八角茴香油-β-环糊精包合物及其制备方法、药物组合物

摘要

本发明提供一种八角茴香油-β-环糊精包合物，该包合物中β-环糊精与八角茴香油的比例为11:1g/ml，所述八角茴香油包含在所述β-环糊精的空腔内。本发明的八角茴香油-β-环糊精包合物能够增强八角茴香油在药物中的稳定性，减少八角茴香油在药物生产与储存过程中的挥发，从而提高了药物的稳定性。

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，涉及挥发油包合技术，具体涉及一种八角茴香 油-β-环糊精（八角茴香油-β-CD）包合物及其制备方法，以及包含该包合 物的药物组合物。

背景技术

复方甘草浙贝氯化铵片已被广泛使用多年，主要用于治疗急、慢性支 气管炎引起的咳嗽、咳痰等，自上市至今未见不良反应的报道。目前，市 场上的复方甘草浙贝氯化铵片主要采用传统的片剂生产工艺制成，在该工 艺中，将处方中的有效成分（八角茴香油）采用乙醇溶解喷入颗粒的方法 加入，由于八角茴香油具有强烈的挥发性，导致采用该工艺生产的复方甘 草浙贝氯化铵片的稳定性较差，尤其在生产与储存过程中，受物理因素的 影响而无法保证八角茴香油的长期稳定存在，在药品到达患者手中时，起 解表作用的八角茴香油几乎丧失贻尽。

因此，如何开发一种新的处理八角茴香油的工艺，使八角茴香油在药 物中保持稳定，减少八角茴香油在药物生产与储存过程中的挥发，提高药 物的稳定性，成为本领域亟待解决的课题。

发明内容

针对上述问题，本发明的一个目的在于提供一种八角茴香油-β-环糊精包 合物，增强八角茴香油在药物中的稳定性，减少八角茴香油在药物生产与 储存过程中的挥发，从而提高药物的稳定性。

本发明的另一目的在于提供上述八角茴香油-β-环糊精包合物的制备方 法。

本发明的再一目的在于提供一种包含上述八角茴香油-β-环糊精包合物 的药物组合物。

为达到上述目的，本发明提供一种八角茴香油-β-环糊精包合物，该包合 物中β-环糊精与八角茴香油的比例为11:1g/ml，所述八角茴香油包含在所述 β-环糊精的空腔内。

进一步地，所述八角茴香油-β-环糊精包合物采用β-环糊精饱和水溶液 制备，优选采用八角茴香油-乙醇溶液与β-环糊精饱和水溶液制备。

进一步地，所述八角茴香油-β-环糊精包合物采用40-55℃的β-环糊精饱 和水溶液制备，优选采用65%（体积比）的八角茴香油-乙醇溶液与40-55℃ 优选45℃的β-环糊精饱和水溶液制备。

本发明进一步提供上述八角茴香油-β-环糊精包合物的制备方法，包括以 下步骤：

步骤a：量取一定量的八角茴香油置于容量瓶中，加无水乙醇定容，配 制成八角茴香油-乙醇溶液；

步骤b：称取一定量的β-环糊精于适量水中，制备β-环糊精饱和水溶液；

步骤c：在一定的转速下向β-环糊精饱和水溶液中加入八角茴香油-乙醇 溶液，冷却，静置，抽滤后得到八角茴香油-β-环糊精包合物。

进一步地，其特征在于，所述步骤a中，配制成65%（体积比）的八角 茴香油-乙醇溶液。

进一步地，所述步骤b中，在40-55℃优选45℃制备β-环糊精饱和水溶 液。

进一步地，所述步骤c中，在850转/分的转速下向β-环糊精饱和水溶 液中加入八角茴香油-乙醇溶液，在40-55℃包合1小时，静置，优选4℃静 置24小时，抽滤，干燥，优选将滤渣在45℃烘箱中放置4h，得到所述八角 茴香油-β-环糊精包合物。

