作为γ分泌酶调节剂的新颖的经取代的三唑基哌嗪以及三唑基哌啶衍生物

摘要

本发明涉及新颖的式(I)的经取代的三唑基哌嗪以及三唑基哌啶衍生物

说明书

发明领域

本发明涉及作为γ分泌酶调节剂有用的新颖的经取代的三唑基哌嗪以 及三唑基哌啶衍生物。本发明进一步涉及用于制备此类新颖化合物的方 法、包含所述化合物作为活性成分的药物组合物、以及所述化合物作为 药剂的用途。

发明背景

阿尔茨海默氏病(AD)是一种渐进式神经退行性疾病，其特征在于丧 失记忆力、认知力与行为稳定性。AD侵犯6％-10％的65岁以上的人群以 及高达50％的85岁以上的人群。它是造成痴呆的主因，并且是继心血管 疾病与癌症之后的第三大死因。目前无法有效治疗AD。在美国与AD相 关的消耗净成本总计每年超过1000亿美元。

然而，AD没有单纯的病因学，它与某些危险因子相关，包括(1)年 龄，(2)家族史与(3)头部创伤；其他因子包括环境毒素与低度教育水平。 在脑缘与脑皮质中的具体神经病理病灶包括由过度磷酸化的τ蛋白质组成 的细胞内神经纤维缠结以及淀粉样蛋白β肽纤维凝集物(淀粉样蛋白斑)的 细胞外沉积。淀粉样蛋白斑之主成分是各种长度的淀粉样蛋白β(A-β、 Abeta或Aβ)肽。其中一种变体是Aβ1-42-肽(Aβ-42)，被认为是形成淀粉 样蛋白的主成分。另一种变体是Aβ1-40-肽(Aβ-40)。Aβ是前体蛋白质： β淀粉样蛋白前体蛋白质(β-APP或APP)的蛋白质水解产物。

家族性早发性体染色体显型AD已与β-淀粉样蛋白前体蛋白质(β-APP 或APP)和早老性蛋白质1与2的错义突变相关。一些患者中，晚发型AD与 载脂蛋白E(ApoE)基因之特定等位基因有关，且最近在α2-巨球蛋白中发 现突变，可能与至少30％的AD人群相关。尽管有此分岐，但所有AD型 均出现类似病理现象。遗传分析为AD的合理逻辑疗法提供了最佳线索。 目前所发现的所有突变均在定量上或定性上影响产生淀粉样蛋白的肽(称 为Aβ-肽(Aβ)，确切地为Aβ42)的制造，并且强力支持AD的“淀粉样蛋白 级联反应假说”(“amyloid cascade hYPothesis”)(Tanzi与Bertram， 2005，《细胞》(Cell)120，545)。Aβ肽的产生与AD病理学之间的可能 相关性强调需要更深入了解Aβ的制造机制，并强力保证调节Aβ水平的疗 法。

Aβ肽之释放受到至少两种蛋白质水解活性调节，分别为裂解Aβ肽的 N-端(Met-Asp键)与C-端(残基37-42)的β-与γ-分泌酶。在分泌途径中，有 证据显示β-分泌酶首先裂解，以致分泌s-APPβ(sβ)并且保留11kDa与膜 结合的羧基末端片段(CTF)。认为后者可在被γ-分泌酶裂解后，产生Aβ 肽。在编码特定蛋白质(早老素)的特定基因的区域中带有某些突变的患者 会选择性提高较长的同型Aβ42的含量，且这些突变与早发家族性AD相 关。因此，许多研究者认为Aβ42是AD发病的主要元凶。

现已清楚γ-分泌酶活性不可归因于单一蛋白质，但事实上与不同蛋 白质的组装体相关。

多重蛋白质复合物中的珈玛(γ)-分泌酶活性包含至少四种成分：早老 素(PS)杂二聚体、呆蛋白(nicastrin)、α-1与pen-2。该PS杂二聚体是由 前体蛋白质经内切蛋白质水解所产生的氨基-与羧基末端PS片段组成。 该催化位点的两个天冬胺酸位于此杂二聚体的界面。最近发现，呆蛋白 可作为γ-分泌酶-底物受体。γ-分泌酶的其他成员的功能尚未知，但均是 活性所必需(Steiner，2004.《当今老年痴呆症研究》(Curr.Alzheimer  Research)1(3)：175-181)。

因此，虽然第二个裂解步骤的分子机制至今仍未明了，但γ-分泌酶- 复合物已成为研究治疗AD的化合物的主要靶标。

已针对AD的γ-分泌酶提出各种策略，这些策略范围为从直接靶向 催化位置至发展γ-分泌酶活性的底物特异性抑制剂与调节剂(Marjaux等 人，2004.《当今药物发现：治疗策略》(Drug Discovery Today： Therapeutic Strategies)，第1卷，1-6)。因此，已有文献说明各种以分泌 酶为靶标的化合物(Larner，2004.以分泌酶为AD治疗靶标(Secretases as  therapeutics targets in AD)：专利案2000-2004.《治疗术专利专家评 论》(Expert Opin.Ther.Patents)14，1403-1420)。

的确，此发现最近受到生化研究的支持，其中显示某些非类固醇消 炎药(NSAID)对γ-分泌酶有效应(Weggen等人(2001)《自然》 (Nature)414，6860，212与WO01／78721与US2002／0128319； Morihara等人(2002)《神经化学杂志》(J.Neurochem.)83，1009； Eriksen(2003)《临床研究杂志》(J.Clin.Invest.)112，440)。使用 NSAID以预防或治疗AD的可能限制在于其对环氧化酶(COX)的抑制活 性，可能造成不期望的副作用及其低的CNS渗透性(Peretto等人，2005， 《医药化学杂志》(J.Med.Chem.)48，5705-5720)。更近来NSAID R-氟比洛芬(flurbiprofen)(一种没有Cox-抑制活性以及相关胃毒性的对映 异构体)在大型的第III期试验中得到失败结果，因为该药物无法让患者 的思考能力或进行日常活动的能力比那些服用安慰剂的患者显著改善。

WO-2009／103652涉及作为Aβ的调节剂的1H-1，2，4-三唑-3-胺衍生 物；

WO-2009／032277涉及作为γ-分泌酶调节剂有用的杂环化合物；

WO-2010／010188涉及适用于治疗退行性关节疾病和发炎疾病的 [1，2，4]三唑并[1，5-a]吡啶化合物；

WO-2010／098495涉及作为AD治疗剂的咪唑基吡嗪衍生物；

WO-2008／099210涉及治疗AD及相关病症的哌嗪衍生物；

并且WO-2008／100412提供适用于治疗与脑部β-淀粉样蛋白肽沉积 有关疾病的化合物。

极需要一种可调节γ-分泌酶活性的新颖化合物，由此开创另一个治 疗阿尔茨海默氏病的新契机。本发明目的之一是克服或降低现有技术中 至少一个缺点，或提供一个有用的替代方案。本发明化合物或本发明一 部分化合物可以比现有技术所所披露的化合物具有更改善的代谢稳定 性、改善的中枢脑部利用率、改善的溶解性、或降低的CYP抑制性。因 此本发明之目的为提供此类新颖化合物。

发明概述

现已发现本发明的化合物作为γ-分泌酶调节剂是有用的。根据本发 明的化合物与其药学上可接受的组合物在治疗或预防阿尔茨海默氏病中 可以是有用的。

本发明涉及新颖的式(I)化合物：

及其立体异构形式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、C_1-4烷 基、C_1-4烷氧基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一 个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷氧基；

L¹是NR⁶、O、羰基或共价键；其中R⁶是氢或C_1-4烷基；

R³代表C_1-4烷基；

R^4a与R^4b独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢与C_1-4烷基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或C_1-4烷基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表H或C_1-4烷氧基；

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

本发明还涉及用于制备式(I)化合物的方法与含其之药物组合物。

已发现本发明化合物可在体外和体内调节γ-分泌酶活性，因此适用于 治疗或预防阿尔茨海默氏病(AD)、创伤性脑损伤、轻度认知障碍 (MCI)、衰老、痴呆、路易斯体(Lewy bodies)痴呆、脑部淀粉样血管 病、多发梗塞性痴呆、唐氏综合征、与帕金森氏病相关的痴呆及与β-淀 粉样蛋白相关的痴呆，优选为AD以及其他与β-淀粉样蛋白病变相关的 疾病(例如：青光眼)。

基于上述式(I)化合物的药理学，其因此适合用作药剂。

更明确而言，该化合物适用于治疗或预防AD、脑部淀粉样血管病、 多发梗塞性痴呆、拳击员痴呆或唐氏综合征。

本发明还涉及一种以根据通式(I)化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐与溶剂化物于制造用于调节γ-分泌酶活性的药剂 上的用途。

优选的是以式(I)化合物用于调节γ-分泌酶活性造成Aβ42-肽相对产 量下降的用途。本发明化合物或本发明一部分化合物的优点在于它们可 加强CNS-渗透性。

本发明现在将进一步说明。下列章节中将更详细定义本发明的不同 方面。除非本文中另有说明，否则如此定义的各方面可与任何其他方面 或多项方面组合。特定地，任何指示为优选的特征或优点可与任何其他 指示为优选的一种或多种特征或优点组合。

详细说明

当说明本发明的化合物时，所采用的术语是依据下列定义构成，除 非本文中另有说明。

当本发明使用术语“经取代”时，除非另有说明或可由上下文中清楚 可见，否则意指采用“经取代”表示的原子或基团上的一个或多个氢(特 定地为1至4个氢，优选为1至3个氢，更优选为1个氢)被来自所指 定基团的选择项置换，其条件为不可超过正常价数，且取代作用产生化 学上稳定的化合物，即该化合物应足够稳定以耐受从反应混合物中分离 形成有用纯度程度并调配成治疗剂的过程。

作为基团或基团部分的术语“卤素”通指氟、氯、溴、碘，除非本文 中另有说明或可由内容中清楚可见。

作为基团或基团部分的术语“C_1-4烷基”是指如式C_nH_2n+1的烃基，其 中n为1至4范围内的数字。C_1-4烷基包含1至4个碳原子，优选为1至 3个碳原子，更优选为1至2个碳原子。C_1-4烷基可为直链或分支，并且 可如在此所指示的经取代。当本文中继碳原子之后使用下标时，该下标 是指该指定基团可能包含的碳原子数。C_1-4烷基包括具有1与4个碳原子 的所有直链或分支烷基，因此包括举例而言，例如：甲基、乙基、正丙 基、异丙基、2-甲基-乙基、丁基及其异构体(例如：正丁基、异丁基以及 叔丁基)；等等。

