微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒

摘要

本发明公开了一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有检测卡，所述检测卡包括壳体和封装于所述壳体内的试剂条，所述试剂条包括底板，所述底板上依次设有首尾相接的吸水滤纸、硝酸纤维素膜和样品垫，所述样品垫由上之下依次包括保护垫和胶体金层。本发明采血量微小、试剂质量稳定，仅需30μL全血即可进行检测，并且减少了许多繁琐的程序，使用全血即可进行检测，无需对血液进行血清和血浆分离处理即可进行检测，其推广应用前景十分广阔。

说明书

技术领域

本发明涉及生物学检测技术领域，具体为一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒。

背景技术

肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia，简称MP)是急性呼吸道感染的一种常见病原微生物，是引起小儿下呼吸道感染的重要病原之一。儿童时期感染肺炎支原体，首先引起急性呼吸道感染，并可在呼吸道感染的基础上并发肺外多系统器官的疾病，已引起广泛关注。近年来，婴幼儿支原体肺炎发病率在逐年增加。据统计，支原体肺炎占婴幼儿肺炎的比率也在不断上升，由2006年的10％～20％升至33.16％，在我国社区获得性肺炎中占据着重要地位。

目前常用的诊断方法有代谢抑制试验、补体结合试验和酶联免疫法等，代谢抑制试验、补体结合试验和酶联免疫法操作繁琐，需要一些大型的仪器设备，需专门人员操作实验，使用不方便。

随着胶体金技术的发展，肺炎支原体抗体检测试剂具有快捷方便、安全、结果准确的特点。但是，现有技术胶体金法检测肺炎支原体抗体，一方面检测样本往往需要量多，如国内专利《一种卡式肺炎支原体抗体检测试剂盒》（专利号：ZL 200720021684.9）血清用量为150μL；国内专利《一种肺炎支原体抗体试纸条》（专利号：ZL 200720021685.3）血清用量为80μL，对于婴幼儿来说，只能指尖取血，而指尖取血量最多不超过40μL，但是婴幼儿较成人来说，更易受到肺炎支原体的感染；另一方面，检测人员还需要对血样进行血清和血浆分离处理才能进行检测，这使得检测相对繁琐。因此，开发出一种可以克服胶体金诊断试剂样本量多、采血量较大等缺点的试剂盒是十分必要的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒，以解决胶体金法诊断肺炎支原体时使用试剂样本量多、采血量较大等问题。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

包括盒体，所述盒体内设有检测卡，所述检测卡包括壳体和封装于所述壳体内的试剂条，所述试剂条包括底板，所述底板上依次设有首尾相接的吸水滤纸、硝酸纤维素膜和样品垫，所述样品垫由上之下依次包括保护垫和胶体金层：

所述硝酸纤维素膜上设有分别包被有MP蛋白的检测线和包被有抗鼠IgG抗体的参照线，所述检测线采用MP蛋白浓度为0.8～1.0mg/mL的包被液进行包被，所述参照线采用抗鼠IgG抗体浓度为1.0～1.5mg/mL的包被液进行包被；

所述胶体金层上的胶体金颗粒粒径为27纳米～30纳米；

所述盒体内还配有样品稀释液。

优选的，在所述样品垫上、所述保护垫和胶体金层之间还设有渗滤层。

更进一步的，所述渗滤层为经表面活性剂浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。

作为一种优选的方式，所述渗滤层为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。

优选的，所述胶体金颗粒采用如下方法制得，先将1wt%氯金酸水溶液加热至沸腾，再按0.7～0.9%的体积比滴加加入1wt%柠檬酸三钠溶液，混匀，继续沸煮，待胶体金溶液颜色由蓝经灰变紫后，停止加热并冷却。

优选的，所所述MP蛋白为基因重组MP蛋白。

优选的，所述抗鼠IgG抗体为羊抗鼠IgG抗体。

优选的，所述样品稀释液为20mM PBS缓冲液。

采用了上述技术方案后，本发明的有益效果是：

1、采血量微小，尤其适合婴幼儿的MP检测，本发明仅需30μL全血即可进行检测，可采取指尖取血，彻底解决了婴幼儿取血困难的问题，推广应用前景广阔；

2、试剂质量稳定，本发明由于采取了增大胶体金颗粒和提高检测线包被浓度的措施，将胶体金颗粒粒径由18纳米～20纳米增加至27纳米～30纳米，MP蛋白包被液浓度由0.4～0.5mg/mL增加至0.8～1.0mg/mL，以增加蛋白的标记量、减少血样用量，但是，这会导致结果出现假阳性，所以本发明同时配备全血稀释液，以消除假阳性干扰，确保了试剂的准确性；

