一种同时分析食品中多种芳香类有害物质的方法

摘要

本发明的目的是提供一种同时分析食品中多种芳香类有害物质的方法，即一种同时提取制备食品中PAHs、酚类化合物和芳香胺的方法。本发明的方法只需一次取样，减少了样品消耗量，缩短了检验时间，节约了试剂的使用量，同时减少二次污染，延长了HPLC色谱柱的使用寿命；采用有机溶剂超声萃取的方法提取目标检测物，大大缩短了目标检测物提取时间；简化了在食品中PAHs样品液提取制备的步骤， PAHs检测过程使用有机溶剂液液萃取-反萃取脱脂，大大缩减了脱脂时间，简化了实验操作。

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种同时分析食品中多 种芳香类有害物质的方法，即一种同时提取、制备和检测食品中多环 芳烃、酚类化合物和芳香胺三类样品的方法。

背景技术

食品在高温加工过程中发生极为复杂的化学、物理变化，成分极为复 杂。在这些化合物中存在对人体有害和/或有毒的组分，其中的芳香类 有害物质主要有多环芳烃、酚类化合物和芳香胺三类。多环芳烃、酚 类化合物、芳香胺三类物质具有不同的化学性质，其提取制备检测样 品的方法也各不相同。

多环芳烃（polycyclic aromatichydrocarbons,以下简称PAHs）是指 两个以上苯环以稠环形式相连的化合物，是有机化合物不完全燃烧和 地球化学过程中产生的一类致癌物质。目前食品中PAHs检测样品的提 取制备方法主要是有机溶剂萃取后皂化脱脂，而后进行检测。其中GB /T 24893-2010采用的方法为有机溶剂萃取后，使用C₁₈固相萃取柱进 行富集纯化，最后采用高效液相色谱分析。

酚类化合物是指芳香烃中苯环上的氢原子被羟基取代所生成的化合物 ，是芳烃的含羟基衍生物。目前食品中酚类化合物检测样品的制备方 法主要是有机溶剂萃取或蒸馏萃取，最后采用光谱分析测定法或色谱 分析测定法等方法进行检测。其中蒸馏萃取存在耗时长，制备工作量 大的缺点。

芳香胺是指胺基上的N与苯的同系物的苯环直接相连的胺类物质，能通 过呼吸道、胃肠道和皮肤进入人体，导致人致病甚至致癌。目前，芳 香胺在食品行业中，仅在包装材料上有部分研究，其检测样品的提取 制备主要是使用有机溶剂萃取，在未经固相萃取柱富集纯化的情况下 ，检测干扰杂质较多。在食品中的提取制备及检测尚未有太多相关研 究。

综上，目前食品中多环芳烃、酚类化合物和芳香胺的提取检测存在的 问题有：

1）三类物质的检测需独立提取后再分别检测，需要多次取样，样品消 耗量大，制备样品的工作量大；

2）PAHs独立提取检测的方法步骤繁琐，工作量较大；PAHs检测过程的 脱脂多为皂化脱脂，操作复杂，时间较长；

因此，开发一种同时分析食品中PAHs、酚类化合物和芳香胺的方法具 有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时分析食品中多种芳香类有害物质的方法 ，即一 种同时提取制备食品中PAHs、酚类化合物和芳香胺的方法，以解决现 有技术方法繁琐，样品消耗量大等问题。

本发明的方法，其步骤如下：

1）PAHs样品液的提取制备：待检测样品剪碎后放入锥形瓶，加入内标 物质，使用有机溶剂A超声萃取10~60min，提取需检测的物质，静止， 过滤膜， 取1~5ml萃取液上样到活化后的正相固相萃取柱A，收集流 出液；并用有机溶剂A淋洗固相萃取柱A，收集淋洗液，将流出液和淋 洗液混合后，加入DMSO进行萃取，取下层的液体加入硫酸钠溶液，放 置数分钟至试管冷却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取 ，合并萃取后的溶液即为PAHs样品液；

2）PAHs检测：气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）来检测步骤1)中得到 的PAHs样品液；

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的固相萃取柱A 用水二次洗脱，收集洗脱液； 

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到活化后的反 相固相萃取B柱进行富集纯化；采用水溶液进行洗脱，收集得到芳香胺 样品液；

