纯天然生物制片透明剂及用该透明剂石蜡制片的方法

摘要

本发明提供一种纯天然生物制片透明剂，该透明剂以植物油为原料，所述植物油选自菜籽油、大豆油、花生油、橄榄油、茶树油、瓜子油、芝麻油中的至少一种，该透明剂未添加任何化学试剂，纯天然、安全、无毒；本发明还提供一种利用所述透明剂石蜡制片的方法，包括以下程序：梯度乙醇脱水→丙酮→植物油透明→浸蜡→石蜡包埋→切片，在制片过程中，植物油的组织穿透速度稍慢，透明时间更易把握，组织变脆、硬的几率更小，更易制作好的切片，且解决了二甲苯挥发性气体对工作环境的污染，解决了组织包埋及切片过程中大量残留二甲苯对工作人员的身体伤害。

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂，用于病理学界，具体涉及一种用于组织石蜡切片的纯天然生物制片透明剂以及利用所述透明剂石蜡制片的方法。

背景技术

生物制片，是指人体、动物或植物组织通过一系列的特殊处理切成薄片以利于显微镜下观察组织形态结构的一种方法。切片的方法有冰冻切片、石蜡切片、火棉胶切片等，石蜡切片以其更容易切出薄片而得到最广泛的应用。其主要的方法是将石蜡渗入到组织，对组织起到充分的支持作用，并使其硬度均匀，以及与包埋石蜡更好的密切结合，以保证完整的切片。

新鲜的生物组织内含大量的水分，石蜡不溶于水，无法渗入到组织内部；为达到浸入的目的，则需通过一系列媒介试剂的处理，其处理的基本步骤是：脱水→透明→浸蜡。脱水主要用不同浓度的乙醇对组织进行浸泡处理；透明则是用透明剂置换出组织内的乙醇；浸蜡则是用石蜡置换出组织内的透明剂。

透明剂在乙醇与石蜡之间起到了很好的桥梁作用，可见其需具备与乙醇和石蜡互溶的物理特性，通过其浸透的组织通透透明，故称为透明剂。二甲苯是被广泛运用的透明剂，它以价格相对低廉、穿透力强、透明迅速而长期在病理制片中得到运用。但经二甲苯处理的组织收缩厉害，在一定程度上破坏了组织原有的结构；且其透明迅速而造成不易把握最佳透明时间，透明时间稍微过长，组织则变硬变碎而致不易完整切片；此外，二甲苯是有毒溶剂，挥发性强，极易被制片人员通过呼吸道吸入体内，对人的造血系统，神经系统和呼吸系统具有强烈的毒害作用，是致癌物质之一。使用二甲苯作为透明剂需要通过投入大量的劳动保护装置来避免二甲苯对劳动者的伤害，即使这样，也难以避免在组织包埋及切片过程中含二甲苯组织及石蜡对工作人员造成的伤害。

为解决二甲苯的污染问题，相关的人员做了大量的工作。根据文献及专业书籍的记载，氯仿、苯胺、香柏油、松节油等可作为透明剂使用，但这些透明剂一部分自身具有毒性（如松节油的神经系统及肾毒性、氯仿与日光、空气接触分解为剧毒光气），一部分仍然需要配合二甲苯才能使用（如香柏油、苯胺）。此外，虽然香柏油和松节油为植物油，但其不能单独使用，需要添加其它化学试剂，如表面活性剂、吸水剂、抗氧化剂等，所以没有从根本上解决透明剂的环保问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的问题，提供一种生物制片透明剂，该生物制片透明剂以植物油为原料，所述植物油选自菜籽油、大豆油、花生油、橄榄油、茶树油、瓜子油、芝麻油中的至少一种。

与现有技术相比，本发明的生物制片透明剂为纯天然植物油透明剂，所述植物油来源于可食用的菜籽、大豆、花生、橄榄、茶树子、瓜子、芝麻等纯天然植物，可为一种单独使用，也可两种或两种以上复配使用，所述透明剂中未添加任何化学试剂，环保、安全，且用本发明的透明剂处理的组织收缩程度较小，在一定程度上保护了组织原有的结构，透明时间易控制，组织不易变硬变碎，更易实现完整切片。

 

优选地，所述植物油的含水量不超过0.05%。

优选地，所述植物油通过浸出方式获取。

植物油种类繁多，用作透明剂的植物油应具备清澈透明、无异味、经0℃冷藏仍清澈透明，能被丙酮、石油醚溶解，溶解后杂质极少，含水量不超过0.05%的基本条件。植物油根据获取的方式有压榨及浸出两种，压榨方式获取的植物油色泽偏深、杂质相对较多；浸出方式获取的植物油色泽浅淡，杂质偏少，更加通透透明，为透明剂优选。