作为基团或基团部分的术语“C_1-4烷氧基”是指如式OR^b的基团，其 中R^b是C_1-4烷基。适合的C_1-4烷氧基的非限制性实例包括甲基氧(亦称 甲氧基)、乙基氧(亦称乙氧基)、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧 基、仲丁氧基以及叔丁氧基。

本发明化合物的化学名称是依据Chemical Abstracts Service(CAS)认 同的命名原则，采用Advanced Chemical Development，Inc.的命名软件 (ACD／Labs Release12.00产品版本12.01；Build33104，2009年5月27日) 产生。

若为互变异构形式时，应了解，其他未描绘的互变异构形式也被包 括在本发明范围内。

采用下列编号来指示R¹和R²与分子其余部分的附接点：

当任何代号在任何组成中出现一次以上时，各定义是独立的。

应了解，一些式(I)化合物与其药学上可接受的加成盐与溶剂化物可 以包含一个或多个手性中心，并出现立体异构形式。

本说明文中所使用的术语“式(I)化合物”意指包括其加成盐、溶剂化 物以及立体异构体。

上文或下文中术语“立体异构体”、“立体异构形式”或“立体化学异构 形式”可以交换使用。

上文所采用术语“立体异构形式”是限定式(I)化合物可能出现的所有 可能异构形式。除非另有说明或指示，否则化合物的化学名称是指所有 可能立体化学异构形式的混合物。

本发明包括式(I)化合物的所有立体异构体，不论是呈纯的立体异构 体或呈两种或多种立体异构体的混合物。“式(I)化合物”的定义包括式(I) 化合物的所有立体异构体，不论是呈纯的立体异构体或呈两种或多种立 体异构体的混合物。对映异构体是彼此不可重叠的镜像立体异构体。一 对对映异构体的1：1混合物即为消旋物或消旋混合物。非对映异构体是 彼此不为对映异构体的立体异构体，即它们彼此不呈镜像关系。更具体 而言，其立体中心可呈R-或S-构型；两价环状(部分)饱和基团上的取代 基可能呈顺式-或反式-构型。若化合物包含双键时，其取代基可能在该双 键上呈E或Z-构型。式(I)化合物的立体异构形式均被包括在本发明范 围内。因此，若化学上可行时，本发明包括对映异构体、非对映异构 体、消旋物、E异构体、Z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合 物。

其绝对构型是依据坎-殷高-普利洛(Cahn-Ingold-Prelog)系统限定。 在不对称原子上的构型称为R或S。所拆分化合物的未知绝对构型可依 据其使平面极光旋转的方向指定为(+)或(-)。当指示明确的立体异构体 时，其意指该立体异构体实质上不含其他异构体，即其含量低于50％， 优选为低于20％，更优选为低于10％，甚至更优选为低于5％，具体而 言为低于2％，并且最优选为低于1％。因此，例如：当式(I)化合物指 定为(R)时，这表示该化合物实质上不含(S)异构体；当例如指定式(I)化 合物为E时，这表示该化合物实质上不含Z异构体；当例如指定式(I) 化合物为顺式时，这表示该化合物实质上不含反式异构体。

用于医药用途时，式(I)化合物的盐类是其中抗衡离子为药学上可接 受的那些盐类。然而，非药学上可接受的酸或碱的盐类也可以用于例如 制备或纯化药学上可接受的化合物中。所有盐类不论是否是药学上可接 受的，均被包括在本发明范围内。

如上文或下文所述的药学上可接受的酸与碱加成盐意指包括式(I)化 合物可形成的具治疗活性的无毒性酸与碱加成盐形式。药学上可接受的 酸加成盐可以方便地通过用此类适当酸处理其碱形式来获得。适当的酸 类包括例如：无机酸类，如：氢卤酸(例如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝 酸、磷酸，等等酸类；或有机酸类举例而言，例如：乙酸、丙酸、羟基 乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马 来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、 对甲苯磺酸、环己氨磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸，等等酸 类。反之，可使用适当碱处理所述盐形式，转化成游离碱形式。

包含酸性质子的式(I)化合物还可以使用适当的有机和无机碱处理， 转化成其无毒性金属或胺加成盐形式。适当碱盐形式包括例如：铵盐 类、碱金属和碱土金属盐类，例如锂、钠、钾、镁、钙盐类等等与有机 碱(例如：一级、二级和三级脂肪族，以及芳香族胺类如甲胺、乙胺、 丙胺、异丙胺、四种丁胺异构体、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙 胺、二异丙胺、二-正丁胺、吡咯啶、哌啶、吗啉、三甲胺、三乙胺、三 丙胺、奎宁环、吡啶、喹啉以及异喹啉)形成的盐类；双芐基乙二胺、 N-甲基-D-葡糖胺、哈巴胺盐类，以及与氨基酸(举例而言，例如：精氨 酸、赖氨酸，等等)形成的盐类。反之，该盐形式可经酸处理，转化成 游离酸形式。

术语溶剂化物包括式(I)化合物可形成的水合物以及溶剂加成形式， 及其盐类。此类形式的实例为例如：水合物、醇盐，等等。

依下文所述过程制备的式(I)化合物可以被合成为对映异构体的消旋 混合物形式，这些对映异构体可根据本领域已知的拆分程序相互分离。 分离式(I)化合物的对映异构体型的方式涉及使用手性固相的液相层析 法，所述纯的立化学异构形式还可以衍生自适当起始物的相应立体化学 异构形式，其条件为该反应应以立体专一性方式进行。优选地为若需要 立体异构体时，该化合物应采用立体专一性制备方法合成。此类方法将 有利地采用纯的对映异构性起始物。

在本申请框架中，根据本发明的化合物本身即包括其化学元素的所 有同位素组合。在本申请框架中，特别是当述及根据式(I)的化合物时， 该化学元素包括此元素的所有同位素以及同位素混合物。例如：当述及 氢时，应了解是指¹H、²H、³H及其混合物。

因此根据本发明的化合物本身即包括具有一个或多个元素之同位素 及其混合物的化合物，包括放射性化合物，也称为标记放射性化合物， 其中一个或多个非放射活性原子已被其中一个放射活性原子置换。术语 “标记放射性化合物”意指包含至少一个放射活性原子的任何根据式(I)的 化合物或其药学上可接受的盐。例如：该化合物可标记正子或发射γ-射线 的放射活性同位素。在放射活性配位体结合技术上，可选择置换成³H-原 子或¹²⁵I-原子。用于显影时，最常用发射正子(PET)的放射活性同位素是 ¹¹C、¹⁸F、¹⁵O和¹³N，其均由加速器产生，且半衰期分别是20、100、2 和10分钟。由于此类放射活性同位素半衰期较短，因此仅可用于本身有 加速器可自行在现场生产的研究机关，因而限制了其用途。其中最常用 的是¹⁸F、^99mTc、²⁰¹Tl和¹²³I。此类放射活性同位素的操作法、其制备、 分离法以及掺入分子内的方法对于本领域的技术人员而言是已知的。

具体而言，该放射活性原子可选自由氢、碳、氮、硫、氧以及卤素 组成的组。具体而言，该放射活性同位素是选自³H、¹¹C、¹⁸F、¹²²I、 ¹²³I、¹²⁵I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br以及⁸²Br。

本说明书及所附权利要求所采用的单数形式“一个”、“一种”与“该” 还包括复数指示，除非本文中另有说明。例如：“化合物”意指一种化合 物或超过一种化合物。

本说明书所采用上述术语以及其他术语对于本领域的技术人员而言 是很好理解的。

现在提出本发明化合物的优选特征。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物：

及其立体异构形式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、C_1-4烷 基、C_1-4烷氧基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一 个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷氧基；

L¹是NR⁶、O、羰基或共价键；其中R⁶是氢或C_1-4烷基；

R³代表C_1-4烷基；

R^4a与R^4b独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢与C_1-4烷基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或C_1-4烷基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表H或C_1-4烷氧基；

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物及其立体异构形 式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、C_1-4烷 基、C_1-4烷氧基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一 个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷氧基；

L¹是NR⁶、O、羰基或共价键；其中R⁶是氢或C_1-4烷基；

R³代表C_1-4烷基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或C_1-4烷基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或C_1-4烷基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表H或C_1-4烷氧基；

及其药学上可接受的加成盐，与其溶剂化物。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物及其立体异构形 式，其中

R¹选自下组，该组由以下各项组成：卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、 经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一个或多个卤素取代 基取代的C_1-4烷氧基；

R²选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧 基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一个或多个卤素 取代基取代的C_1-4烷氧基；

L¹是NR⁶、O、羰基或共价键；其中R⁶是氢或C_1-4烷基；

R³代表C_1-4烷基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或C_1-4烷基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或C_1-4烷基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表H或C_1-4烷氧基；

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物及其立体异构形 式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、C_1-4烷基、 C_1-4烷氧基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一个或 多个卤素取代基取代的C_1-4烷氧基；

L¹是NR⁶、O、羰基或共价键；其中R⁶是氢或C_1-4烷基；

R³代表C_1-4烷基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或C_1-4烷基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或C_1-4烷基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表H或C_1-4烷氧基；

及其药学上可接受的加成盐，与其溶剂化物。

一项具体实施例中，本发明系有关新颖之式(I)化合物及其立体异构 形式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、C_1-4烷 基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、以及经一个或多个卤素 取代基取代的C_1-4烷氧基；

L¹是NH或共价键；

R³代表C_1-4烷基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或C_1-4烷基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或C_1-4烷基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表C_1-4烷氧基；

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物及其立体异构形 式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、甲基、 经一个或多个卤素取代基取代的甲基、以及经一个或多个卤素取代基取 代的甲氧基；

L¹是NH或共价键；

R³代表甲基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或甲基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或甲基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表甲氧基；

及其药学上可接受的加成盐，与其溶剂化物。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物及其立体异构形 式，其中

R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各项组成：氢、氟、甲基、三 氟甲基、以及三氟甲氧基；

L¹是NH或共价键；

R³代表甲基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或甲基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或甲基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表甲氧基；

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

在一个实施例中，本发明涉及新颖的式(I)化合物及其立体异构形 式，其中

R¹选自下组，该组由以下各项组成：氟、甲基、三氟甲基以及三氟 甲氧基；

R²选自下组，该组由以下各项组成：氢、氟、甲基、以及三氟甲 基；

L¹是NH或共价键；

R³代表甲基；

R^4a与R^4b相同并且两者均代表氢或甲基；

X是N或CH；

L²是O、CH₂或共价键；其条件为当L²是O时，则X是CH；

R⁵是氢或甲基；

Y¹是CH或N；

Y²是CR⁷或N；其中R⁷代表甲氧基；

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式、或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹是在2-位，而R²是在5-位。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹代表氟，并且是在 2-位，并且R²代表三氟甲基并且是在5-位。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述的它们的任何子群，其中R¹是在2-位，而R²是 在4-位。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹代表甲基并且是在 2-位，及R²代表氢或氟并且是在4-位。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹在2-位并且选自下 组，该组由以下各项组成：卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、经一个或多个 卤素取代基取代的C_1-4烷基、与经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷 氧基；并且其中R²选自下组，该组由以下各项组成：氢、卤素、C_1-4烷 基、C_1-4烷氧基、经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷基、与经一个 或多个卤素取代基取代的C_1-4烷氧基。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹在2-位与其中R²位于任何其他位置；并且其中R¹与R²独立地选自下组，该组由以下各 项组成：卤素、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、经一个或多个卤素取代基取代的 C_1-4烷基、以及经一个或多个卤素取代基取代的C_1-4烷氧基。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹在2-位并且选自下 组，该组由以下各项组成：氟、甲基或三氟甲基。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹与R²中至少一个 不是氢。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R¹在2-位。