5）芳香胺的检测：采用气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测步骤4) 中得到的芳香胺样品液；

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇进 行洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）酚类化合物的检测：用高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测 步骤6得到的酚类化合物样品液。

所述步骤1）中有机溶剂A优选为环己烷；超声萃取时间优选范围为20 ~ 40min；正相固相萃取柱A优选为Si相固相萃取柱；硫酸钠溶液浓度 为0.01~0.03g/ml；

所述步骤3）中洗脱用水优选为超纯水； 

所述步骤4）中反相固相萃取柱B优选为C₁₈固相萃取柱

所述步骤6）中有机溶剂B优选为甲醇。

本发明的方法只需一次取样，减少了样品消耗量，缩短了检验时间， 节约了试剂的使用量，同时减少二次污染，延长了HPLC色谱柱的使用 寿命；采用有机溶剂超声萃取的方法提取目标检测物，大大缩短了目 标检测物提取时间；简化了在食品中PAHs样品液提取制备的步骤，  PAHs检测过程使用有机溶剂液液萃取-反萃取脱脂，大大缩减了脱脂时 间，简化了实验操作。

具体实施方式

本发明提供一种同时分析食品中PAHs、酚类化合物和芳香胺的方法， 具体包括如下的步骤：

1）PAHs样品液的提取制备：向锥形瓶中加入1ml多环芳烃标准溶液（ 其中苯并[a]芘浓度为5ng/ml，萘浓度为3ng/ml，二氢苊1.8ng/nl，蒽 1ng/ml），1ml酚类化合物标准溶液（其中苯酚0.1ug/ml,二甲基苯酚 0.3ug/ml），1ml芳香胺标准溶液(其中1-氨基萘浓度为15ng /m，2- 氨基萘浓度为8ng /ml，3-氨基联苯浓度为3ng /ml，4-氨基联苯浓 度为2ng /ml)；1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为1 ng/ml，氘代苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代- 4-氨基联苯浓度为0.4 μg/ml；)，26ml环己烷，水浴中超声萃取20 min，静置5min，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后 的Si相固相萃取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋 洗固相萃取柱，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试 管，加入DMSO进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向 试管内加入DMSO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并 两次萃取用吸管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数 分钟至试管冷却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合 并萃取后的溶液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时60 min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液的回收率为87.5%；标准曲线R²为 0.9994，RSD=2.10%；

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，回收率为82.6%；标准曲线R²为0.9993 ，RSD=2.1 5%；

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物含量，回收率为88.3%；标准曲线R²为0.9997，RSD =2.23%；检测条件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为 272nm，发射波长为310nm， 流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和水的混合液， 三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量为10un，以A、 B为洗脱剂进行洗脱（体积浓度A相40%，B相60%）。

该检测方法对样品进行一次提取，多成分检测。超声萃取时间（20mi n~1h）仅为传统皂化时间（2h~5h）的1/4左右；且同时检测了3类化合 物的多种物质，样品消耗量成倍降低（3类化合物分离简单快速，每步 10min以内可以完成），单种化合物的平均检测时间进一步降低；也节 约了固相萃取柱及萃取液（如环己烷）的用量；减少了有机试剂使用 量；通过固相萃取柱对样品进行净化，有效延长了HPLC色谱柱的使用 寿命。

下面对本发明方法的实际应用效果进行描述。

实施例1

1）PAHs样品液的提取制备：将15g烤肉样品剪碎后放入锥形瓶中，1m l内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为1ng/ml，氘代苊浓度 为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代-4-氨基联苯浓度为0 .4 μg/ml；)，29ml环己烷，水浴中超声萃取20min，静置5min，取 10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的Si相固相萃取柱富 集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集 淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管，加入DMSO进行液 液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试管内加入DMSO进行 液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两次萃取用吸管取出 的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分钟至试管冷却；使 用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并萃取后的溶液即为 PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时40min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得烤肉中PA Hs含量。其中苯并[a]芘为8.5ug/kg，RSD=3.95%；二苯并[a，h]蒽为 25.3ug/kg，RSD=4.93%苯并[g,h,i]芘为16.7ug/kg，RSD=3.36%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得烤肉中芳香胺含量。其中1-氨基萘为2.5u g/kg，RSD=5.43%，3-氨基联苯为0.5ug/kg，RSD=3.25%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物。计算后得烤肉中酚类化合物含量。其中苯酚为0. 63ug/g，RSD=1.95%；邻苯二酚为0.31ug/g， RSD=3.54%；对苯二酚 为0.45ug/g，RSD=4.25%；对甲酚为0.14ug/g，RSD=5.25%。检测条件 为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为272nm，发射波长为 310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和水的 混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量为10 un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度A相40%，B相60%）。