本发明进一步提供一种药物组合物，该药物组合物包含上述八角茴香油 -β-环糊精包合物。

进一步地，所述药物组合物用于治疗急、慢性支气管炎引起的咳嗽、咳 痰。

进一步地，所述药物组合物为片剂、胶囊剂或颗粒剂；优选地，所述药 物组合物还包含药学上可接受的辅料。

与现有技术相比，本发明提供的八角茴香油-β-环糊精包合物及其制备 方法具有以下优点：

一、本发明采用饱和溶液法并通过控制包合工艺中的各工艺参数（如 八角茴香油与β-环糊精的比例、八角茴香油-乙醇溶液浓度、包合温度、包 合时间等）制备八角茴香油-β-环糊精包合物，从而进一步制备包含八角茴 香油的药物组合物，有效地减少了八角茴香油在药物中的挥发，显著地改 善了包含八角茴香油的药物的理化性质，提高了八角茴香油的稳定性，从 而提高了包含八角茴香油的药物的安全有效性及稳定性；

二、本发明在特定的包合工艺条件下采用β-环糊精制备八角茴香油- β-环糊精包合物，包合条件温和、工艺简单、易于控制、包合产率高、产 品质量稳定，且有利于实现工业化。

附图说明

图1为不同状态挥发油的TLC图；

图2为不同状态挥发油的UV图。

附图标记说明

1混合油

2物理混合物

3八角茴香油-β-环糊精包合物

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些 实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施 例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。

仪器：

电子天平（BS110S，北京赛多利斯天平有限公司）；

恒温水浴锅（DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司）；

数显恒速搅拌器（S312-60型，上海梅颖浦仪器仪表制造有限公司）；

循环水式多用真空泵（SHB-Ⅲ型，郑州长城科工贸有限公司）；

真空干燥箱（DZF-6090，上海一恒科技有限公司）；

UV-2550PC紫外-可见分光光度计（日本岛津）。

试剂：

八角茴香油（宝鸡鑫森制品有限公司，批号080520）；

β-CD（陕西奥克化工有限公司，批号100601）；

无水乙醇（天津市富宇精细化工有限公司）；

石油醚（天津市致远化学试剂有限公司）；

乙酸乙酯（天津市化学试剂三厂）；

薄层层析硅胶（青岛海洋化工有限公司），

以上试剂均为分析纯。

实施例1：八角茴香油的提取

参照《中国药典》2010版一部附录XD挥发油测定法甲法（附录63页） 提取八角茴香油，具体如下：

按处方比例称取药材，置于烧瓶中，加水至规定量，连接挥发油测定器 与回流冷凝管，自回流冷凝管上端加水以充满挥发油测定器的刻度部分，并 溢流入烧瓶时为止。将烧瓶置于电热套中缓缓加热至沸，在4小时内保持微 沸。停止加热，放置片刻，开启挥发油测定器下端的活塞，将水缓缓放出， 直至油层上端到达0刻度线上方5mm处为止。放置1小时以上，再开启活 塞使油层下降至上端恰与0刻度线齐平，读取挥发油量。采用饱和氯化钠溶 液分离挥发油后，密封保存。

1、八角茴香油的密度测定

精密量取八角茴香油10ml各3份，采用电子天平精密测定其重量，并 按下式（1）计算在室温下八角茴香油的密度，测定结果如表1所示。

表1八角茴香油密度测定结果

N₀1 2 3 平均值 RSD（％） 密度（g/ml） 0.9998 0.9989 0.9997 0.9994 0.0004

2、回收率测定

精密吸取5ml八角茴香油于烧瓶中，加200ml蒸馏水，连接挥发油提取 器，按《中国药典》2010版一部附录XD挥发油测定法甲法（附录63页） 提取八角茴香油4h，至油量不再增加时停止加热，放置1h后读取挥发油量， 按下式（2）计算回收率，得到回收挥发油量的平均值为4.83ml，空白回收 率为96.67%，相对标准偏差RSD为1.19%，如表2所示。