本发明的另一个目的是提供利用所述透明剂石蜡制片的方法，包括将组织浸入梯度乙醇中脱水，然后将浸满乙醇的组织浸入到丙酮中置换出乙醇，将浸满丙酮的组织侵入到透明剂中透明，将浸满透明剂的组织浸入到液体石蜡中浸蜡，然后将浸满蜡的组织包埋在石蜡内，切片。

优选地，使用透明剂进行透明的时间为2.5-4小时。

生物石蜡切片的基本过程为：将组织浸入梯度乙醇中脱掉组织内水分，然后将浸满乙醇的组织浸入到透明剂中透明，将浸满透明剂的组织浸入到液体石蜡中浸蜡，将浸满蜡的组织包埋在石蜡内，切片。在脱水、透明、浸蜡的过程中，各个试剂间的置换都需要有互溶的物理特性才能达到互相渗透的目的。溶解的一般规律为相似者相溶，植物油与液态石蜡均为非极性溶剂，在范德华力的作用下两者能很好的互溶；乙醇为半极性溶剂，未能与植物油混溶，但半极性的丙酮却能很好的与植物油混溶；丙酮在乙醇与植物油之间起到了很好的桥梁作用，让植物油顺利的浸入组织成为了可能。

本发明与现有技术相比较，具有如下显著优点：

1、本发明的透明剂为纯天然植物油，未添加任何化学试剂，安全无毒。

2、二甲苯作为透明剂用于切片，其组织穿透能力强，透明时间不好把握，极易致组织脆、硬，制做好的切片技术难度大；植物油的组织穿透速度稍慢，透明时间更易把握，组织变脆、硬的几率更小，更易制作好的切片。

     3、从整个生物制片过程来看，植物油用于制作切片透明时间比二甲苯稍长，但目前全自动脱水机的广泛使用使脱水透明浸蜡工作基本都在夜间自动完成，稍长的透明时间并不会给工作效率带来影响；植物油与二甲苯一样均能制作出优良的生物切片，植物油安全无毒的优势得到了最明显的体现，用其制作切片，解决了二甲苯挥发性气体对工作环境的污染，解决了组织包埋及切片过程中大量残留二甲苯对工作人员的身体伤害。

附图说明

图1为实施例1所制作的大鼠食道组织切片的显微镜照片；

图2为对比实施例1所制作的大鼠食道组织切片的显微镜照片；

图3为实施例2所制作的大鼠结肠组织切片的显微镜照片；

图4为对比实施例2所制作的大鼠结肠组织切片的显微镜照片；

图5为实施例3所制作的大鼠肾脏织切片的显微镜照片；

图6为对比实施例3所制作的大鼠肾脏织切片的显微镜照片；

图7为实施例4所制作的大鼠膀胱组织切片的显微镜照片；

图8为对比实施例4所制作的大鼠膀胱组织切片的显微镜照片。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

将大鼠食道组织分别用50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和95%乙醇脱水1小时，然后用无水乙醇脱水3.5小时，将浸满无水乙醇的组织浸入到丙酮中0.5小时，将浸满丙酮的组织侵入到菜籽油中透明2.5小时，将浸满菜籽油的组织浸入到液体石蜡中浸蜡1.5小时，然后将浸满蜡的组织包埋在石蜡内，切片。

实施例2

操作与实施例1相同，区别仅在于使用的是大鼠结肠组织，透明剂为瓜子油，透明时间为3小时。

实施例3

操作与实施例1相同，区别仅在于使用的是大鼠肾脏组织，透明剂为大豆油，透明时间为3.5小时。

实施例4

操作与实施例1相同，区别仅在于使用的是大鼠膀胱组织，透明剂为大豆油与菜籽油按质量比为1:1的比例复配而成，透明时间为4小时。

对比实施例1

将大鼠食道组织分别用50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇和95%乙醇脱水1小时，然后用无水乙醇脱水4小时，将浸满无水乙醇的组织浸入到二甲苯中透明40分钟，将浸满二甲苯的组织浸入到液体石蜡中浸蜡1.5小时，然后将浸满蜡的组织包埋在石蜡内，切片。

对比实施例2

操作与对比实施例1相同，区别仅在于使用的是大鼠结肠组织。

对比实施例3

操作与对比实施例1相同，区别仅在于使用的是大鼠肾脏组织。

对比实施例4

操作与对比实施例1相同，区别仅在于使用的是大鼠膀胱组织。

从实施例和对比实施例的制片结果（见附图1-8）可以看出，使用本发明植物油作为石蜡制片透明剂与目前广泛使用的二甲苯透明剂同样能制作出优良切片；但本发明的植物油较二甲苯透明速度更慢，透明时间更易控制，对生物组织造成的脆、硬、收缩等几率更小，较二甲苯更易制作出优良的切片。