金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明涉及一种金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法，该方法通过外植体选择与清洗、外植体消毒、初代培养、继代培养和生根培养，得到金吉丽海棠。采用本发明的组织培养方法得到的金吉丽海棠组培苗生根率高、成活率高，繁殖速度快，繁殖系数达到5.3以上，生根率达到90%以上，得到的金吉丽海棠生长健壮，具有广阔的市场前景。

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体地指一种金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法。 

背景技术

金吉丽海棠，系北美引进的蔷薇科苹果属小苹果，母父本不详。落叶小乔木，叶色有光泽，春季幼叶呈紫红色，后转为绿色，花色红艳，花量大，成串而生。武汉地区3月下至4月初开花，花期长达两周，幼果为深红色，后期转为鲜红色，结果量大，在枝上依次排布，连年结果能力强，挂果期长，经过处理可以挂到第二年一月份；可做行道树，也是观果盆景中的精品树种之一，是观花、观叶、观果的优良树种。 

金吉丽海棠种子繁殖周期长、抗性差，现在多采用嫁接繁殖，但由于受到接穗数量的限制，不能进行大规模繁殖，从而限制了该品种的推广应用。采取组织培养法进行金吉丽海棠的快速繁殖，建立腋芽组织培养快繁体系，有利于快速提供大量种苗且不受季节限制，对金吉丽走向园林应用具有较强的生产应用价值。 

发明内容

本发明的目的是针对现有繁殖技术存在的缺陷，提供一种金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法。 

为解决上述技术问题，本发明提供的一种金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 

1）外植体选择与清洗：4～5月间从金吉丽海棠的母株的健壮枝条上采集含有腋芽的当年生枝条，用肥皂水浸泡5～15min，流水冲洗30～90min后备用； 

2）外植体消毒：在超净工作台上先用体积分数为65～75%的酒精将清洗干净的外植体消毒30～60s，无菌水冲洗3～5次，每次2～4min；再用0.2～0.3%升汞消毒5～10min，无菌水冲洗3～5次，每次2～4min； 

3）初代培养：在超净工作台上将消毒处理好的外植体切成含有腋芽且长度为2～4cm的茎段，并将茎段接入芽诱导培养基中，培养温度为25±1，℃光照时间为10～20h，光强1800～2200Lx；其中，所述的芽诱导培养基的配方为：MS培养基中+0.5～1.2mg·L^-16-BA+0.05～0.3mg·L^-1NAA+1～5%蔗糖+0.2～1.0%琼脂，pH5.2～5.5。 

4）继代培养：在初代培养基中培养20～25d，腋芽萌发生长出丛生芽，并进一步生长成幼嫩植株的上半部分，将1.0～3.0cm左右的丛芽采取芽间分离的方式分成单独的嫩枝，转接入增殖培养基，其中，所述的增殖培养基的配方为：MS培养基中+1.5～3.0mg·L^-16-BA+0.0.5～0.2mg·L^-1NAA+2～6%蔗糖+0.2～1.0%琼脂，pH5.2～5.5。 

5）生根培养：在增殖培养基中培养22～28d，基部再生出丛芽，将长度超过2.5cm的嫩枝从芽丛上分离，接入生根培养基，培养50d后，形成健壮的生根苗；其中，所述的生根培养基的配方为：MS培养基中+0.1～0.3mg·L^-1IBA+2～6%蔗糖+0.2～1.0%琼脂，pH5.2～5.5。 

进一步地，金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 

1）外植体选择与清洗：4～5月间从金吉丽海棠的母株的健壮枝条上采集含有腋芽的当年生枝条，先用肥皂水浸泡10min，流水冲洗60min后备用； 

2）外植体消毒：在超净工作台上先用70%的酒精将清洗干净的外植体消毒30s，无菌水冲洗4次，每次2min；再用0.2%升汞消毒8min，无菌水冲洗5次，每次2min； 

3）初代培养：在超净工作台上将消毒处理好的外植体切成含有1个腋芽且长度为2cm的茎段，并将茎段接入芽诱导培养基中，培养温度为25±1，℃光照时间为15h，光强1800～2200Lx，其中，所述的 芽诱导培养基的配方为：MS培养基中+1.0mg·L^-16-BA+0.2mg·L^-1NAA+3%蔗糖+0.54%琼脂，pH5.2～5.5。 

4）继代培养：在初代培养基中培养20～25d，腋芽萌发生长出丛生芽，并进一步生长成幼嫩植株的上半部分，将1.5cm的丛芽采取芽间分离的方式分成单独的嫩枝，转接入增殖培养基，其中，所述的增殖培养基的配方为：MS培养基中+2.0mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA+3%蔗糖+0.54%琼脂，pH5.2～5.5。 