表2八角茴香油回收率测定结果

N₀1 2 3 平均值 RSD（％） 回收率（%） 96.6 96.7 96.5 96.6 1.19

实施例2八角茴香油与β-环糊精的包合

1、八角茴香油-β-环糊精包合物的制备

步骤a：精密量取一定量实施例1中制备的八角茴香油置于容量瓶中， 加无水乙醇定容，配制成50%（体积比）的八角茴香油-乙醇溶液，摇匀， 密封，待用；

步骤b：称取β-环糊精于适量水中，加热溶解，在恒温水浴锅中冷却到 相应的温度，制成β-环糊精饱和水溶液，待用；

步骤c：采用数显恒速搅拌器在一定的搅拌速度下向β-环糊精饱和水溶 液中加入一定量的八角茴香油-乙醇溶液，在一定温度下包合一定时间，4℃ 放置24小时，采用循环水式多用真空泵抽滤，滤渣用约20ml石油醚 （30-60℃）洗涤数次，然后将滤渣在45℃真空干燥箱中放置4h，即得八角 茴香油-β-环糊精包合物。

2、包合物油利用测定

采用电子天平精密称取上述干燥包合物，并置于放有沸石的烧瓶中，加 200ml蒸馏水，连接挥发油提取器，按《中国药典》2005版一部附录XD挥 发油测定法甲法（附录57页）提取挥发油4h，至油量不再增加时停止加热， 放置1h后读取挥发油量。

以包封率、包合物收率为指标结合综合评分法对包合物进行评价，其中 各指标的计算方法如下：

综合评分=包封率×80%+包合物收率×20%    （5）

3、正交试验

经研究，确定β-环糊精：挥发油量（g/ml）、包合温度（℃）、搅拌速度 （r/min）是影响包合物制备的主要因素，因此确定采用以下因素及水平（如 表3所示）进行正交试验。根据因素水平表选用L9（3⁴）制定试验方案（如 表4所示）。根据正交试验设计，重复试验3次，实验结果如表4所示。表5 至表7分别列出了包封率、包合物收率及综合评分的方差分析结果。

表3L₉（3⁴）因素水平表

表4L₉（3⁴）实验安排及结果

表5包封率方差分析表

变异来源 SS V MS F P 总变异 5173.8724 26       A 2355.9922 2 1177.9961 20.1544 0.0000 B 114.9075 2 57.4538 0.9830 0.3916 C 1534.0019 2 767.0010 13.1227 0.0002 误差小计 1168.9707 20 58.4485    

表6包合物收率方差分析表

表7综合评分方差分析表

在表5至表7中，A代表β-环糊精：挥发油量（g/ml），B代表包合温 度（℃），C代表搅拌速度（r/min）。从表5至表7看出，B因素对综合评分 无明显差异，但对包封率有影响，故认为八角茴香油与β-环糊精包合的最佳 工艺为A₃B₁C₃影响因素为A>C>B，其中A、C因素对包合有较大的影响。 根据直观分析和方差分析可以确定优选工艺为：β-环糊精与挥发油的比例为 11：1，包合温度为40℃，搅拌速度为850r/min。

4、验证试验

按上述优化工艺条件制备包合物3份，测定各指标并进行评价，结果如 表8所示。

表8验证试验综合评分

根据表8得到，三份挥发油包合物的综合评分的平均值为：87.12，相对 标准偏差RSD为1.15%。

5、单因素试验优选最佳八角茴香油-乙醇溶液浓度

分别配制八角茴香油浓度分别为80%、65%、50%、35%、20%的乙醇 溶液，按照上述得到的最佳包合工艺进行试验，以包封率和包合物收率为指 标，确定最佳浓度。对试验结果进行分析得到（参见表9），不同浓度的八角 茴香油-乙醇溶液对包封率和包合物收率无显著性影响，直观分析得到65% 的八角茴香油-乙醇溶液综合评分较高，因此确定最佳的八角茴香油-乙醇溶 液浓度为65%。

表9：单因素试验中不同八角茴香油-乙醇溶液浓度下的综合评分

6、单因素试验优选最佳包合时间

按照上述得到的最佳包合工艺条件（即β-环糊精：挥发油量为 11:1(g/ml)、搅拌速度850（r/min）及八角茴香油-乙醇溶液浓度为65%）进 行试验，在其它包合条件相同的情况下，分别考察包合时间为0.5h、1h、1.5h、 2h对包封率和包合物收率的影响，确定最佳包合时间。参见表10，经试验， 1h为最佳包合时间。

