一种富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法

摘要

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用超声波提取-大孔吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法。本发明优点：采用超声波提取，提取效果要高于乙醇热浸提取，在结合大孔吸附树脂对白屈菜碱的吸附选择性好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30％以上的白屈菜碱半成品和含量90％以上的白屈菜碱终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附白屈菜碱，吸附快、解析也快，吸附容量较大。

说明书

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种白屈菜碱的纯化方法，特别是涉及一种利用超声波提取-大孔 吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法。

背景技术：

白屈菜：【英文名】Greater Celandine Herb，Herb of Greater Celandine【别名】地黄连、牛金花、土黄连、 八步紧、断肠草、山西瓜、雄黄草、山黄连、假黄连、小野人血草、黄汤子、胡黄连、小黄连。药材基源： 为罂粟科植物白屈菜的全草。多年生草本，高30-100cm，含橘黄色乳汁。主根粗壮，圆锥形，土黄色或暗 褐色，密生须根。茎直立，多分枝，有白粉，具白色细长柔毛。化学成份：新鲜植株有浓橙黄色的乳液， 乳液中含多种生物碱生物碱含量0.7％或0.97～1.87％。其中有白屈菜碱41％、原阿片碱22％、人血草碱17％、 别隐品碱9％、小檗碱5％、白屈菜红碱3％、血根碱1.5％、鹰爪豆碱0.1％，还有羟基白屈菜碱即氧化白屈 菜碱、甲氧基白屈菜碱、隐品碱，白屈菜黄碱、白屈菜胺、高白屈菜碱、羟基血根碱即氧化血根碱。除生 物碱而外，还含白屈菜酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、胆碱、甲胺、组胺、酪胺、皂甙、黄酮醇、白屈菜 醇，还含强心甙，在开花期的含量最高。根含生物碱达1.33％或1.90～4.14％，一部分生物碱与地上部分 所含的相同，另含黄连碱、刻叶紫堇明碱、白屈菜玉红碱、白屈菜默碱、菠菜甾醇、少量麦角甾醇和橡胶 0.118％。叶含黄酮类1.43％、多量维生素C。维生素C的含量在开花期最高，可达834毫克％，在果实成 熟时含量最低，为231毫克％。

白屈菜碱是一种对人类健康有显著保健作用的天然活性物质，已引起国际社会的普遍关注。经科学研 究及临床应用证明，白屈菜碱用于胃肠绞痛、胃及十二指肠溃疡、肾绞痛、痛经以及胆道蛔虫症止痛：配 合使用局麻药可用于妇女绝育手术；复方白屈菜碱镇痛作用较好，可用于类风湿性关节炎、外伤及癌性疼 痛。近年来，人们发现天然植物白屈菜中含有大量的白屈菜碱，由于其原料白屈菜分布较广，从中提取白 屈菜碱已取得了可喜进展。名称为“一种白屈菜提取物及其制备方法及应用”的专利申请中便公开了将白 屈菜经乙醇、氯仿提取白屈菜提取物工艺流程。上述专利文献中的白屈菜提取物提取工艺主要是经过醇提、 蒸馏、调节PH值、氯仿提取工艺等步骤提取而成，其分离效果远远不如超声波提取-大孔吸附树脂耦合法 处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。

发明内容：

本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用超声波提取-大孔 吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种利用超声波提取-大孔吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法，其步骤如下：

(1)将干白屈菜粉碎，用浓度为65％～80％的乙醇溶液进行超声波提取，提取温度为40～60℃，提取频 率60～100Hz，提取时间1～2小时，提取3次；

(2)将(1)处理的白屈菜提取液过滤，合并三次提取液，减压浓缩，回收乙醇至相对密度；

(3)用1mol/L的酸调节PH值至3.4～3.5，于5℃冷藏48h后抽滤；将滤液用30％氢氧化钠调节pH值 至11，用与滤液等量的氯仿提取4次，合并氯仿液，回收氯仿，得白屈菜碱粗提物；

(4)将所得白屈菜碱粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；

(5)用50％～80％不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白屈菜碱 各阶段洗脱液；

(6)将白屈菜碱各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得白屈菜碱半成品，其含量在30％以上；