本发明的另一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或 任何其他实施例所述及的它们的任何子群，其中适用于下列一项或多项 限制条件：

(a)R¹代表甲基并且是在2-位，并且R²代表氢或氟并且是在4- 位；

(b)L¹是NH；

(c)R³代表甲基；

(d)R^4a与R^4b相同并且两者均代表甲基；

(e)X是N，并且L²是CH₂或共价键；特定地X是N并且L²是共 价键；

(f)R⁵是氢；

(g)Y¹是CH；

(h)Y²是CR⁷；其中R⁷代表甲氧基。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他实施例所述及的它们的任何子群，其中L¹是NR⁶或共价键；特定 地为NR⁶；更特定地为NH。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R^4a与R^4b相同并且两 者均代表甲基。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中X是N，并且L²是 CH₂或共价键；特定地X是N并且L²是共价键。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中X是CH。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中L²是共价键。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中L²是O或CH₂；其条 件为当L²是O时，则X是CH；特定地L²是CH₂。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中Y¹是CH；及Y²是 CR⁷；其中R⁷代表甲氧基。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中Y¹与Y²中至少一个 代表N。

本发明的一个实施例涉及那些式(I)化合物及其立体异构形式，或任 何其他具体实施例所述及的它们的任何子群，其中R⁷代表甲氧基。

在一个实施例中，式(I)化合物选自下组，该组由以下各项组成：

1-[5-(4-氟苯基)-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-3-基]-4-(4-甲氧基苯基)-哌 嗪，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-[(2-甲基-4-吡啶基)氧]-1-哌 啶基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪 基]-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-(4-吡啶基甲基)-1-哌嗪基]- 1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-[(2-甲基-4-吡啶基)甲基]-1- 哌啶基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-[(2-甲基-4-吡啶基)甲基]-1- 哌啶基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺.HCl.H₂O，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-(4-吡啶基)-1-哌嗪基]-1H- 1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-3-[4-(4-甲氧基苯基)-1-哌嗪基]-1-甲基- 1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-[(6-甲基-4-嘧啶基)氧]-1-哌 啶基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[2-氟-5-(三氟甲基)苯基]-1-甲基-3-[4-(4-吡啶基氧)-1-哌啶基]- 1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-(4-氟-2-甲基苯基)-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1- 甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-(4-氟-2-甲基苯基)-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1- 甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺.1.2HCl.1.5H₂O，

N-[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪 基]-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-[3-氟-5-(三氟甲基)苯基]-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪 基]-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺.0.8HCl，

3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1-甲基-N-(2-甲基苯基)- 1H-1，2，4-三唑-5-胺，

3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1-甲基-N-[3-(三氟甲氧 基)苯基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1-甲基-N-[3-(三氟甲氧 基)苯基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺.HCl，

N-[3-氟-2-(三氟甲基)苯基]-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪 基]-1-甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺，

3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1-甲基-N-[2-(三氟甲基) 苯基]-1H-1，2，4-三唑-5-胺，以及

3-[4-(5-甲氧基-2-吡啶基)-1-哌嗪基]-1-甲基-N-(2-甲基苯基)-1H- 1，2，4-三唑-5-胺，

其立体异构形式，及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

在一个实施例中，式(I)化合物选自下组，该组由以下各项组成：

3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1-甲基-N-(2-甲基苯基)- 1H-1，2，4-三唑-5-胺，

N-(4-氟-2-甲基苯基)-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1- 甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺，以及

N-(4-氟-2-甲基苯基)-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1- 甲基-1H-1，2，4-三唑-5-胺.1.2HCl.1.5H₂O，

其立体异构形式，

及其药学上可接受的加成盐，及其溶剂化物。

在一个实施例中，式(I)化合物是3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基- 1-哌嗪基]-1-甲基-N-(2-甲基苯基)-1H-1，2，4-三唑-5-胺或N-(4-氟-2-甲基 苯基)-3-[4-(4-甲氧基苯基)-3，3-二甲基-1-哌嗪基]-1-甲基-1H-1，2，4-三唑- 5-胺.1.2HCl.1.5H₂O。

上述所需具体实施例的所有可能组合均视为涵括在本发明范围内。

化合物的制备

本发明还涵括一种制备式(I)化合物及其子群的方法。在所说明的反 应中，可能有必要保护反应性官能团，例如：羟基、氨基或羧基，其中 终产物需要此类基团，以避免其不必要地参与反应。常用的保护基可依 据标准操作法使用，例如：参见T.W.Greene与P.G.M.Wuts的“有机 化学中的保护基(Protective Groups in Organic Chemistry)”，约翰·威利父 子出版社(John Wiley and Sons)，1999。

式(I)化合物及其子群可依下文说明的连续步骤制备。其通常是从可 商购的起始材料制备的或通过对于本领域的技术人员而言显而易见的标 准手段制备的。本发明化合物还可以采用有机化学领域中的技术人员常 用的标准合成法制备。

一些典型实例的一般制备显示如下：

实验程序1

方案1

式(I)(其中L₁是NR⁶并且R⁶是氢，由此称为(I-a))化合物可由式 (II-a1)中间物与适当的式(III)芳基卤化物之间的偶联反应制备。方案1 中，halo(卤素)的定义为Cl、Br或I，所有代号均如上述定义。此反应可 在合适碱(举例而言，例如：Cs₂CO₃或叔丁醇钠)的存在下进行。该反 应可在反应惰性溶剂(举例而言，例如：甲苯、N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)、1，2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁醇或二噁烷)中进行。该反应典 型地在包含合适催化剂(如：三(二亚芐基丙酮)二钯(Pd₂(dba)₃、乙酸钯 (II)(Pd(OAc)₂))与配位体(如：(9，9-二甲基-9H-呫吨-4，5-二基)双[二苯基 膦](Xantphos)、[1，1′-联萘]-2，2′-二基双[二苯基膦](BINAP)、双(2-二苯 基膦基苯基)醚(DPEphos)，或二环己基[2′，4′，6′-参(1-甲基乙基)[1，1′-联 苯]-2-基]-膦(X-phos))的催化系统的存在下进行。此反应优选是在惰性气 压下进行，如：氮或氩气压下。可利用微波辅助加热，加强反应速率与 产率。

可以可任选地将操作反应后所残留的微量钯通过用N-乙酰基-L-半胱 氨酸或硫醇官能化的硅石处理在合适溶剂或溶剂混合物(举例而言，例 如：DCM与MeOH)中的式(I)化合物的溶液来去除。

或者，还可由式(II-a1)中间物与适当的式(III)芳基卤化物进行铜催化 的反应，制备式(I-a)化合物，其中所有代号均如上述定义。该反应可在 保护性气压下(举例而言，例如：N₂气压下)进行。搅拌、加温(例如： 70℃-200℃)和／或加压可能促进反应速率。该反应典型地在有机溶剂 (举例而言，例如：二甲亚砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF))中进行。 可任选地，该反应可以在碱的存在下(举例而言，例如：K₂CO₃、Cs₂CO₃或三乙胺(Et₃N))和／或在配位体的存在下(如：N，N’-二甲基乙二胺或1，10- 菲咯啉)进行。可以按照催化的量或化学计算量来使用铜催化剂(例如铜 盐，如：氧化亚铜(I)、碘化亚铜(I)或溴化亚铜(I))。

实验程序2

方案2

式(I)(其中L₁是共价键，由此称为(I-b1))化合物可由式(IV-b)中 间物(其中R代表烷基取代基)与适当的式(V)肼衍生物依据方案2进行缩 合反应制得。该反应可在反应惰性溶剂中进行，举例而言，例如：甲 苯、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、1，2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁醇或二噁 烷。搅拌以及加温(例如：70℃-120℃)可以促进反应速率。R可选自例 如由甲基与乙基组成的组。此反应中通常还会形成式(I-b2)的位置异构 体。

实验程序3

式(II-a1)中间物可由式(VI-a)中间物与适当的式(V)肼衍生物依据方 案3进行缩合反应制得。该反应可在反应惰性溶剂中进行，举例而言， 例如：甲苯、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、1，2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁 醇、异丙醇或二噁烷。搅拌以及加温(例如：70℃-120℃)可以促进反应 速率。此反应中通常还会形成式(II-a2)的位置异构体。

方案3

实验程序4

式(VI-a)中间物可由式(VII)中间物与适当的式(VIII)亚胺酸酯衍生物 (举例而言，例如：氰基亚胺基甲酸二苯基酯)依据方案4进行亲核性取代 反应后制得。该反应可在反应惰性溶剂中进行，举例而言，例如：乙 腈、异丙醇或二氯甲烷。可任选地该反应是在碱(举例而言，例如： K₂CO₃、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)或Et₃N)的存在下进行。

方案4

实验程序5

式(IV-b)中R代表烷基取代基的中间物可由式(IX-b)中间物与适当的 式(X)烷基卤化物依据方案5进行烷化反应制得。该反应可在合适的碱 (举例而言，例如：K₂CO₃或氢化钠)的存在下进行。该反应可在反应 惰性溶剂中进行，举例而言，例如：N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙腈、 乙醇或丙酮。方案5中，halo的定义是Cl、Br或I。

方案5

实验程序6

式(IX-b)中间物可依方案6所示制备：

方案6

由式(XI)化合物与硫脲或1，1’-硫代羰基二咪唑于反应惰性溶剂(举例 而言，例如：丙酮)中缩合，产生式(XIII-b)中间物。随后，以式(VII)中 间物取代式(XIII-b)中间物。该反应典型地在反应惰性溶剂(举例而言， 例如：丙酮)中进行，产生式(IX-b)中间物。方案6中，halo2的定义是 C1或Br，并且所有其他取代基均如上述定义。

实验程序7

方案7

式(I)(其中L₁是CO，由此称为(I-c))化合物可由式(XIV-c)中间物进 行氧化反应制得。该反应可在氧化剂(举例而言，例如：氯甲酸吡啶鎓盐 或迪斯-马丁(Dess-Martin)试剂)的存在下进行。该反应可在反应惰性溶剂 中进行，举例而言，例如：二氯甲烷、乙腈或四氢呋喃。在方案7中，所 有取代基均如上述定义。