表10：单因素试验中不同包合时间下的综合评分

7、单因素试验优选最佳包合温度

按照上述得到的最佳包合工艺条件（β-环糊精：挥发油量为11:1(g/ml)、 搅拌速度850（r/min）、八角茴香油-乙醇溶液浓度为65%及包和时间为1h）， 考察不同温度对八角茴香油与β-环糊精包合效果的影响，结果如表11所示。

表11单因素试验中不同温度下的综合评分

上述结果表明，当包合温度大于55℃时，包封率及综合评分显著下降， 因此优选包合温度为40-55℃，更优选45℃。

对比例1八角茴香油与羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）的包合

1、八角茴香油-羟丙基-β-环糊精包合物的制备

由于羟丙基-β-环糊精水溶性较高（室温下100ml水中可以溶解约70g 羟丙基-β-环糊精），室温下其溶解度约为β-环糊精的35倍左右，即使高温下 很高浓度的羟丙基-β-环糊精水溶液，也不会随着温度的降低而析出固体，因 此不能用饱和水溶液法制备羟丙基-β-环糊精包合物。本发明采用水溶液法制 备包合物，具体如下：

步骤a：精密量取一定量实施例1中制备的八角茴香油置于容量瓶中， 加无水乙醇定容，配制成50%的八角茴香油-乙醇溶液，摇匀，密封，待用；

步骤b：称取一定量的羟丙基-β-环糊精于适量水中，加热溶解，制成羟 丙基-β-环糊精水溶液，待用；

步骤c：采用数显恒速搅拌器在一定的搅拌速度下加入一定量的八角茴 香油-乙醇溶液，在一定温度下包合一定时间，减压蒸发，至45℃真空干燥 箱中放置4h，即得到固体包合物。

2、八角茴香油-羟丙基-β-环糊精包合物油利用测定

采用与实施例2中八角茴香油-β-环糊精包合物油利用测定方法相同的 方法测定八角茴香油-羟丙基-β-环糊精包合物油利用。

3、均匀试验

根据现有的文献可知，羟丙基-β-环糊精：挥发油量（g/ml）是影响包合 物制备的主要因素，包合温度（℃）及搅拌速度（r/min）是影响包合物制备 的次要因素，确定采用以下因素及水平（如表12所示）进行均匀试验。

表12均匀试验因素水平表

注：X₁为羟丙基-β-环糊精：挥发油量(g/ml)，X₂为包合温度（℃），X₃为搅拌速度（r/min）。

根据表12中的因素水平表选用U6（6³）进行试验（如表13所示）。

表13U₆（6³）均匀试验设计（n=6）

4、数据处理

采用沈阳药科大学均匀设计程序对上述试验结果进行逐步回归，得到如 下方程：

Y（综合评分）＝0.5138+2.2517X₂–0.0268X₂²+0.000006X₃²+0.00235X₁X₃

复相关系数R²=0.8993，S=0.8087，F=161.72，方程显著（P<0.1）。

经程序分析拟合得到优化条件为：X₁（比例）=24.8（g/ml）；X₂（温度） =47.6（℃）；X₃（搅拌速度）=958.6（r/min）；综合评分的理论预测区间为 95.8-102.4。

确定优选工艺为：羟丙基-β-环糊精加入量是挥发油量的25倍，包合温 度为50℃，搅拌速度为1000r/min，搅拌时间为1h。

5、验证试验

取三份实施例1中得到的八角茴香油各1ml，按上述优化制备工艺条件 （羟丙基-β-环糊精：挥发油=25：1，包合温度为50℃，搅拌速度为1000r/min） 制备包合物，测定各指标并进行评价，结果如表14所示。

