牡荆子总黄酮提取物及其制备方法和医药用途

摘要

本发明提供了一种牡荆子总黄酮提取物及其制备方法和医药用途，通过步骤：（1）取牡荆子，用水或醇或者醇水溶液作为提取溶剂回流提取2次，合并提取液，真空浓缩；（2）将步骤（1）的浓缩液用聚酰胺树脂柱层析，先用水洗去杂质再用醇或者醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，得到牡荆子总黄酮提取物。本发明还提供了上述牡荆子总黄酮提取物在制备预防和治疗哮喘病、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎或感冒咳嗽药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种牡荆子总黄酮提取物及其制备方法和医药用途，更具体是牡荆子总黄酮提取物在制备预防和治疗哮喘病、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎或感冒咳嗽药物中的应用。

背景技术

支气管哮喘是世界范围内最为常见的慢性呼吸道疾病。目前，全球哮喘患者约3亿人，中国哮喘患者约3000万。近年来，因其患病率和死亡率均呈上升趋势，已成为严重的公共卫生问题而受到世界各国的极大关注。因此需要提供有效地治疗哮喘病的药物和方法。

目前对哮喘病的治疗还没有特效药。临床的治疗主要以应用支气管扩张剂为主，有β₂-肾上腺素能受体拮抗剂类、α-肾上腺素能受体拮抗剂类、氨茶碱类、胆碱能受体拮抗剂类、钙离子拮抗剂类、钾离子通道激动剂、糖皮质激素(ICS)、细胞膜稳定剂、抗组胺药物、白三烯受体拮抗剂、血小板活化因子拮抗剂、特异性免疫治疗剂、非特异性免疫治疗剂等。1995年出台了“全球哮喘防治创议”进一步推动和普及了糖皮质激素的应用。这些治疗方法对缓解哮喘症状，改善哮喘病人的生活质量有一定的效果，但没有使哮喘病的发病率和死亡率有所降低，反而呈逐年增加的趋势。治疗哮喘病需要更有效的和更安全的药物。

慢性阻塞性肺病的发病机制尚未完全明了，目前普遍认为以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征。临床采用长期吸入糖皮质激素抗炎治疗和吸入β₂-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂等支气管扩张剂进行治疗。但这些药物的治疗效果并不是十分理想，寻找更有效的治疗慢性阻塞性肺病的药物是非常必要的。

牡荆子为马鞭草科多年生植物牡荆Vitex negundo L.var.cannabifolia(sieb.Et Zucc)Hand.Mazz的带宿萼的果实，亦叫小荆实，《中药大辞典》、《本草纲目》均记载“牡荆子味苦、温，无毒，主除骨间寒热、通利胃气、止咳逆、下气。”具有祛痰止咳、平喘理气和止痛之功效。文献记载，牡荆属植物主要含有黄酮类、二萜类、环烯醚萜类、三萜类等多种化学成分。

目前对牡荆子总黄酮提取物对研究较少，文献《牡荆子乙醇提取物抗氧化活性的研究》（肖国珍等，广东工业大学学报，2006年9月，第23卷第3期，31-35）公开了一种牡荆子乙醇提取物的制备方法，牡荆子经75℃烘干3h，粉碎过40目筛，秤取100g置锥形瓶中，加入250ml乙醇，在恒温水浴锅中60℃～65℃提取60h，并随时搅拌，滤出浸取液减压蒸馏浓缩，真空干燥，得膏状提取物，浸膏中总黄酮含量为11.52%。

该提取物中黄酮含量较低，成分复杂，且对其活性研究仅停留在抗氧化活性层面，临床药理意义不大，尚无明确的药理活性报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种牡荆子总黄酮提取物及其制备方法和在制备预防和治疗哮喘病、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎或感冒咳嗽药物中的应用。

本发明所提供的牡荆子总黄酮提取物是从中药牡荆子中提取的，所述牡荆子是马鞭草科植物牡荆的果实。

本发明具体技术方案如下：

一种牡荆子总黄酮提取物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）取牡荆子，用水或醇或者醇水溶液作为提取溶剂回流提取2次，合并提取液，真空浓缩；

（2）将步骤（1）的浓缩液用聚酰胺树脂柱层析，先用水洗去杂质再用醇或者醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，得到牡荆子总黄酮提取物。