实验程序8

方案8

式(XIV-c)中间物可由式(II-c1)中间物与适当的式(XV)醛依据方案8 进行金属化反应制得。所述金属化反应宜在合适的反应溶剂(举例而言， 例如：四氢呋喃)中，于-80℃至0℃下，以合适碱(如：正丁基锂)以及合 适亲电子物(如：式(XV)醛)处理式(II-c1)中间物持续一段足以完成反应的 时间来进行。方案8中，halo2的定义是Br或I，并且所有其他取代基均如 上述定义。

实验程序9

方案9

式(II-c1)中间物可由式(XVI-c)中间物与适当的式(XVII)烷基卤化物 依据方案9进行烷基化反应后制得。该反应可在合适碱的存在下进行， 举例而言，例如：K₂CO₃或氢化钠。该反应可在反应惰性溶剂中进行， 举例而言，例如：N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或四氢呋喃。方案9中，halo 的定义是Cl、Br或I。

此反应期间，通常还会形成式(II-c2)位置异构体。

实验程序10

方案10

式(XVI-c)中间物可由式(XVIII)中间物与式(VII)中间物进行亲核性 取代反应制得。该反应可在合适碱的存在下进行，举例而言，例如： K₂CO₃或DIPEA。该反应可在反应惰性溶剂中进行，举例而言，例如： 正丁醇或乙腈。方案10中，halo2的定义为Cl或Br，且所有其他取代 基均如上述定义。

实验程序11

方案11

式(I)(其中L₁是O，由此称为(I-d))化合物可由式(II-c1)中间物与 式(XIX)中间物进行亲核性取代反应制得。该反应可在合适碱的存在下进 行，举例而言，例如：K₂CO₃或DIPEA。该反应可在反应惰性溶剂中进 行，举例而言，例如：二氯甲烷或乙腈。方案11中，halo2的定义是Cl 或Br，且所有其他取代基均如上述定义。

式(III)、(V)、(VII)、(VIII)、(X)、(XI)、(XII)、(XV)、(XVII)、 (XVIII)与(XIX)化合物可以商购获得或者可以易于由本领域的技术人员 制得。

可采用对于本领域的技术人员而言已知的一些程序制得化合物的 HCl盐形式。在典型程序中，例如：可以将游离碱溶于DIPE或Et₂O 中，并且随后可以滴加6N HCl的2-丙醇溶液或1N HCl的Et₂O溶液。 典型地搅拌该混合物10分钟后，可滤出产物。该HCl盐通常经过真空干 燥。

若必要或需要时，可依任何次序继续进行下列其他步骤：

可采用本领域中已知的程序，将式(I)化合物、其任何子群、加成 盐、溶剂化物以及立体化学异构形式转化成其他根据本发明的化合物。

将由本领域技术人员理解的是，上述程序中，中间化合物的官能团 可能需要使用保护基封端。若中间物化合物的官能团已使用保护基封端 时，可在反应步骤之后脱除保护基。

药理学

已发现本发明化合物可调节γ-分泌酶活性。根据本发明的化合物及其 药学上可接受的组合物因此在治疗或预防以下疾病中是有用的：AD、 TBI、拳击员痴呆、MCI、衰老、痴呆、与路易体相关的痴呆、脑部淀粉 样血管病、多发梗塞性痴呆、唐氏综合征、与帕金森氏病相关的痴呆以 及与β-淀粉样蛋白相关的痴呆，优选为AD。

因此，根据本发明的化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗 或预防选自下组的疾病或病症，该组由以下各项组成：AD、TBI、 MCI、衰老、痴呆、与路易体相关的痴呆、脑部淀粉样血管病、多发梗 塞性痴呆、拳击员痴呆、唐氏综合征、与帕金森氏病相关的痴呆以及与 β-淀粉样蛋白相关的痴呆。

本文所采用术语“γ-分泌酶活性的调节”是指γ-分泌酶-复合物对APP 加工的影响。优选地是指这样一种影响：其中APP的整体加工速率基本 上保持为如同未使用该化合物时，但其中加工产物的相对量改变，更优 选为以降低Aβ42-肽产量的方式而改变。例如：可产生不同的Aβ种类 (例如：Aβ-38或其他的不是Aβ-42的较短氨基酸序列的Aβ肽种类)或产 物的相对量不同(例如：改变(优选为提高)Aβ-40对Aβ-42的比例)。

先前已知γ-分泌酶复合物还涉及Notch-蛋白质的加工过程。Notch是 一种信号传导蛋白，在发育过程中扮演关键角色(例如：参见 Schweisguth F(2004)《当今生物学》(Curr.Biol.)14，R129)。在γ-分 泌酶调节剂的疗法用途方面，它的特别优点似乎在于不干扰γ-分泌酶活性 的加工Notch的活性，以避免可能不希望的副作用。虽然γ-分泌酶抑制 剂因同时抑制Notch加工而出现副作用，但γ-分泌酶调节剂可以在不减 少较小的不易聚集的Aβ型(即Aβ38)的产生并且不会同时抑制Notch 加工的情况下具有选择性地减少该极易聚集并且具神经毒性的Aβ型(即 Aβ42)的产生的优点。因此不会影响γ-分泌酶-复合物的Notch加工活性 的化合物是优选的。

本文所采用术语“治疗”旨在包括所有过程，其中可能为减慢、干 扰、遏止或阻止疾病发展，但不一定完全消除所有症状。

本发明涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学上 可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物，它们用作药剂。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物，它们用于调节γ-分泌酶活性。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐与溶剂化物，它们用于治疗或预防选自下组的 疾病或病症，该组由以下各项组成：AD、TBI、拳击员痴呆、MCI、衰 老、痴呆、与路易体相关的痴呆、脑部淀粉样血管病、多发梗塞性痴 呆、唐氏综合征、与帕金森氏病相关的痴呆以及与β-淀粉样蛋白相关的 痴呆。

在一个实施例中，该疾病或病症优选为AD。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物，它们用于治疗所述疾病。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物，其系用于治疗或预防该等疾病。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物，它们用于治疗或预防(特别是治 疗)γ-分泌酶所介导的疾病或病症。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物用于制造药剂的用途。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物用于制造调节γ-分泌酶活性的药剂的 用途。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐和溶剂化物用于制造治疗或预防如上述任何一 种疾病病症的药剂的用途。

本发明还涉及一种根据通式(I)的化合物、其立体异构形式及其药学 上可接受的酸或碱加成盐与溶剂化物用于制造治疗如上述任何一种疾病 病症的药剂的用途。

本发明中，如通过合适分析法所测定的(如：下文实例所采用的分析 法)，特别优选地式(I)化合物或其任何子群于抑制Aβ42-肽产生的IC₅₀值应低于1000nM，优选低于100nM，更优选低于50nM，甚至更优选 低于20nM。

可以将本发明化合物给予至哺乳动物，优选为人类，用于治疗或预 防上述任一种疾病。

鉴于式(I)化合物的用途，提供一种治疗患有上述任一种疾病的恒温 动物(包括人类)的方法或防止恒温动物(包括人类)患有上述任一种疾病的 方法。

所述方法包括对恒温动物(包括人类)给予(亦即全身性或局部给予， 优选为经口给予)有效量的式(I)化合物、其立体异构形式与其药学上可 接受的加成盐或溶剂化物。

本发明还涉及一种式(I)化合物用于调节γ-分泌酶活性、造成Aβ42- 肽的相对产量降低的用途。

本发明化合物或部分化合物的优点在于其可加强渗透CNS。

那些治疗此类疾病的技术人员可以由下文出示的试验结果确定有效 治疗日剂量。有效治疗日剂量将是约0.005mg／kg至50mg／kg体重，特 定地是0.01mg／kg至50mg／kg体重，更特定地是0.01mg／kg至25 mg／kg体重，优选为约0.01mg／kg至约15mg／kg体重，更优选为约 0.01mg／kg至约10mg／kg体重，甚至更优选为约0.01mg／kg至约1 mg／kg体重，最优选为约0.05mg／kg至约1mg／kg体重。实现治疗效果 所需的根据本发明的化合物(本文也称为活性成分)用量当然将随各病例变 化，例如：具体化合物、给予途径、接受者的年龄与条件以及所治疗的 具体病变或疾病。

一种治疗方法还包括依据每天摄入1至4次的方案来给予活性成 分。在这些治疗方法中，根据本发明化合物优选为先调配后再给予。如 下文所说明，采用已知的并且容易获得的成分制备合适的药物调配物。

适合治疗或预防阿尔茨海默氏病或其症状的本发明化合物可单独给 予或组合一种或多种其他治疗剂给予。该组合疗法包括：给予包含式(I) 化合物与一种或多种其他治疗剂的单一药物剂量调配物，以及给予分别 呈其分开的药物剂量调配物的式(I)化合物与各其他治疗剂。例如：式(I) 化合物与治疗剂可共同形成单一口服剂量组合物如：片剂或胶囊，或各 药剂分开地作为口服剂量调配物给予。

虽然活性成分可能单独给予，但其最好作为药物组合物而呈递。

因此，本发明进一步提供一种药物组合物，该药物组合物包含药学 上可接受的载体以及作为活性成分的治疗有效量的根据式(I)的化合物。

该载体或稀释剂必须在与组合物中其他成分兼容并且对其接受者无 害的意义上是“可接受的”。

为了方便给予，本化合物可调配成用于给药目的的各种药物形式。 根据本发明的化合物，具体而言为根据式(I)的化合物、其药学上可接受 的酸或碱加成盐、其立体化学异构形式或其任何子群或组合均可调配成 用于给药目的的各种药物形式。适当的组合物可为所有常用于全身给予 药物的组合物。