实施例2

1）PAHs样品液的提取制备：将15g烟熏鱼样品剪碎后放入锥形瓶中， 加入1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为1ng/ml，氘代 苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代-4-氨基联苯浓 度为0.4 μg/ml；)，29ml环己烷，水浴中超声萃取20min，静置5mi n，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的Si相固相萃 取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗固相萃取柱 ，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管，加入DMSO 进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试管内加入DM SO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两次萃取用吸 管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分钟至试管冷 却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并萃取后的溶 液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时80min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得烟熏鱼中 PAHs含量。其中苯并[a]芘为6.5ug/kg，RSD=3.63%；二苯并[a，h]蒽 为23.2ug/kg，RSD=4.64%苯并[g,h,i]芘为15.3ug/kg，RSD=3.24%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得烟熏鱼中芳香胺含量。其中1-氨基萘为1. 9ug/kg， RSD=5.64%，3-氨基联苯为0.4ug/kg，RSD=3.33%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物。计算后得烟熏鱼中酚类化合物含量。其中苯酚为 0.87ug/g，RSD=1.75%；邻苯二酚为0.42ug/g， RSD=3.73%；对苯二 酚为0.47ug/g，RSD=4.46%；对甲酚为0.21ug/g，RSD=5.64%。检测条 件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为272nm，发射波长 为310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和水 的混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量为 10un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度A相40%，B相60%）。

实施例3

1）PAHs样品液的提取制备：将15g油煎蛋样品剪碎后放入锥形瓶中， 加入29ml环己烷，1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为 1ng/ml，氘代苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代 -4-氨基联苯浓度为0.4 μg/ml；)，水浴中超声萃取20min，静置5m in，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的Si相固相萃 取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗固相萃取柱 ，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管，加入DMSO 进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试管内加入DM SO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两次萃取用吸 管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分钟至试管冷 却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并萃取后的溶 液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时60min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得油煎蛋中 PAHs含量。其中苯并[a]芘为7.6ug/kg，RSD=4.12%；二苯并[a，h]蒽 为19.8ug/kg，RSD=5.67%苯并[g,h,i]芘为6.98ug/kg，RSD=3.87%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳 香胺样品液，计算后得油煎蛋中芳香胺含量。其中1-氨基萘为3.1ug/ kg，RSD=4.34%，3-氨基联苯为0.5ug/kg，RSD=4.32%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物含量，检测酚类化合物。计算后得油煎蛋中酚类化 合物含量。其中苯酚为0.45ug/g，RSD=1.97%；邻苯二酚为0.24ug/g，  RSD=3.69%；对苯二酚为0.31ug/g，RSD=4.78%；对甲酚为0.19ug/g ，RSD=5.44%。检测条件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波 长为272nm，发射波长为310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动 相B为醋酸、乙腈和水的混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速 为1ml/min，进样量为10un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度 A相40%，B相60%）。

实施例4

1）PAHs样品液的提取制备：将15g油炸鸡翅（无骨）样品剪碎后放入 锥形瓶中，加入29ml环己烷，1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘 代屈浓度为1ng/ml，氘代苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μ g/ml和氘代-4-氨基联苯浓度为0.4 μg/ml；，水浴中超声萃取20mi n，静置5min，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的 Si相固相萃取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗 固相萃取柱，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管 ，加入DMSO进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试 管内加入DMSO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两 次萃取用吸管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分 钟至试管冷却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并 萃取后的溶液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时60mi n；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得油炸鸡翅 中PAHs含量。其中苯并[a]芘为10.2ug/kg，RSD=3.12%；二苯并[a，h ]蒽为23.6ug/kg，RSD=5.77%苯并[g,h,i]芘为7.65ug/kg，RSD=3.99% 。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得油炸鸡翅中芳香胺含量。其中1-氨基萘为 3.4ug/kg，RSD=4.23%，3-氨基联苯为0.6ug/kg，RSD=4.54%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物。计算后得油炸鸡翅中酚类化合物含量。其中苯酚 为0.63ug/g，RSD=1.86%；邻苯二酚为0.34ug/g， RSD=3.66%；对苯 二酚为0.37ug/g，RSD=4.88%；对甲酚为0.25ug/g，RSD=3.55%。检测 条件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为272nm，发射波 长为310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和 水的混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量 为10un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度A相40%，B相60%） 。