上述制备方法，步骤（1）所述醇优选甲醇、乙醇或者异丙醇，所述醇水溶液优选甲醇、乙醇或者异丙醇的水溶液，进一步优选醇水溶液中醇的体积百分比为70%。

上述制备方法，步骤（1）中也可用其它溶剂如丙酮等进行提取制备。

上述制备方法，步骤（1）中优选将牡荆子粉碎后过10目筛再进行提取。

上述制备方法，步骤（1）中优选使用70%乙醇回流提取2小时，共提取两次，优选将提取液真空浓缩至无醇味。

上述制备方法，步骤（2）中所述聚酰胺树脂选优选60-100目。

上述制备方法，步骤（2）所述醇优选甲醇、乙醇或者异丙醇，所述醇水溶液优选甲醇、乙醇或者异丙醇的水溶液，进一步优选醇水溶液中醇的体积百分比为70%。

上述制备方法，步骤（2）的优选方法：以2倍柱体积每小时的上样流速加样品液进行动态吸附。先用4倍柱体积的蒸馏水洗脱除去杂质，弃去水洗脱液。再以5倍柱体积的70%乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，真空浓缩至干，得到牡荆子总黄酮提取物中总黄酮含量为83.72%。

本发明还提供了一种牡荆子总黄酮提取物，采用上述制备方法制备得到，其中总黄酮含量为83.72%。

本发明还提供了上述牡荆子总黄酮提取物在制备预防和治疗哮喘病、慢性阻塞性肺病、慢性支气管炎或感冒咳嗽药物中的应用。

本发明通过实验证实，本发明的牡荆子总黄酮提取物具有治疗哮喘、治疗慢性阻塞性肺病（COPD）、治疗慢性支气管炎、抗过敏药理活性，具有毒性小，长期使用疗效较佳等特点。

本发明提供的牡荆子总黄酮，可以与一种或多种药学上可接受的载体成分混合，含牡荆子总黄酮的药物组合物中进一步含有β₂-肾上腺素能受体激动剂。

本发明所述的应用，牡荆子总黄酮提取物可以以单一药物的形式被给药或可以与其它药物联合给药。

本发明的牡荆子总黄酮提取物可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的化合物或其可药用盐及可药用载体。较佳的，本发明的药物组合物有0.1-99.9%重量百分比的作为活性成分的本发明的牡荆子总黄酮提取物。“可药用载体”不会破坏本发明的化合物或其可药用盐的药学活性，同时其有效用量，即能够起药物载体作用时的用量对人体无毒。

“可药用载体”包括但不限于：离子交换材料、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物传递系统（SEDDS）如d-维生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯、吐温或其他类似聚合介质等药物制剂用的表面活性剂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸部分甘油酯混合、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、硅酸镁等。聚乙烯吡咯酮、纤维素物质、聚乙烯醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、乙烯-聚氧乙烯-嵌段聚合物和羊毛脂、环糊精如α-、β-、γ-环糊精或其经化学修饰的衍生物如2-和3-羟丙基-β-环糊精等羟烷基环糊精或其他可溶性衍生物等均可用于促进本发明的化合物、其药用盐或前药的药物传递。

其他可药用辅料如填充剂（如无水乳糖、淀粉、乳糖珠粒和葡萄糖）、粘合剂（如微晶纤维素）、崩解剂（如交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素和交联PVP）、润滑剂（如硬脂酸镁）、吸收促进剂、香味剂、甜味剂、稀释剂、赋形剂、润湿剂、溶剂、增溶剂和着色剂等也可加入本发明的药物组合物中。

上述本发明的牡荆子总黄酮提取物以及药物组合物可通过肠道或者非肠道途径给药。非肠道给药制剂包括注射剂、霜剂、软膏剂、贴剂、喷雾剂等。给药途径包括皮下、皮内、动脉内、静脉内、肌内、关节内、滑液内、胸骨内、鞘内、病灶内、颅内注射或输注，或者，口服、局部、直肠、经鼻、经颊、阴道、舌下、皮内、粘膜、气管、尿道给药，或者通过吸入气雾或植入蓄积或者针刺方式给药。

上述本发明的牡荆子总黄酮提取物以及药物组合物的治疗有效量为0.5mg/kg–100mg/kg之间，可用于相关疾病的单一用药或联合用药治疗，为本领域技术人员能够理解的范围。