为了制备本发明的药物组合物，可以将作为活性成分的有效量的特 定化合物(可任选地呈加成盐形式)与药学上可接受的载体合并成均匀的混 合物，该载体可依给药所希望的制剂形式而采取各种各样的形式。此类 药物组合物宜呈所希望的合适单位剂型，具体而言，适合用于经口、经 直肠、经皮肤、经肠胃外注射或吸入给药。例如：制备口服剂型组合物 时，可采用任何常用的药物介质，举例而言，例如：水、甘油、油类、 醇类，等等，以用于口服液体制剂，如：悬浮液、糖浆、酏剂、乳液以 及溶液；或固体载体如：淀粉、糖类、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合 剂、崩解剂，等等，以用于粉剂、丸剂、胶囊以及片剂。由于片剂与胶 囊方便给药，因此代表最有利的口服单位剂型，此时当然使用固体药物 载体。供肠胃外给药时，载体经常包含无菌水，至少占大部分，但也可 添加其他例如可提高溶解度的成分。例如：可制备注射液，其中该载体 包括生理盐水溶液、葡萄糖溶液或生理盐水与葡萄糖溶液的混合物。例 如：可制备注射液，其中该载体包括生理盐水溶液、葡萄糖溶液或生理 盐水与葡萄糖溶液的混合物。包含式(I)化合物的注射液可于油中调配， 以延长效用。适于此目的的油类为例如：花生油、芝麻油、棉籽油、玉 米油、大豆油、长链脂肪酸的合成性甘油酯及其与其他油类的混合物。 还可制备注射用悬浮液，其中可使用适当液体载体、悬浮剂，等等。亦 包括临用前才转换成液体制剂形式的固态制剂形式。适合经皮肤给予的 组合物中，可任选地该载体包含渗透加强剂和／或合适润湿剂，可任选地 与微量的任何性质的合适添加剂组合，该添加剂不可对皮肤产生严重的 不良效应。该添加剂可促进给药至皮肤和／或有助于制备所希望的组合 物。此类组合物可依各种不同方式给予，例如：呈透皮贴剂、滴剂、软 膏。式(I)化合物的酸或碱加成盐由于它们相应的碱或酸形式提高溶解 度，因此更适合制备水性组合物。

尤其有利的是将上述药物组合物调配成单位剂型，以方便给予均一 剂量。本文所采用单位剂型是指适合呈单位剂量的物理性分离单位，各 单位包含经计算可产生所希望治疗效果的预定量的活性成分与所希望的 药物载体的组合。此类单位剂型的实例是片剂(包括画线或包衣的片剂)、 胶囊、丸剂、粉剂包、药囊、栓剂、注射用溶液或悬浮液，等等，及其 分割成的多重剂量。

由于根据本发明化合物为强效的口服用化合物，因此用于经口给予 的包含该化合物的药物组合物特别有利。

为了提高药物组合物中式(I)化合物的溶解性和／或稳定性，有利的 是使用α-、β-或γ-环糊精或其衍生物，特别是经羟烷基取代的环糊精， 例如：2-羟丙基-β-环糊精或磺丁基-β-环糊精。还可使用共溶剂(如：醇类) 来改善药物组合物中根据本发明的化合物的溶解性和／或稳定性。

依给药模式而定，该药物组合物优选为包含0.05％至99％重量比， 更优选为0.1％至70％重量比，甚至更优选为0.1％至50％重量比的式(I) 化合物，以及1％至99.95％重量比，更优选为30％至99.9％重量比，甚 至更优选为50％至99.9％重量比的药学上可接受的载体，所有百分比均 基于组合物总重量计。

下列实例说明本发明。

实例

下文中，术语“DCM”意指二氯甲烷；“MeOH”意指甲醇；“LCMS” 意指液相层析法／质谱；“HPLC”意指高效液相层析法；“sol.”意指溶液； “aq.”意指水溶液；“r.t.”意指室温；“m.p.”意指熔点；“RP”意指反相； “min”意指分钟；“h”意指小时；“EtOAc”意指乙酸乙酯；“eq”意指当 量；“r.m.”意指反应混合物；“DIPE”意指二异丙醚；“THF”意指四氢呋 喃；“DMSO”意指二甲亚砜；“DMF”意指N，N-二甲基甲酰胺；“X-Phos” 意指二环己基[2′，4′，6′-三(1-甲基乙基)[1，1′-联苯]-2-基]膦；“Pd(dPPf)Cl₂” 意指[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)；“DIPEA”意指N，N-二异丙 基乙胺；“9-BBN”意指9-硼杂双环[3.3.1]壬烷；“i-PrOH”意指2-丙醇； 并且“Pd₂(dba)₃”意指三[μ-[(1，2-η：4，5-η)-(1E，4E)-1，5-二苯基-1，4-戊二烯- 3-酮]]二钯。

A.中间体的制备

实例A1

中间体1的制备

取含氰基亚胺基甲酸二苯基酯(5.3g，21.56mmol)的DCM(50mL) 溶液加至含1-(4甲氧基苯基)-2，2-二甲基哌嗪(5g，21.56mmol)的 DCM(190mL)溶液中。于室温下搅拌反应混合物24小时。加水，并用 DCM萃取混合物。将分离的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并蒸发溶剂。将 残余物悬浮于DIPE中，滤出，并于烘箱中干燥。产量：6.12g中间体 1(77％)。

实例A2

a)中间体2的制备

添加叔丁醇钠(5.87g，52.28mmol)至含1-苄基-4-羟基哌啶(5g， 26.14mmol)的DMSO(12mL)中。于室温下搅拌反应混合物1小时。然 后添加4-氯吡啶盐酸盐(4.31g，28.75mmol)，并于室温下搅拌反应混合 物3小时(微放热)。加水，并用EtOAc萃取混合物。将分离的有机层干 燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。产量：4.2g中间体2(60％)。

b)中间体3的制备

于氮气氛下，添加中间体2至含Pd／C10％(1g)的MeOH(150mL) 悬浮液中。于25℃及氢气氛下搅拌反应混合物。吸收H₂(1eq)后，经硅 藻土过滤催化剂。蒸发滤液。产量：2.6g中间体3(94％)。

c)中间体4的制备

依序添加DIPEA(2.51mL，14.59mmol)与含氰基亚胺基甲酸二苯基 酯(3.58g，14.59mmol)的DCM(36mL)至含中间体3(2.6g，14.59mmol) 的DCM(126mL)溶液中。于室温下搅拌反应混合物4小时。加水，并用 DCM萃取混合物。将分离的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。 残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至 95／5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：2.84g中间体4(60％)。

实例A3

a)中间体5的制备

添加含60％NaH的矿物油悬浮液(6g，150mmol)至0℃的含4-羟 基-哌啶-1-羧酸叔丁酯(14.1g，70mmol)的无水THF(120mL)溶液中。于 0℃下搅拌反应混合物30分钟。然后添加含4-氯-6-甲基-嘧啶(9g，70 mmol)的无水THF(30mL)溶液，并于室温下搅拌反应混合物24小时。 加水，并用DCM萃取混合物。将分离的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并 蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：石油醚／EtOAc，从 10／1至1／1)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：13g中间体 5(63％)。

b)中间体6的制备

取含中间体5(13g，44.3mmol)的4M HCl在MeOH溶液(200mL) 中的混合物于室温下搅拌4小时。蒸发溶剂。将残余物悬浮于DIPE(200 mL)中，于室温下搅拌30分钟，滤出，并于烘箱中干燥。产量：9.5g中 间体6(93％)

c)中间体7的制备

依序添加DIPEA(3mL，17.41mmol)与含氰基亚胺基甲酸二苯基酯 (2.14g，8.71mmol)的DCM(21mL)溶液至含中间体6(2g，8.71mmol)的 DCM(77mL)溶液中。于室温下搅拌反应混合物1小时。加水，并用 DCM萃取混合物。将分离的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。 残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至 97.5／2.5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：2.09g中间体 7(71％)。

实例A4

中间体8的制备

添加含氰基亚胺基甲酸二苯基酯(2.62g，10.68mmol)的DCM(26 mL)溶液至含1-(4-甲氧基苯基)-哌嗪(5g，10.68mmol)的DCM(94mL) 溶液中。于室温下搅拌反应混合物24小时。加水，并用DCM萃取混合 物。将分离的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。产量：3.45g中 间体8(96％)。

实例A5

中间体9的制备

添加含氰基亚胺基甲酸二苯基酯(3.01g，12.25mmol)的DCM(15 mL)溶液至含1-(吡啶-4-基)哌嗪(2g，12.25mmol)的DCM(32mL)溶液 中。于室温下搅拌反应混合物1小时。蒸发溶剂。残余物经快速管柱层 析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至90／10)。收集产物部分，并 在真空中浓缩。将残余物悬浮于DIPE中，滤出，并于烘箱中干燥。产 量：3.7g中间体9(98％)。

实例A6

a)中间体10的制备

滴加2.5M正丁基锂的己烷溶液(30mL，75mmol)至-78℃的含甲基 三苯基鏻化溴(20g，56.0mmol)的无水THF(130mL)悬浮液中。于-78℃ 下搅拌反应混合物2小时。然后滴加4-氧代-哌啶-1-羧酸叔丁酯(10g， 50.25mmol)的无水THF(40mL)溶液至反应混合物中。在添加期间形成 白色悬浮液。于室温下搅拌反应混合物16小时。于0℃下滴加水(10 mL)，并蒸发溶剂。加水(70mL)，并用EtOAc萃取混合物。将分离的有 机层干燥(MgSO4)，过滤，并蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化 (洗脱液：石油醚／EtOAc15／1)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产 量：5.3g中间体10(32％，纯度60％)。

b)中间体11的制备

添加0.5M9-BBN(120mL)的THF溶液至脱气的中间体10(11.3g， 57.36mmol)中，并将反应混合物于回流下加热1小时。冷却至室温后， 添加反应混合物至含4-溴-2-甲基-吡啶(10.8g，63.09mmol)、 Pd(dppf)Cl₂(1.259g，1.721mmol)与K₂CO₃(23.7g，172.1mmol)的 DMF／水10／1(250mL)混合物中，并将反应混合物于60℃下加热4小 时。然后将反应混合物冷却至室温，并倒至水中。添加10％NaOH水溶 液调整至pH11，用EtOAc萃取。将分离的有机层干燥(MgSO₄)，过 滤，并蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：石油醚／EtOAc 20／1)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：7.6g中间体11(46％)。

c)中间体12的制备

取含中间体11(7.6g，20.27mmol)的4M HCl在MeOH溶液(30mL) 中的混合物于室温下搅拌4小时。蒸发溶剂。将残余物悬浮于DIPE(200 mL)中，于室温下搅拌30分钟，滤出，并于烘箱中干燥。产量：5.65g 中间体12(96％；.HCl)

d)中间体13的制备

依序添加DIPEA(1.52mL，8.82mmol)与含氰基亚胺基甲酸二苯基 酯(1.08g，4.41mmol)的DCM(11mL)溶液至含中间体12(1g，4.41 mmol)的DCM(39mL)溶液中。于室温下搅拌反应混合物1小时。蒸发 溶剂。产量：0.5g中间体13(34％)。

实例A7

中间体14的制备

添加含氰基亚胺基甲酸二苯基酯(2.77g，11.28mmol)的DCM(15 mL)溶液至含1-(4-吡啶基甲基)-哌嗪(2g，11.28mmol)的DCM(16mL) 溶液中。于室温下搅拌反应混合物1小时。蒸发溶剂。残余物经快速管 柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部 分，并在真空中浓缩。将残余物悬浮于DIPE中，滤出，并于烘箱中干 燥。产量：3.5g中间体14(96％)