3、本发明检测的是MP-IgM抗体，MP-IgM是感染肺炎支原体早期出现的抗体，而MP-IgG是晚于MP-IgM出现的抗体且持续时间相对较长，IgM抗体仅与急性感染有关，一旦检测出特异性IgM抗体阳性，可立即采取措施，做到临床早期诊断，早期预防，早期治疗；

4、本发明减少了许多繁琐的程序，使用全血即可进行检测，无需对血液进行血清和血浆分离处理即可进行检测，因此使用方便、快捷、直观，并且具有特异性强、灵敏度高的特点，不需特殊仪器也不需专业培训，按说明书即可完成操作，全过程只需20分钟，适合医院等基层单位。因此，本发明具有较高的社会价值和经济价值。

更进一步地，由于本发明在所述样品垫上、所述保护垫和胶体金层之间还设有渗滤层，所述渗滤层为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫，所述渗滤层可准确、快速地辅助过滤血细胞，因此，极大的提高了检测效果。

附图说明

附图1为本发明具体实施方式中检测条的侧面结构示意图；

其中：1、底板；2、吸水滤纸；3、硝酸纤维素膜；4、样品垫；5、保护垫；6、胶体金层；7、渗滤层；8、检测线；9、参照线。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细说明。

实施例1

如图1所示的一种微量全血加样法检测肺炎支原体胶体金试剂盒，包括盒体和采血管，盒体内设有检测卡，检测卡包括壳体和封装于壳体内的试剂条，试剂条包括底板1，底板1上依次设有首尾相接的吸水滤纸2、硝酸纤维素膜3和样品垫4，样品垫4由上之下依次包括保护垫5、胶体金层6和渗滤层7，保护垫5为胶带；

硝酸纤维素膜3上设有包被有基因重组MP蛋白的检测线8和包被有羊抗鼠IgG抗体的参照线9，检测线8采用基因重组MP蛋白浓度为1.0mg/mL的包被液进行包被，参照线9采用抗鼠IgG抗体浓度为1.5mg/mL的包被液进行包被；

胶体金层6上的胶体金颗粒粒径为27纳米～30纳米，胶体金颗粒采用如下方法制得，先将1wt%氯金酸水溶液加热至沸腾，再按0.7～0.9%的体积比滴加加入1wt%柠檬酸三钠溶液，混匀，继续沸煮，待胶体金溶液颜色由蓝经灰便紫后，停止加热并冷却；

盒体内还配有样品稀释液，样品稀释液为20mM PBS缓冲液。

渗滤层7均为经1wt%Triton X-100和3wt%Tetronic1307浸泡、烘干后制得的玻璃纤维垫。

试剂的使用方法包括以下步骤：

（1）检测

a、取出检测卡，放在台面上；

b、取30μL全血滴加于加样孔中；

c、随即滴加2滴（80μL）标本稀释液于加样孔中，10～20分钟时观察结果，20分钟后结果无效。

（2）结果判断

a、阴性：

反应后，在参照线上形成一个红色沉积反应线，在检测线上无反应线出现，表明被测样品中无肺炎支原体抗体，为阴性结果；

b、阳性：

反应后，在参照线上形成一个红色沉积反应线，同时在检测线上形成一个红色沉积反应线，表明被测样品中有肺炎支原体抗体，为阳性结果；

c、无效：

反应后，在参照线上不显色，表明本次检测无效。

实施例2

检测线采用基因重组MP蛋白浓度为0.8mg/mL的包被液进行包被，参照线采用抗鼠IgG抗体浓度为1.0mg/mL的包被液进行包被，其余同实施例1。

本发明采血量微小、试剂质量稳定，仅需30μL全血即可进行检测，尤其适合婴幼儿的MP检测，可采取指尖取血，彻底解决了婴幼儿取血困难的问题，并且减少了许多繁琐的程序，使用全血即可进行检测，无需对血液进行血清和血浆分离处理即可进行检测，其推广应用前景十分广阔。

本发明不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所作出的种种变换，均落在本发明的保护范围之内。