5）生根培养：在增殖培养基中培养22～28d，基部再生出丛芽，将长度超过2.5cm的嫩枝从芽丛上分离，接入生根培养基，培养50d后，形成健壮的生根苗，其中，所述的生根培养基的配方为：MS培养基中+0.2mg·L^-1IBA+3%蔗糖+0.54%琼脂，pH5.2～5.5。 

本发明的有益效果在于： 

1、金吉丽海棠的繁殖实现周年化：与嫁接繁殖受时间的限制相比，本发明可以在组培室实现周年繁殖、工厂化生产。 

2、采用本发明的组织培养方法得到的金吉丽海棠组培苗生根率高、成活率高，繁殖速度快，繁殖系数达到5.3以上，生根率达到90%以上，得到的金吉丽海棠生长健壮，具有广阔的市场前景。 

具体实施方式

为了更好地解释本发明，以下结合具体实施例进一步阐明本发明的主要内容，但本发明的内容不仅仅局限于以下实施例。 

实施例1： 

一种金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 

1）外植体选择与清洗：4～5月间从金吉丽海棠的母株的健壮枝条上采集含有腋芽的当年生枝条，用肥皂水浸泡5～15min，流水冲洗30～90min后备用； 

2）外植体消毒：在超净工作台上先用体积分数为65～75%的酒精将清洗干净的外植体消毒30～60s，无菌水冲洗3～5次，每次2～4min；再用0.2～0.3%升汞消毒5～10min，无菌水冲洗3～5次，每次2～4min； 

3）初代培养：在超净工作台上将消毒处理好的外植体切成含有腋芽且长度为2～4cm的茎段，并将茎段接入芽诱导培养基中，培养温度为25±1，℃光照时间为10～20h，光强1800～2200Lx；其中，所述的芽诱导培养基的配方为：MS培养基中+0.5～1.2mg·L^-16-BA+0.05～0.3mg·L^-1NAA+1～5%蔗糖+0.2～1.0%琼脂，pH5.2～5.5。 

4）继代培养：在初代培养基中培养20～25d，腋芽萌发生长出丛生芽，并进一步生长成幼嫩植株的上半部分，将1.0～3.0cm左右的丛芽采取芽间分离的方式分成单独的嫩枝，转接入增殖培养基，其中，所述的增殖培养基的配方为：MS培养基中+1.5～3.0mg·L^-16-BA+0.0.5～0.2mg·L^-1NAA+2～6%蔗糖+0.2～1.0%琼脂，pH5.2～5.5。 

5）生根培养：在增殖培养基中培养22～28d，基部再生出丛芽，将长度超过2.5cm的嫩枝从芽丛上分离，接入生根培养基，培养50d后，形成健壮的生根苗；其中，所述的生根培养基的配方为：MS培养基中+0.1～0.3mg·L^-1IBA+2～6%蔗糖+0.2～1.0%琼脂，pH5.2～5.5。 

实施例2 

金吉丽海棠组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤： 

1）外植体选择与清洗：4～5月间从金吉丽海棠的母株的健壮枝条上采集含有腋芽的当年生枝条，先用肥皂水浸泡10min，流水冲洗60min后备用； 

2）外植体消毒：在超净工作台上先用70%的酒精将清洗干净的外植体消毒30s，无菌水冲洗4次，每次2min；再用0.2%升汞消毒8min，无菌水冲洗5次，每次2min； 

3）初代培养：在超净工作台上将消毒处理好的外植体切成含有1个腋芽且长度为2cm的茎段，并将茎段接入芽诱导培养基中，培养温度为25±1，℃光照时间为15h，光强1800～2200Lx，其中，所述的芽诱导培养基的配方为：MS培养基中+1.0mg·L^-16-BA+0.2mg·L^-1NAA+3%蔗糖+0.54%琼脂，pH5.2～5.5。 

4）继代培养：在初代培养基中培养20～25d，腋芽萌发生长出丛生芽，并进一步生长成幼嫩植株的上半部分，将1.5cm的丛芽采取芽间分离的方式分成单独的嫩枝，转接入增殖培养基，其中，所述的增殖培养基的配方为：MS培养基中+2.0mg·L^-16-BA+0.1mg·L^-1NAA+3%蔗糖+0.54%琼脂，pH5.2～5.5。 

5）生根培养：在增殖培养基中培养22～28d，基部再生出丛芽，将长度超过2.5cm的嫩枝从芽丛上分离，接入生根培养基，培养50d后，形成健壮的生根苗，其中，所述的生根培养基的配方为：MS培养基中+0.2mg·L^-1IBA+3%蔗糖+0.54%琼脂，pH5.2～5.5。 

其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。