实例A8

a)中间体15的制备

添加叔丁醇钠(8.8g，78.4mmol)至含4-羟基-哌啶-1-羧酸叔丁酯 (7.89g，39.2mmol)的DMSO(39mL)溶液中。于室温下搅拌反应混合物 1小时。然后添加4-氯-2-甲基吡啶(5g，39.2mmol)，于50℃下搅拌反 应混合物48小时。然后让反应混合物冷却至室温。加水，并用EtOAc 萃取混合物。将分离的有机层经NaHCO₃溶液与盐水洗涤，干燥 (MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液： DCM／MeOH，从100／0至98／2)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产 量：8.8g中间体15(77％)。

b)中间体16的制备

添加6N HCl的2-丙醇溶液(8.62mL，51.7mmol)至含中间体 15(2.5g，8.55mmol)的2-丙醇(52mL)溶液中，于室温下搅拌30分钟。 蒸发溶剂。将残余物悬浮于CH₃CN中。滤出产物，并溶于水中。使用 K₂CO₃水溶液释出碱，并用DCM萃取混合物。分离有机相，干燥 (MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。产物未再纯化即用于下一个步骤。产 量：1.52g中间体16(93％)。

c)中间体17的制备

添加含氰基亚胺基甲酸二苯基酯(1.28g，5.2mmol)的DCM(15mL) 溶液至含中间体16(2g，5.2mmol)的DCM(5mL)溶液中。于室温下搅拌 反应混合物1小时。蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液： DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产 量：1.75g中间体17(100％)。

实例A9

a)中间体18的制备

添加2-溴-5-甲氧基吡啶(2g，10.64mmol)、Cs₂CO₃(10.4g，31.91 mmol)、X-Phos(1.12g，2.34mmol)与Pd₂(dba)₃(974mg，1.06mmol)至 于氮气氛下的含哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.96g，21.27mmol)的2-甲基-2-丙 醇(120mL)溶液中。反应混合物于100℃下加热48小时。然后将反应混 合物冷却至室温，加水，并用DCM萃取混合物。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至98／2)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。然后残余物经RP制备型HPLC纯化[RP Vydac Denali C18-10μm， 250g，5cm)；流动相：梯度(0.25％NH₄HCO₃水溶 液)／MeOH／CH₃CN)]。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：100mg 中间体18(3.2％)。

b)中间体19的制备

添加6N HCl的2-丙醇溶液(2mL，12mmol)至含中间体18(100mg， 0.34mmol)的2-丙醇(2mL)溶液中，于室温下搅拌16小时。蒸发溶剂。 残余物溶于DCM中，并用1N NaOH溶液洗涤。将分离的有机层经 NaHCO₃溶液与盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，并蒸发溶剂。产物未再 纯化即用于下一个步骤。产量：53mg中间体19(80％)。

c)中间体20的制备

添加含氰基亚胺基甲酸二苯基酯(65mg，0.27mmol)的DCM(15mL) 溶液至含中间体19(53mg，0.27mmol)的DCM(38mL)溶液中。于室温 下搅拌反应混合物1.5小时。蒸发溶剂。产物未再纯化即用于下一个步 骤。产量：120mg中间体20(定量)。

实例A10

中间体21与中间体22(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.14mL，2.68mmol)至含中间体1(0.98g，2.68mmol) 的2-丙醇(16mL)溶液中。于室温下搅拌反应混合物16小时。蒸发溶 剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至 97／3)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：270mg中间体21(32％) 与157mg中间体22(18％)。

实例A11

中间体23与中间体24(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.47mL，8.69mmol)至含中间体4(2.8g，8.69mmol)的 2-丙醇(50mL)溶液中。反应混合物于回流下加热6小时。蒸发溶剂。将 残余物悬浮于CH₃CN中，滤出，并于烘箱中干燥。产量：1.67g，包含 59％的中间体23与34％的中间体24。

实例A12

中间体25与中间体26(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.34mL，6.19mmol)至含中间体7(2.09g，6.19mmol) 的2-丙醇(35mL)溶液中。反应混合物于回流下加热6小时。蒸发溶剂。 残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至 95／5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。将残余物悬浮于DIPE中，滤 出，并于烘箱中干燥。产量：179mg中间体25(10％)与159mg中间体 26(9％)。

实例A13

中间体27与中间体28(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.55mL，10.17mmol)至含中间体8(3.42g，10.17mmol) 的2-丙醇(58mL)溶液中。反应混合物于回流下加热6小时。蒸发溶剂。 残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至 95／5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。将残余物悬浮于DIPE中，滤 出，并于烘箱中干燥。产量：510mg中间体27(17％)与720mg中间体 28(24％)。

实例A14

中间体29与中间体30(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.71mL，13.01mmol)至含中间体9(4g，13.01mmol)的 2-丙醇(75mL)溶液中。反应混合物于回流下加热16小时。再添加甲基 肼(0.35mL，6.50mmol)，并将反应混合物于回流下加热16小时。蒸发 溶剂。残余物自CH₃CN中结晶，滤出，并于烘箱中干燥。产量：2.9 g，包含中间体29与中间体30的混合物，其直接用于下一个反应步骤。

实例A15

中间体31与中间体32(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.081mL，1.5mmol)至含中间体13(500mg，1.5mmol) 的2-丙醇(8mL)溶液中。反应混合物于回流下加热6小时。蒸发溶剂。 产物未再纯化即用于下一个步骤。产量：510mg，包含56％的中间体31 与32％的中间体32。

实例A16

中间体33与中间体34(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.59mL，10.89mmol)至含中间体14(3.5g，10.89mmol) 的2-丙醇(62mL)溶液中。反应混合物于回流下加热16小时。再加甲基 肼(0.59mL，10.89mmol)，并将反应混合物于回流下加热16小时。蒸发 溶剂。残余物自CH₃CN中结晶，滤出，并于烘箱中干燥。产量：1.1g 中间体33(37％)。在此反应期间还形成了中间体33的区域异构体(中间 体34)，但未分离。

实例A17

中间体35与中间体36(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.28mL，5.2mmol)至含中间体17(1.75g，5.2mmol)的 2-丙醇(30mL)溶液中。反应混合物于回流下加热16小时。蒸发溶剂。 残余物自CH₃CN中结晶，滤出，并于烘箱中干燥。产量：361mg中间 体35(24％)。在此反应期间还形成了中间体35的区域异构体(中间体 36)，但未分离。

实例A18

中间体37与中间体38(区域异构体)的制备

添加甲基肼(0.019mL，0.36mmol)至含中间体20(120mg，0.36 mmol)的2-丙醇(2mL)溶液中。于室温下加热反应混合物16小时。蒸发 溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至 97／3)。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：25mg中间体 37(24％)。在此反应期间还形成了中间体37的区域异构体(中间体38)， 但未分离。

实例A19

中间体39的制备

添加4-氟苯甲酰氯(5g，31.53mmol)至含硫脲(2.52g，33.1mmol)的 丙酮(100mL)混合物中，并于室温下搅拌反应混合物1小时。然后添加 1-(4-甲氧基苯基)-哌嗪(5.76g，29.96mmol)，并于室温下搅拌反应混合 物1小时。将反应混合物倒至冰水中。滤出沉淀，并干燥。产量：5.68g 中间体39(48％)。

实例A20

中间体40的制备

添加K₂CO₃(0.74g，5.35mmol)至含中间体39(2g，5.36mmol)的 丙酮(20mL)混合物中。于室温下搅拌反应混合物30分钟。添加碘甲烷 (0.84g，5.89mmol)。于室温下搅拌反应混合物1小时。蒸发溶剂。加 水，并用DCM萃取混合物。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并在 真空中浓缩。产量：2.07g中间体40(定量)。

B.化合物的制备

实例B1

化合物1的制备

添加2-溴甲苯(0.076mL，0.63mmol)、Cs₂CO₃(618mg，1.9 mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063mmol)至 氮气氛下的含中间体21(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇(14mL)溶 液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混合物至室 温，加水，并将反应混合物用DCM萃取。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。将残余物用DIPE研磨，滤出，并干燥。产量：120mg化合物 1(47％)。

实例B2

化合物2的制备

添加2-溴-三氟甲基苯(0.086mL，0.63mmol)、Cs₂CO₃(618mg，1.9 mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063mmol)至 氮气氛下的含中间体21(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇(14mL)溶 液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混合物至室 温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥(MgSO₄)， 过滤，并在真空中浓缩。残余物经RP制备型HPLC纯化[RP Vydac  Denali C18-10μm，250g，5cm)；流动相：梯度(0.25％NH₄HCO₃水溶 液)／MeOH)]。收集产物部分，并在真空中浓缩。然后将残余物再经RP 制备型HPLC纯化[RP Vydac Denali C18-10μm，250g，5cm)；流动 相：梯度(0.15％甲酸水溶液，MeOH／CH₃CN]。收集产物部分，并在真 空中浓缩。产量：44mg化合物2(15％)。

实例B3

化合物3的制备

添加1-溴-3-氟-2-三氟甲基-苯(0.095mL，0.95mmol)、Cs₂CO₃(618 mg，1.9mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063 mmol)至氮气氛下的含中间体21(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇 (14mL)溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混 合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。将残余物悬浮于DIPE中，滤出。残余物再经RP制备型HPLC纯化 [RP Vydac Denali C18-10μm，250g，5cm)；流动相：梯度(0.25％ NH₄HCO₃水溶液／MeOH)]。收集产物部分，并在真空中浓缩。然后残余 物再经RP制备型HPLC纯化[RP Vydac Denali C18-10μm，250g， 5cm)；流动相：梯度(0.15％甲酸水溶液，MeOH／CH₃CN]。收集产物部 分，并在真空中浓缩。产量：30mg化合物3(10％)。

实例B4

化合物4的制备

添加1-溴-3-三氟甲氧基-苯(0.093mL，0.95mmol)、Cs₂CO₃(618 mg，1.9mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063 mmol)至氮气氛下的含中间体21(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇 (14mL)溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混 合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。将残余物悬浮于DIPE中，滤出。将残余物悬浮于2-丙醇中，并用6 N HCl的2-丙醇溶液处理。过滤收集所得沉淀物并干燥。产量：130mg 化合物4(41％)的HCl盐。

实例B5

化合物5的制备

添加1-溴-3-氟-5-三氟甲基-苯(230mg，0.95mmol)、Cs₂CO₃(618 mg，1.9mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063 mmol)至氮气氛下的含中间体21(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇 (14mL)溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混 合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。将残余物悬浮于DIPE中，并用6N HCl的2-丙醇溶液处理。过滤 收集所得沉淀物并干燥。产量：121mg化合物5(38％)的HCl盐 (.0.8HCl)。