(7)将所得白屈菜碱半成品上硅胶层析柱，并用氯仿以5∶1的体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪 检测，收集白屈菜碱各阶段洗脱液；

(8)将所收集的白屈菜碱洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得白屈菜碱，其含量在90％以上。

所述的步骤(4)中，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D 3520、D4006、 H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。

本发明应用超声波提取-大孔吸附树脂耦合法分离纯化白屈菜碱，对白屈菜碱的吸附选择性良好，吸附 快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高， 可以得到含量30％以上的白屈菜碱半成品和含量90％以上的白屈菜碱终产品，克服了常规提取率相对较 低、提取纯度低的缺点。

具体实施方式：

实施案例1：一种利用超声波提取-大孔吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法，其步骤如 下：

(1)将500g干白屈菜粉碎后过60目筛，用超声波提取法进行提取，其浓度为65％的乙醇溶液，料液 比为粉碎体积的8倍，提取温度为40℃，提取频率60Hz，提取时间1小时，提取3次；

(2)将(1)处理的白屈菜提取液合并，减压回收乙醇浓缩至相对密度1.08；

(3)用1mol/L磷酸调节PH值至3.4；于5℃冷藏48h后抽滤。将滤液用30％氢氧化钠调节pH值至 11，用与滤液等量的氯仿提取4次，合并氯仿液，回收氯仿，得白屈菜碱粗提物；

(4)将所得白屈菜碱提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产 的NKA-II型树脂；

(5)用50％、60％、70％、80％的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪 检测，收集白屈菜碱各阶段洗脱液；

(6)将白屈菜碱各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为30％的白屈菜碱半成品；

(7)将所得白屈菜碱半成品上硅胶层析柱，并用氯仿以5∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟 踪检测，收集白屈菜碱洗脱液；

(8)将所收集的白屈菜碱洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量902％白屈菜碱。

实施案例2：一种利用超声波提取-大孔吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法，其步骤如 下：

(1)将500g干白屈菜粉碎后过70目筛，用超声波提取法进行提取，其浓度为70％的乙醇溶液，料液 比为粉碎体积的9倍，提取温度为50℃，提取频率80Hz，提取时间1.5小时，提取3次；

(2)将(1)处理的白屈菜提取液合并，减压回收乙醇浓缩至相对密度1.10；

(3)用1mol/L磷酸调节PH值至3.4，于5℃冷藏48h后抽滤；将滤液用30％氢氧化钠调节pH值至 11，用与滤液等量的氯仿提取4次，合并氯仿液，回收氯仿，得白屈菜碱粗提物；

(4)将所得白屈菜碱粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006 型树脂；

(5)用50％、60％、70％、80％的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集白屈 菜碱各阶段洗脱液；

(6)将白屈菜碱各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量33％的白屈菜碱半成品；

(7)将所得白屈菜碱半成品上硅胶层析柱，并用氯仿以5∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟 踪检测，收集白屈菜碱洗脱液；

(8)将所收集的白屈菜碱洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量91.7％白屈菜碱。

实施案例3：一种利用超声波提取-大孔吸附树脂耦合法富集纯化白屈菜中白屈菜碱的方法，其步骤如 下：

(1)将500g干白屈菜粉碎后过80目筛，用超声波提取法进行提取，其浓度为75％的乙醇溶液，料液 比为粉碎体积的10倍，提取温度为60℃，提取频率100Hz，提取时间2小时，提取3次；

(2)将(1)处理的白屈菜提取液合并，减压回收乙醇浓缩至相对密度1.12；

(3)用1mol/L磷酸调节PH值至3.5，于5℃冷藏48h后抽滤；将滤液用30％氢氧化钠调节pH值至 11，用与滤液等量的氯仿提取4次，合并氯仿液，回收氯仿，得白屈菜碱粗提物；

(4)将所得白屈菜碱粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学 所生产的NKA-9型树脂；

(5)用50％、60％、70％、80％的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法 跟踪检测，收集白屈菜碱各阶段洗脱液；

(6)将白屈菜碱各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量32％白屈菜碱半成品；

(7)将所得白屈菜碱半成品上硅胶层析柱，并用氯仿以5∶1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟 踪检测，收集白屈菜碱洗脱液；

(8)将所收集的白屈菜碱洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量923％白屈菜碱。