附图说明

图1为本发明所述牡荆子总黄酮提取物对离体豚鼠回肠试验的结果图

具体实施方式

以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。

在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

实施例1牡荆子总黄酮提取物的制备

取牡荆子10kg，粉碎后过10目筛，用70%乙醇60L回流提取2小时，滤取提取液，药渣再加70%乙醇45L回流提取2小时，滤取提取液，合并提取液，真空浓缩至无醇味，加水2L搅拌溶解制得样品溶液。

采用常规方法处理聚酰胺树脂60-100目（购于台州路桥四甲生化塑料厂），取处理好的聚酰胺树脂2.5Kg装柱(200mm×1000mm)，以2倍柱体积每小时的上样流速加样品液进行动态吸附，共加样品溶液1L。先用4倍柱体积的蒸馏水洗脱除去杂质，弃去水洗脱液。再以5倍柱体积的70%乙醇进行洗脱，收集乙醇洗脱液，真空浓缩至干，得到牡荆子总黄酮提取物0.24kg。经分光光度法测定总黄酮含量为83.72%。

实施例2氨水引咳试验

小鼠40只，随机分为对照组、牡荆子总黄酮提取物高剂量组（400mg/kg）、牡荆子总黄酮提取物中剂量组（200mg/kg）、牡荆子总黄酮提取物低剂量组（100mg/kg），每组10只。灌胃给药后1h开始实验。每次取1只小鼠，放入容积为1L的玻璃罩内，内放一滤纸片（2×2cm²），将0.3ml的氨水滴到滤纸片上，使小鼠在玻璃罩内刺激30s，取出后立即观察并记录小鼠2min内咳嗽次数和咳嗽的潜伏期，小鼠咳嗽的表现为腹肌收缩张口。灌胃3h后，重复实验1次，观察并记录。

表1牡荆子总黄酮提取物对氨水引起的小鼠咳嗽抑制作用

注：*P＜0.001即有显著或非常显著差异。

实验结果如表1所示，牡荆子总黄酮提取物三个剂量组均能显著抑制氨水引起的小鼠咳嗽次数和延长咳嗽的潜伏期，作用强度与剂量效应呈正相关。与对照组相比，有显著或非常显著差异。

实施例3氯化乙酰胆碱加磷酸组胺盐吸入引喘试验

取200-250g豚鼠40只，雌雄各半，置于5000mL容积的密闭玻璃烧杯内，以超声雾化器喷雾1%氯化乙酰胆碱和0.2%磷酸组胺盐等容积混合液10s。立即取出豚鼠，观察豚鼠的引喘潜伏期(从喷雾开始到哮喘发作、呼吸极度困难，直至抽搐跌倒的时间)。然后将豚鼠随机分为对照组、牡荆子总黄酮提取物高剂量组（400mg/kg）、牡荆子总黄酮提取物中剂量组（200mg/kg）、牡荆子总黄酮提取物低剂量组（100mg/kg），每组10只。分别在给药后1h及3h进行引喘，观察引喘潜伏期。两分钟以上不喘者引喘潜伏期以120s计。

表2牡荆子总黄酮提取物对药物引豚鼠喘的影响

注：*P<0.001即有显著性差异。

试验结果如表2所示，牡荆子总黄酮提取物三个剂量组均能显著延长豚鼠的抽搐潜伏期，与空白对照组相比差异有显著性意义，表明牡荆子总黄酮提取物具有显著的平喘作用，且其作用随剂量的增加而增强。

实施例4离体豚鼠回肠试验

取300g左右豚鼠，将它头部敲昏，动脉放血处死。取大约6ml左右的回肠一段，悬挂于盛有台氏液的麦氏浴槽中，恒温37±0.5℃，一端系在L型通气管上，加以固定，从浴槽底部通人氧气，每分钟15-20个气泡，另一端固定在压力换能器上预置负荷2g，平衡30min后，描记正常肠肌收缩曲线。用乙酰胆碱(1×10^-3g/L)的收缩曲线作为对照，冲洗3次，加入本发明所述牡荆子总黄酮提取物(10×10^-3g/L)作用5分钟后加等量的乙酰胆碱，描记收缩曲线并与对照曲线比较，结果如图1所示（A．乙酰胆碱对回肠的影响，B.牡荆子总黄酮作用5分钟后乙酰胆碱对回肠的影响）。结果表明本发明所述牡荆子总黄酮提取物可显著缓解乙酰胆碱引起的离体回肠收缩反应。