实例B6

化合物6的制备

添加1-溴-4-氟-2-甲基-苯(0.12mL，0.95mmol)、Cs₂CO₃(618mg， 1.9mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063mmol) 至氮气氛下的含中间体21(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇(14mL) 溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混合物至室 温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥(MgSO₄)， 过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液： DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。将 残余物悬浮于DIPE中，并用6N HCl的2-丙醇溶液处理。过滤收集所 得沉淀物并干燥。产量：115mg化合物6(37％)的HCl盐 (.1.2HCl.1.5H₂O)。

实例B7

化合物7与化合物7a的制备

添加3-溴-4-氟-三氟甲基苯(0.39mL，2.73mmol)、Cs₂CO₃(1.78g， 5.47mmol)、X-Phos(211mg，0.36mmol)与Pd₂(dba)₃(167mg，0.18 mmol)至氮气氛下的含中间体23与中间体24的混合物(500mg，1.82 mmol)的2-甲基-2-丙醇(41mL)中。反应混合物于100℃下加热16小 时。然后冷却反应混合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将 合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管 柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部 分，并在真空中浓缩。产量：69mg化合物7(9％)与108mg化合物 7a(14％；化合物7的区域异构体)。

实例B8

化合物8的制备

添加3-溴-4-氟-三氟甲基苯(0.086mL，0.63mmol)、Cs₂CO₃(618 mg，1.9mmol)、X-Phos(73mg，0.13mmol)与Pd₂(dba)₃(58mg，0.063 mmol)至氮气氛下的含中间体25(200mg，0.63mmol)的2-甲基-2-丙醇 (14mL)溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混 合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。将残余物用DIPE研磨，滤出，并干燥。产量：79mg化合物 8(28％)。

实例B9

化合物9的制备

添加3-溴-4-氟-三氟甲基苯(0.22mL，1.56mmol)、Cs₂CO₃(1.02g， 3.12mmol)、X-Phos(120mg，0.21mmol)与Pd₂(dba)₃(95mg，0.1mmol) 至氮气氛下的含中间体27(300mg，1.04mmol)的2-甲基-2-丙醇(23mL) 溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混合物至室 温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥(MgSO₄)， 过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱液： DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓缩。将 残余物用DIPE研磨，滤出，并干燥。产量：120mg化合物9(25％)。

实例B10

化合物10与化合物10a的制备

添加3-溴-4-氟-三氟甲基苯(0.21mL，1.45mmol)、Cs₂CO₃(943mg， 2.89mmol)、X-Phos(92mg，0.19mmol)与Pd₂(dba)₃(88mg，0.096 mmol)至氮气氛下的含中间体29与中间体30的混合物(250mg，0.96 mmol)的2-甲基-2-丙醇(20mL)中。反应混合物于100℃下加热16小 时。然后冷却反应混合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将 合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管 柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部 分，并在真空中浓缩。残余物再经RP制备型HPLC纯化[RP Vydac  Denali C18-10μm，250g，5cm)；流动相：梯度(0.25％NH₄HCO₃水溶 液／CH₃CN)]。收集产物部分，并在真空中浓缩。残余物自DIPE中结 晶，滤出，并干燥。产量：112mg化合物10(28％)与80mg化合物 10a(20％；化合物10的区域异构体)。

实例B11

化合物11与化合物11a的制备

添加3-溴-4-氟-三氟甲基苯(0.38mL，2.67mmol)、Cs₂CO₃(1.74g， 5.34mmol)、X-Phos(207mg，0.036mmol)与Pd₂(dba)₃(164mg，0.18 mmol)至氮气氛下的含中间体31与中间体32的混合物(510mg，1.78 mmol)的2-甲基-2-丙醇(40mL)中。反应混合物于100℃下加热16小 时。然后冷却反应混合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将 合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管 柱层析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部 分，并在真空中浓缩。将两份残余物均悬浮于DIPE中，并用6N HCl的 2-丙醇溶液处理。过滤收集所得沉淀物。第一份不纯的化合物再经RP制 备型HPLC纯化[RP Vydac Denali C18-10μm，250g，5cm)；流动相： 梯度(0.25％NH₄HCO₃水溶液／CH₃CN)]。收集产物部分，并在真空中浓 缩。两份残余物均自DIPE中结晶，滤出，并干燥。产量：118mg化合 物11(13％)的HCl盐(.HCl.H₂O)与97mg化合物11a(12％；化合物11 的区域异构体)。

实例B12

化合物12的制备

添加3-溴-4-氟-三氟甲基苯(0.20mL，1.37mmol)、Cs₂CO₃(0.89g， 2.74mmol)、X-Phos(87mg，0.18mmol)与Pd₂(dba)₃(94mg，0.091 mmol)至氮气氛下的含中间体33(250mg，0.91mmol)的2-甲基-2-丙醇 (20mL)溶液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混 合物至室温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中浓缩。残余物经快速管柱层析法纯化(洗脱 液：DCM／MeOH，从100／0至95／5)。收集产物部分，并在真空中浓 缩。残余物用DIPE研磨，滤出，并干燥。产量：210mg化合物 12(53％)。

实例B13

化合物13的制备

添加1-溴-2-甲基-苯(0.016mL，0.13mmol)、Cs₂CO₃(0.084g，0.26 mmol)、X-Phos(10mg，0.017mmol)与Pd₂(dba)₃(8mg，0.0086mmol)至 氮气氛下的含中间体37(25mg，0.086mmol)的2-甲基-2-丙醇(2mL)溶 液中。反应混合物于100℃下加热16小时。然后冷却反应混合物至室 温，加水，并用DCM萃取反应混合物。将合并的有机层干燥(MgSO₄)， 过滤，并在真空中浓缩。残余物经RP制备型HPLC纯化[RP Vydac Denali C18-10μm，250g，5cm)；流动相：梯度(0.25％NH₄HCO₃水溶 液／CH₃CN)]。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：7mg化合物 13(21％)。

实例B14

化合物14的制备

添加CuI(150mg，0.79mmol)与N，N′-二甲基乙二胺(0.17mL，1.58 mmol)至含3-溴-4-氟-三氟甲基苯(768mg，3.16mmol)、中间体21(250 mg，0.79mmol)，及Cs₂CO₃(644mg，1.98mmol)的DMF(3mL)混合物 中。反应混合物于170℃下加热90分钟，进行两次。将反应混合物冷 却，添加EtOAc，并用1M NH₄OH水溶液、水与盐水洗涤混合物。将有 机层干燥(MgSO₄)，过滤，并在真空中蒸发溶剂。残余物经快速管柱层 析法纯化(洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至97／3)。收集产物部分，并 在真空中浓缩。残余物再经RP制备型HPLC纯化[RP Vydac Denali C18 -10μm，250g，5cm)；流动相：梯度(0.25％NH₄HCO₃水溶 液)／CH₃CN)]。收集产物部分，并在真空中浓缩。产量：75mg化合物 14(20％)。

实例B15

化合物15的制备

添加CuI(186mg，0.98mmol)与N，N′-二甲基乙二胺(0.17mL，1.58 mmol)至含3-溴-4-氟-三氟甲基苯(580mg，3.91mmol)、中间体35(282 mg，0.98mmol)、及Cs₂CO₃(796mg，2.44mmol)的DMF(3mL)混合物 中。反应混合物于170℃下加热90分钟。将反应混合物冷却，添加 EtOAc，并用1M NH₄OH水溶液、水与盐水洗涤混合物。将有机层干燥 (MgSO₄)，过滤，并在真空中蒸发溶剂。残余物经快速管柱层析法纯化 (洗脱液：DCM／MeOH，从100／0至98／2)。收集产物部分，并在真空中 浓缩。残余物自CH₃CN中结晶，滤出，并干燥。产量：92mg化合物 15(21％)。

实例B16

化合物16的制备

添加甲基肼(713mg，15.5mmol)至含中间体40(2g，5.16mmol)的 叔丁醇(50mL)溶液中。反应混合物于回流下加热2小时。产物自反应混 合物中结晶。反应混合物冷却至室温。滤出结晶，并用i-PrOH及DIPE 洗涤，并干燥。产量：663mg化合物16(35％)。

表1列出类似上述实例之一所制得的化合物。‘Pr.’意指用于合成该 化合物的实验方案的实例编号。‘Co.No.’意指化合物编号。‘cb’意指共 价键。Co.No.1-3，7-10与12-16是作为游离碱获得的。Co.No.4-6与 11是作为盐酸盐获得的(利用元素分析法测定)：Co.No.4(.HCl)；Co. No.5(.0.8HCl)；Co.No.6(.1.2HCl.1.5H₂O)；Co.No. 11(.HCl.H₂O)。

表1

分析部分

LCMS(液相层析法／质谱法)

通用方法A

LC测定法是采用Acquity UPLC(超高效液相层析法(Ultra  Performance Liquid Chromatography))(Waters(沃特斯公司))系统， 其包括二元泵、取样器、管柱加热器(设定55℃)、二极管阵列检测器 (DAD)与下列各方法中分别指定的管柱。自管柱流出后即分流至MS质 谱仪。MS检测器的结构包括电喷洒电离化源。采用间隔时间0.02秒， 在0.18秒内自100扫瞄至1000，取得质谱。毛细针头电压为3.5kV， 并且源温度保持在140℃。采用氮气作为雾化气体。采用Waters- Micromass MassLynx-Openlynx数据处理系统取得数据。

通用方法B

HPLC测定法是采用Alliance HT2790(Waters)系统进行，其包括附 加脱气机的二元泵、自动取样器、管柱烘箱(设定40℃，除非文中另有说 明)、二极管阵列检测器(DAD)与下列各方法中分别指定的管柱。自管柱 流出后即分流至MS质谱仪。MS检测器的结构包括电喷洒电离化源。采 用间隔时间0.1秒，在1秒内自100扫瞄至1000，取得质谱。毛细针头 电压为3kV，并且源温度保持在140℃。采用氮气作为雾化气体。采用 Waters-Micromass MassLynx-Openlynx数据处理系统取得数据。

LCMS方法1

除了通用方法A：再于桥连的乙基硅氧烷／硅石杂化体(BEH)C18管 柱(1.7μm，2.1x50mm；Waters Acquity)上进行反相UPLC(超效液相层 析法)，流速0.8ml／min。采用两种流动相(25mM乙酸铵的H₂O／乙腈 95／5溶液；流动相B：乙腈)，依梯度条件操作：于1.3分钟(min)内从 95％A与5％B至5％A与95％B，并且保持0.3min。所用的注射体积 为0.5μl。锥管电压为正电离化模式的30V与负电离化模式的30V。

