24h，加入检测样品及阳性对照药5-Fu10μl，终浓度均为 5ug/ml，对照组同时加入等体积生理盐水，与细胞共同孵育72h。孵育结束后，小心 吸弃细胞上清，加入终浓度为0.5mg/ml MTT溶液，继续培养4h。吸弃上清，每孔加 入150μl DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，于酶标仪570nm处 测量吸光值。

选择初筛抑制率大于50%的化合物进行复筛，待筛化合物、阳性药与细胞共同孵 育的终浓度设定为25、5、1、0.2ug/ml，其他方法同上，测量吸光值后计算IC50。

计算方法：

样品抑制率＝[(对照-空白)-(样品-空白)]/(对照-空白)×100%

表1、实施例1的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 50.98 13.62 BEL-7402 60.42 14.20 A549 65.63 9.98 MCF-7 53.24 10.36 BGC-823 70.09 9.16 Hela 61.05 11.32 HL-60 58.07 16.51 HepG-2 60.72 8.65

注：a,阳性对照药物为5-氟尿嘧啶.

表2、实施例2的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 66.04 10.36 BEL-7402 54.02 11.69 A549 67.0 13.01 MCF-7 59.75 9.65 BGC-823 64.17 8.23

Hela 72.36 12.89 HL-60 60.43 13.11 HepG-2 52.05 14.42

注：a,阳性对照药物为5-氟尿嘧啶

表3、实施例3的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 60.19 14.16 BEL-7402 54.61 15.02 A549 19.52 --- MCF-7 62.58 11.27 BGC-823 67.82 13.24 Hela 71.54 14.03 HL-60 60.11 9.69 HepG-2 63.14 8.83

注：a,阳性对照药物为5-氟尿嘧啶.

表4、实施例4的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 32.01 --- BEL-7402 10.56 --- A549 68.51 10.17 MCF-7 53.26 9.78 BGC-823 29.86 --- Hela 76.32 8.59 HL-60 64.15 10.53 HepG-2 70.20 13.45

表5、实施例5的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 75.33 11.18 BEL-7402 18.63 --- A549 79.58 7.61 MCF-7 59.98 6.43 BGC-823 86.35 7.57 Hela 83.14 9.56 HL-60 91.23 6.52 HepG-2 85.66 9.82

表6、实施例6的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 41.02 --- BEL-7402 56.24 10.33

A549 90.02 6.54 MCF-7 70.16 5.46 BGC-823 30.83 --- Hela 88.59 8.65 HL-60 91.21 5.31 HepG-2 79.08 8.74

表7、实施例7的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 80.19 11.48 BEL-7402 14.61 --- A549 89.52 6.39 MCF-7 63.05 5.32 BGC-823 87.82 8.31 Hela 81.54 8.96 HL-60 90.11 6.46 HepG-2 83.14 10.12

注：a,阳性对照药物为5-氟尿嘧啶

表8、实施例8的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 93.26 10.43 BEL-7402 84.32 8.16 A549 90.56 4.64 MCF-7 92.85 5.69 BGC-823 91.95 7.15 Hela 77.26 6.19 HL-60 79.03 8.38 HepG-2 84.71 9.31

注：a,阳性对照药物为5-氟尿嘧啶

表9、实施例9的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 82.21 8.03 BEL-7402 77.26 7.69 A549 69.36 7.24 MCF-7 81.20 10.01 BGC-823 79.56 7.88 Hela 74.35 8.27 HL-60 78.61 9.16 HepG-2 68.49 9.87

表10、实施例10的药理实验结果：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50(ug/ml)^aHCT-8 96.26 6.32 BEL-7402 95.36 5.45 A549 96.61 5.59 MCF-7 92.81 6.16 BGC-823 94.54 7.11 Hela 95.23 5.75 HL-60 88.17 6.43 HepG-2 89.95 5.83

阳性对照药5-氟尿嘧啶：

细胞株 细胞抑制率（%） IC50（ug/ml） HCT-8 55.04 11.36 BEL-7402 69.67 10.84 A549 65.60 9.10 MCF-7 66.88 12.34 BGC-823 66.12 9.37 Hela 55.14 9.60 HL-60 81.63 11.51 HepG-2 55.31 10.48

药理实验结果总结：

以5-氟尿嘧啶为对照物，评价了实施例1-10的抗肿瘤活性。筛选了细胞株人乳腺 癌（MCF-7）、人胃癌（BGC-823）、人宫颈癌（Hela）、人白血病（HL-60）、人肝癌（HepG-2）、 人肺癌（A549）、人结肠癌（HCT-8）、人肝癌（BEL-7402），结果分别见表1—10。实 施例1-10均能表现好的抗肿瘤活性，且对多种细胞株有强的普适性。