实施例5

1）PAHs样品液的提取制备：将18g烤肉样品剪碎后放入锥形瓶中，加 入1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为1ng/ml，氘代苊 浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代-4-氨基联苯浓度 为0.4 μg/ml；29ml环己烷，水浴中超声萃取40min，静置5min，取 10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的Si相固相萃取柱富 集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗固相萃取柱，收集 淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管，加入DMSO进行液 液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试管内加入DMSO进行 液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两次萃取用吸管取出 的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分钟至试管冷却；使 用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并萃取后的溶液即为 PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时40min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得烤肉中PA Hs含量。其中苯并[a]芘为8.2ug/kg，RSD=4.12%；二苯并[a，h]蒽为 23.3ug/kg，RSD=4.87%苯并[g,h,i]芘为19.3ug/kg，RSD=3.56%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富 集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得烤肉中芳香胺含量。其中1-氨基萘为3.4u g/kg，RSD=3.64%，3-氨基联苯为0.2ug/kg，RSD=3.25%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物。计算后得烤肉中酚类化合物含量。其中苯酚为0. 54ug/g，RSD=2.48%；邻苯二酚为0.25ug/g， RSD=4.65%；对苯二酚 为0.39ug/g，RSD=5.27%；对甲酚为0.11ug/g，RSD=6.28%。检测条件 为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为272nm，发射波长为 310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和水的 混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量为10 un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度A相40%，B相60%）。

实施例6

1）PAHs样品液的提取制备：将26g烟熏鱼样品剪碎后放入锥形瓶中， 加入1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为1ng/ml，氘代 苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代-4-氨基联苯浓 度为0.4 μg/ml；)，29ml环己烷，水浴中超声萃取20min，静置5mi n，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的Si相固相萃 取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗固相萃取柱 ，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管，加入DMSO 进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试管内加入DM SO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两次萃取用吸 管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分钟至试管冷 却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并萃取后的溶 液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时80min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得烟熏鱼中 PAHs含量。其中苯并[a]芘为7.2ug/kg，RSD=3.24%；二苯并[a，h]蒽 为25.7ug/kg，RSD=3.92%苯并[g,h,i]芘为17.5ug/kg，RSD=2.99%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得烟熏鱼中芳香胺含量。其中1-氨基萘为1. 8ug/kg，RSD=5.25%，3-氨基联苯为0.5ug/kg，RSD=3.56%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物。计算后得烟熏鱼中酚类化合物含量。其中苯酚为 0.78ug/g，RSD=1.65%；邻苯二酚为0.39ug/g， RSD=3.55%；对苯二 酚为0.39ug/g，RSD=4.68%；对甲酚为0.37ug/g，RSD=5.78%。检测条 件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为272nm，发射波长 为310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和水 的混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量为 10un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度A相40%，B相60%）。

实施例7

1）PAHs样品液的提取制备：将15g油煎蛋样品剪碎后放入锥形瓶中， 加入29ml环己烷，1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘代屈浓度为 1ng/ml，氘代苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μg/ml和氘代 -4-氨基联苯浓度为0.4 μg/ml；)，水浴中超声萃取20min，静置5m in，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的Si相固相萃 取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗固相萃取柱 ，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管，加入DMSO 进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试管内加入DM SO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两次萃取用吸 管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分钟至试管冷 却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并萃取后的溶 液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时60min；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得油煎蛋中 PAHs含量。其中苯并[a]芘为8.3ug/kg，RSD=4.05；二苯并[a，h]蒽为 20.4ug/kg，RSD=5.88%苯并[g,h,i]芘为7.32ug/kg，RSD=3.59%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用 5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得油煎蛋中芳香胺含量。其中1-氨基萘为3. 8ug/kg，RSD=4.84%，3-氨基联苯为0.4ug/kg，RSD=4.52%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物含量，检测酚类化合物。计算后得油煎蛋中酚类化 合物含量。其中苯酚为0.33ug/g，RSD=2.78%；邻苯二酚为0.21ug/g，  RSD=3.94%；对苯二酚为0.28ug/g，RSD=4.86%；对甲酚为0.15ug/g ，RSD=5.22%。检测条件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波 长为272nm，发射波长为310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动 相B为醋酸、乙腈和水的混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速 为1ml/min，进样量为10un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度 A相40%，B相60%）。