表14包合物验证试验结果

表14中，三份八角茴香油包合物的综合评分的平均值为95.9±1.52，相 对标准偏差RSD为1.59%。

β-环糊精与羟丙基-β-环糊精包合物比较

（1）两种材料均可用于包合八角茴香油，根据上述实验，β-环糊精的 最佳用量为八角茴香油的11倍，羟丙基-β-环糊精的最佳用量为八角茴香油 的25倍，二者相差2.27倍，因此与β-环糊精相比，羟丙基-β-环糊精的用量 较大。

（2）采用β-环糊精进行包合时，可用饱和水溶液法，根据温度的变化 经冷藏析出、抽滤、干燥得到包合物，工艺和仪器设备较为简单；而采用羟 丙基-β-环糊精进行包合时，由于羟丙基-β-环糊精水溶性高，不会随着温度 的降低而析出固体，不能用饱和水溶液法制备HP-β-CD包合物，需要采用 冷冻干燥、减压蒸发或喷雾干燥等方法除去溶剂，才能得到固体包合物，工 艺和仪器设备较为复杂。

（3）从经济角度看，羟丙基-β-环糊精比β-环糊精的价格高出很多（β- 环糊精的价格是25元/kg，而羟丙基-β-环糊精的价格是6000元/kg），因此， 采用β-环糊精制备包合物更有利于节约生产成本。

综上所述，与羟丙基-β-环糊精包合物相比，采用β-环糊精包合八角茴香 油制备包合物具有用量少、价格低廉、工艺简单的优点，更有利于工业生产。

测试例八角茴香油-β-环糊精包合物质量验证

1、薄层层析法（TLC）

分别取八角茴香油0.1ml、包含八角茴香油的物理混合物（由八角茴香 油、远志流浸膏、浙贝母流浸膏、桔梗流浸膏、甘草流浸膏、甘草浸膏粉末、 氯化铵、碳酸钙、淀粉及糊精制成的片剂）0.83g以及采用上述优化工艺条 件制备得到的八角茴香油-β-环糊精包合物0.8g，各加100ml石油醚，密塞， 振摇数分钟，放置30分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。按照薄层色谱法 （《中国药典》2010版一部附录ⅥB）进行试验，吸取上述供试品溶液10μl， 分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-乙酸乙酯（99:1）混合液为展开 剂展开，取出，晾干，用5%香草醛硫酸-乙醇（1:4）混合液喷雾显色，在 100℃加热至斑点显色清晰，如图1所示。

从图1看出，物理混合物中八角茴香油与纯八角茴香油的相应位置上显 示相同颜色的斑点，而包合物样品则无该颜色斑点，说明八角茴香油-β-环糊 精包合物包合成功。

2、紫外色谱法（UV）

分别取适量八角茴香油、包含挥发油的物理混合物（由八角茴香油、远 志流浸膏、浙贝母流浸膏、桔梗流浸膏、甘草流浸膏、甘草浸膏粉末、氯化 铵、碳酸钙、淀粉及糊精制成的片剂），及采用上述优化工艺条件制备的八 角茴香油-β-环糊精包合物，加石油醚适量，密塞，振摇数分钟，放置30分 钟，滤过，滤液作为供试品溶液（八角茴香油浓度均为0.004μl/ml）。将供试 品溶液在波长为200-400nm处进行紫外吸收扫描。结果如图2所示。

从图2看出，物理混合物中挥发油与纯八角茴香油的紫外吸收特征一致， 而包合物样品则无挥发油紫外吸收特征，说明八角茴香油-β-环糊精包合物包 合成功。

3、八角茴香油-β-环糊精包合物稳定性测试

将根据上述优化工艺条件制备的八角茴香油包合物在38-42℃、相对湿 度为70-80%的条件下进行含油量检测（《中国药典》2010年版挥发油测定 法），分别测试八角茴香油包合物在1、2、3和6月后的含油量，测试结 果如表15所示。从表15看出，八角茴香油包合物在1、2、3和6月后含 油量几乎不变，性质较稳定。