LCMS方法2

除了通用方法A：再于桥连的乙基硅氧烷／硅石杂化体(BEH)C18管 柱(1.7μm，2.1x50mm；Waters Acquity)上进行反相UPLC，流速0.8 ml／min。采用两种流动相(流动相A：0.1％甲酸的H₂O／甲醇95／5溶液； 流动相B：甲醇)，依梯度条件操作：于1.3min内从95％A与5％B至 5％A与95％B，并且保持0.2min。所用的注射体积为0.5μl。锥管电 压为正电离化模式的10V与负电离化模式的20V。

LCMS方法3

除了通用方法B：再于Xterra MS C18管柱(3.5μm，4.6x100mm) 上进行反相HPLC，流速1.6ml／min。采用三种流动相(流动相A：95％ 25mM乙酸铵+5％乙腈；流动相B：乙腈；流动相C：甲醇)，依梯度 操作：于6.5min内从100％A至1％A、49％B与50％C，于1min内 至1％A与99％B，保持此类条件1min，并且使用100％A再平衡1.5 min。所用的注射体积为10μl。锥管电压为正电离化模式的10V与负电 离化模式的20V。

LCMS方法4

除了通用方法A：再于桥连的乙基硅氧烷／硅石杂化体(BEH)C18管 柱(1.7μm，2.1x50mm；Waters Acquity)上进行反相UPLC，流速0.8 ml／min。采用两种流动相(流动相A：10mM乙酸铵的H₂O／乙腈95／5溶 液；流动相B：乙腈)，依梯度条件操作：于1.3分钟内自95％A与5％ B至5％A与95％B，并且保持0.2min。所用的注射体积为0.5μl。锥 管电压为正电离化模式的10V与负电离化模式的20V。

熔点

一些化合物是采用DSC823e(Mettler-Toledo)测定熔点(m.p.)。采用 30℃／分钟的温度梯度测定熔点。最高温400℃。数值为峰值。

分析测定结果示于表2a。

表2a：保留时间(R_t)，以分钟计，[M+H]⁺峰值(质子化分子)，LCMS方 法与m.p.(熔点，℃)。(n.d.表示未测定)

NMR

许多种化合物的1H NMR光谱是于Bruker DPX-360或Bruker  DPX-400质谱仪上，采用标准脉冲序列，分别在360MHz与400MHz 下操作，使用氯仿-d(氘化氯仿，CDCl₃)或DMSO-d₆(氘化DMSO，二甲 基-d6亚砜)作为溶剂记录的。化学位移(δ)是以相对于作为内标准物的四 甲基硅烷(TMS)的每百万分之一(ppm)记录的。

表2b：¹H NMR结果

药理学

A)用于调节γ-分泌酶活性的本发明化合物的筛选法

采用携带有APP695-野生型的SKNBE2细胞进行筛选，将其生长 于Invitrogen(英杰公司)(目录编号10371-029)提供且包含5％血清 ／Fe，补充有1％非必需氨基酸、1-谷氨酸2mM、Hepes15mM、青霉素 50U／ml(单位／ml)、链霉素50μg／ml的杜氏改良伊格氏培养基 (Dulbecco′s Modified Eagle′s Medium)／营养素混合物F- 12(DMEM／NUT-mix F-12)(HAM)中。使细胞生长至几近长满 (confluency)。

该筛选法是修改Citron等人(1997)Nature Medicine(《自然医 学》)3：67中描述的分析法进行。简言之，于384孔板中，将细胞 (10⁴个细胞／ml)涂布于含有不同试验浓度的试验化合物的Ultraculture培 养基(Lonza，BE12-725F)(补充有1％谷氨酸(Invitrogen，25030-024)、 1％非必需氨基酸(NEAA)、青霉素50U／ml、链霉素50μg／ml)中。将细 胞／化合物混合物于37℃与5％CO₂下培养过夜。次日进行两次夹心式免 疫分析法，分析培养基的Aβ42与总Aβ。

采用Aphalisa技术(Perkin Elmer(珀金埃尔默公司))定量细胞上 清液中的总Aβ与Aβ42浓度。Alphalisa为一种利用生物素基化抗体附 接在涂覆抗生物链菌素的供体珠粒上，该抗体再与受体珠粒偶联的夹心 式分析法。在抗原的存在下，珠粒得以紧邻。激化供体珠粒可以激发单 态氧分子的释放，在受体珠粒中启动一连串能量转移，造成光发射。为 了定量细胞上清液中的Aβ42，由针对Aβ42的C-末端的单株抗体 (JRF／cAβ42／26)与受体珠粒偶联，并利用针对Aβ的N-末端的生物素基 化抗体(JRF／AβN／25)与该供体珠粒反应。为了定量细胞上清液中的总Aβ 含量，使针对Aβ的N-末端的单株抗体(JRF／AβN／25)与受体珠粒偶联并 利用针对Aβ的中段区的生物素基化抗体(生物素基化4G8)与该供体珠粒 反应。

为了取得表3所示的数值，由数据相对于没有试验化合物下所测定 的淀粉样蛋白β42最高量计算百分比。采用非线性回归分析法分析S型 剂量效应曲线，由对照组百分比相对于化合物的对数浓度作图。采用四 参数公式确定IC₅₀。

表3：

B)活体内效力的证实

可以采用本发明降低Aβ42的药剂治疗哺乳动物(如：人类)的AD或 可替代地于动物模式(如，但不限于：小鼠、大鼠或天竺鼠)中证实其效 力。该哺乳动物不可经诊断患有AD或不可在遗传上出现AD倾向，但 可经过转基因使其以类似于人类AD患者中所见的方式过度产生且最后 沉积Aβ。

降低Aβ42的药剂能以任何标准形式采用任何标准方法给予。例如 (但不限于)：降低Aβ42的药剂可处于液体、片剂或胶囊等口服或注射采 用的形式。降低Aβ42的药剂能以足以显著降低血液、血浆、血清、脑脊 髓液(CSF)或脑中Aβ42的水平的任何剂量给予。

使用非转基因啮齿类(例如：小鼠或大鼠)测定急性给予的降低Aβ42 的药剂是否可在活体内降低Aβ42浓度。检查接受降低Aβ42的药剂治疗 的动物，并且与未处理组或媒介物处理组比较，且采用标准技术，例 如：采用ELISA定量可溶性Aβ42与总Aβ的脑水平。治疗期为数小时至 数天不等，并且一旦可以确立效力开始的时间过程，即依据Aβ42下降结 果调整治疗期。

所示出的在活体内测定Aβ42下降程度的典型实验方案仅为许多种 可用于优化可检测的Aβ水平的变体之一。例如：降低Aβ42的化合物可 于20％(β-环糊精的磺丁基醚)的水溶液或20％羟丙基β-环糊 精中配制。该降低Aβ42的药剂以单一口服剂量或通过任何可接受的给予 途径给予至禁食一夜的动物。4小时后，杀死动物，并且分析Aβ42浓 度。

采用断头法及放血法收集血液至经过EDTA处理的收集管中。血液 于1900g与4℃下离心10分钟，，并回收血浆且急速冷冻以供稍后分 析。自头颅与后脑取出脑部。取出小脑，并且分开左边与右边半脑。左 半脑保存在-18℃下，供定量分析试验化合物水平。右半脑经过磷酸盐缓 冲盐水(PBS)洗涤，并且立即于干冰上冷冻并存放在-80℃下，直到需均 质化以供生化分析为止。

取非转基因动物的小鼠脑部再悬浮于包含蛋白酶抑制剂(Roche- 11873580001或04693159001)的0.4％DEA(二乙胺)／50mM NaCl中， 每克组织使用8倍体积，例如：0.158g脑中添加1.264ml0.4％DEA。 所有样本均于FastPrep-24系统(MP Biomedicals)中，使用溶胞介质 D(MPBio#6913-100)，于6m／s下均质化20秒。均质液于221.300x g 下离心50min。然后将所得高速上清液移至新鲜离心管中。取九份上清 液使用1份0.5M Tris-HCl pH6.8中和，并用于定量总Aβ与Aβ42。 为了定量脑部均质液的可溶性部分中的总Aβ与Aβ42的量，采用酶联免 疫吸附分析法(Enzyme-Linked-Immunosorbent-Assays)。简言之，在1.5 ml Eppendorf离心管中的Ultraculture内制备标准物(合成的Aβ1-40与 Aβ1-42的稀释液，Bachem(巴亨公司))，最终浓度范围为从10000至 0.3pg／ml。将样本与标准物使用N-末端标记HRPO的抗体共同培养，以 供检测Aβ42，并且使用生物素基化的中段结构域抗体4G8来检测总 Aβ。然后添加50μl共轭物／样本或共轭物／标准物混合物至涂布抗体的分 析盘中(可选择性识别Aβ42的C-末端的捕捉抗体为抗体 JRF／cAβ42／26，供检测Aβ42，并且可选择性识别Aβ的N-末端的捕捉 抗体为抗体JRF／rAβ／2，供检测总Aβ)。让分析盘于4℃下孵育过夜， 以便形成抗体-淀粉样蛋白复合物。继孵育及洗涤步骤之后，依据制造商 (Pierce Corp.(皮尔斯公司)，Rockford，Il(罗克福德，伊利诺伊州))的 指示添加Quanta Blu产荧光的过氧化酶底物，以结束定量Aβ42的 ELISA。10至15min后读取数值(激发光320nm／发射光420nm)。 检测总Aβ时，添加抗生物链菌素-过氧化酶-共轭物，60分钟后，根据制 造商的指示(Pierce Corp.，Rockford，Il)添加Quanta Blu产荧光性过氧化 酶底物。10至15分钟后读取数值(激发光320／发射光420)。

此模式中，应比未处理组动物至少降低20％Aβ42才有利。

其结果示于表4(口服剂量30mg／kg)(作为对照组的未处理动物(Ctrl)的数 值设为100)：

组合物实例

贯穿这些实例，所采用的“活性成分”(a.i.)涉及式(I)化合物，包括 其任何立体化学异构体、其药学上可接受的盐或其溶剂化物；具体地， 涉及所列举的化合物中的任一种。

本发明配制品的典型配方实例如下：

1.片剂

活性成分5至50mg

磷酸二钙20mg

乳糖30mg

滑石10mg

硬脂酸镁5mg

马铃薯淀粉加至200mg

2.悬浮液

制备供经口给予的水性悬浮液，使其每毫升包含1至5mg活性成分、50 mg羧甲基纤维素钠、1mg苯甲酸钠、500mg山梨糖醇与加至1ml的 水。

3.注射剂

非经肠式组合物的制备为取1.5％(重量／体积)活性成分于0.9％NaCl溶液 或10％体积比丙二醇的水溶液中搅拌。

4.软膏

此实例中，活性成分可由等量的、根据本发明的化合物中的任一种 来替代，具体地，由等量的、列举的化合物中的任一种替代。

合理的变化不应被视为偏离本发明的范围。明显地是，本领域普通 技术人员应能以多种方式对在此描述的发明进行改变。