实施例8

1）PAHs样品液的提取制备：将15g油炸鸡翅（无骨）样品剪碎后放入 锥形瓶中，加入29ml环己烷，1ml内标(氘代苯并芘浓度为3ng/ml，氘 代屈浓度为1ng/ml，氘代苊浓度为2ng/ml，氘代-1-氨基萘浓度为2μ g/ml和氘代-4-氨基联苯浓度为0.4 μg/ml；)，水浴中超声萃取20m in，静置5min，取10ml萃取液过滤膜后，取3ml萃取液上样到活化后的 Si相固相萃取柱富集纯化，收集流出液①；使用1ml环己烷萃取液淋洗 固相萃取柱，收集淋洗液②；将流出液①和淋洗液②合并后装入试管 ，加入DMSO进行液液萃取，而后用吸管取出下层溶液待用，继续向试 管内加入DMSO进行液液萃取，同样用吸管取出下层溶液待用；合并两 次萃取用吸管取出的下层溶液于试管中，加入硫酸钠溶液，放置数分 钟至试管冷却；使用环己烷分两次对冷却后的溶液进行反萃取，合并 萃取后的溶液即为PAHs样品液；整个PAHs样品液的提取制备历时60mi n；

2）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测PAHs：按GB/T21130-2007的 方法检测步骤1)中得到的PAHs样品液各物质浓度，计算后得油炸鸡翅 中PAHs含量。其中苯并[a]芘为11.6ug/kg，RSD=3.53%；二苯并[a，h ]蒽为26.2ug/kg，RSD=5.46%苯并[g,h,i]芘为7.8ug/kg，RSD=3.68%。

3）酚类化合物和芳香胺样品液的提取制备：将淋洗后的Si相固相萃取 柱用5ml超纯水洗脱，收集洗脱液；

4）芳香胺样品液的提取制备：将3）中所得洗脱液上样到C₁₈固相萃取 柱富集纯化；采用水溶液进行C₁₈柱洗脱，收集得到芳香胺样品液；

5）气相色谱质谱联用（GC/MS-SIM）检测芳香胺：检测步骤4)中得到 的芳香胺样品液，计算后得油炸鸡翅中芳香胺含量。其中1-氨基萘为 3.7ug/kg，RSD=4.44%，3-氨基联苯为0.8ug/kg，RSD=4.93%。

6）酚类化合物样品液的提取制备：将洗脱后的C₁₈固相萃取柱用甲醇二 次洗脱，将得到的有机洗脱液作为酚类化合物样品液；

7）高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL）检测酚类化合物：将步骤6 ）得到的酚类化合物样品液进行高效液相色谱-荧光检测器（HPLC-FL ）检测酚类化合物。计算后得油炸鸡翅中酚类化合物含量。其中苯酚 为0.52ug/g，RSD=1.97%；邻苯二酚为0.36ug/g， RSD=3.77%；对苯 二酚为0.35ug/g，RSD=5.03%；对甲酚为0.23ug/g，RSD=3.28%。检测 条件为：LUNAC₁₈色谱柱，柱温为30℃，荧光激发波长为272nm，发射波 长为310nm，流动相A为1%（v/v）醋酸溶液，流动相B为醋酸、乙腈和 水的混合液，三者体积比为1:30:69，流动相流速为1ml/min，进样量 为10un，以A、B为洗脱剂进行等度洗脱（体积浓度A相40%，B相60%） 。

上述的结果表明本发明的方法可以一次性的来检测食品中PAHs、酚类 化合物和芳香胺的残留量。