表15包合物稳定性检测结果

4、药剂中挥发油稳定性测试

分别在高温及室温下，考察采用本发明中β-环糊精包合八角茴香油的方 法制备的复方甘草浙贝氯化铵片剂及采用传统方法制备的含八角茴香油的 复方甘草浙贝氯化铵片剂的稳定性。高温测试条件如下：在相对湿度为60 ±10%的条件下，将上述复方甘草浙贝氯化铵片剂于40℃及60℃恒温箱放 置10天，间隔不同时间取样，按《中国药典》2005版一部附录XD挥发油 测定法甲法（附录57页）测定挥发油含量（以ml/100g样品为单位），测定 结果如表16及表17所示。室温测试条件如下：在相对湿度为60±10%的条 件下，将上述复方甘草浙贝氯化铵片剂于25±2℃下放置3个月，间隔不同 时间取样，按《中国药典》2005版一部附录XD挥发油测定法甲法（附录 57页）测定挥发油含量（以ml/100g样品为单位），测定结果如表18所示。

其中传统的复方甘草浙贝氯化铵片剂的制备方法如下：

步骤a：称取0.96L远志流浸膏、0.64L浙贝母流浸膏、0.96L桔梗流浸 膏、1.6L甘草流浸膏、0.64kg甘草浸膏细粉、0.8kg氯化铵、0.96kg碳酸钙、 7.9kg淀粉及0.83kg糊精，并将其混合，拌匀、干燥后制成颗粒；

步骤b：将0.07L八角茴香油与步骤a制备的颗粒混匀，经制软材、制 粒后得到湿颗粒，在60℃下干燥所述湿颗粒，过筛整粒后得到干颗粒，将所 述干颗粒与0.38kg薄膜包衣粉混合，采用旋转式压片机对所述干颗粒进行压 片，并采用高效包衣机对所述颗粒进行包衣，得到复方甘草浙贝氯化铵片剂。

采用本发明中β-环糊精包合八角茴香油的方法制备的复方甘草浙贝氯 化铵片剂的具体制备方法如下：

步骤a：称取0.96L远志流浸膏、0.64L浙贝母流浸膏、0.96L桔梗流浸 膏、1.6L甘草流浸膏、0.64kg甘草浸膏细粉、0.8kg氯化铵、0.96kg碳酸钙、 7.9kg淀粉及0.83kg糊精，并将其混合，拌匀、干燥后制成颗粒；

步骤b：将0.07L八角茴香油溶于乙醇中，制备65%（体积比）的八角 茴香油乙醇溶液，并在60℃下将0.42kgβ-CD溶于水制备β-CD饱和溶液， 然后在40℃下，将制备的八角茴香油乙醇溶液与β-CD饱和溶液混合，在 850r/min下搅拌1小时得到乳白色混悬液，将所述乳白色混悬液在4℃静置 24小时，过滤后得到白色沉淀，干燥后，得到八角茴香油包合物；

步骤c：将步骤b中得到的八角茴香油包合物与步骤a中得到的颗粒混 合，经制软材、制粒后得到湿颗粒，在60℃下干燥所述湿颗粒，过筛整粒后 得到干颗粒，将所述干颗粒与0.38kg薄膜包衣粉混合，采用旋转式压片机对 所述干颗粒进行压片，并采用高效包衣机对所述颗粒进行包衣，得到复方甘 草浙贝氯化铵片剂。

表1640℃下药剂中挥发油稳定性测试

表1760℃下药剂中挥发油稳定性测试

表18室温下药剂中挥发油稳定性测试

从表16至表18看出，采用本发明的β-环糊精包合八角茴香油的工艺制 备的复方甘草浙贝氯化铵片剂在高温（40℃、60℃）及室温下放置时，片 剂中八角茴香油含量均无变化，而采用传统方法制备的复方甘草浙贝氯化 铵片剂在高温（40℃、60℃）及室温下放置时，片剂中八角茴香油含量逐 渐减少。由此说明，相对于现有技术，采用本发明的包合工艺制备含八角 茴香油的药剂，有利于提高八角茴香油的稳定性，从而提高了药物的稳定 性。

以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明，本领域技术人员可 以根据本发明作出各种改变或变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本 发明所附权利要求的范围。