蒽环类抗生素及其可药用盐在治疗新生血管性青光眼中的用途

摘要

本发明公开了一种蒽环类抗生素及其可药用盐在治疗新生血管性青光眼中的用途。本发明发现蒽环类抗生素及其可药用盐在治疗新生血管性青光眼方面有很好的效果，尤其是将蒽环类抗生素制备成纳米制剂、微球制剂、脂质体以及水凝胶等长效制剂，降低了蒽环类抗生素的毒性，使其可以眼内给药，同时扩大了给药剂量，持续药效时间长久，药物疗效强于蒽环类抗生素的普通制剂，进行眼内给药后，对新生血管性青光眼有非常好的治疗效果，填补了目前尚未有较好地针对新生血管性青光眼的治疗药物的空白。

说明书

技术领域

本发明涉及一种治疗新生血管性青光眼的药物，具体涉及一系列传统抗肿瘤抗生 素蒽环类抗生素及其可药用盐在制备治疗新生血管性青光眼药物中的新用途，特别 地，所述蒽环类抗生素及其可药用盐制备成为纳米制剂、微球制剂、脂质体以及水凝 胶等长效制剂。

背景技术

新生血管性青光眼是一种继发性的青光眼疾病，主要表现在患者眼中虹膜上新生 大量血管，表现青光眼的症状。导致新生血管性青光眼的病因很多，但是最主要引起 新生血管性青光眼的是视网膜静脉阻塞和糖尿病性视网膜病变，这两种眼病均可继发 出新生血管性青光眼，这两种眼病引起的新生血管性青光眼主要占新生血管性青光眼 发病的75％。剩下的25％由其他各种原因引起的新生血管性青光眼，大概有多达40 余种不同疾病可以广泛累及眼后节缺氧或局部性的眼前节缺氧，导致新生血管性青光 眼。

视网膜静脉阻塞以及糖尿病视网膜病变是最主要的引起虹膜新生血管和发展成 新生血管性青光眼的原因，新生血管性青光眼已成为主要致盲病因之一，发病率随病 程发展而增加。视网膜微血管病变引起视网膜组织发生变化，激发出具有活性的血管 形成因子，这些因子向眼前部扩散，刺激虹膜形成纤维血管膜，跨越眼前房角，影响 房水排出，致眼压升高，此时表现为开角型青光眼。当纤维血管膜收缩，眼前房角粘 连，则变成新生血管性青光眼等严重并发症，引起闭角型青光眼。新生血管性青光眼 房角关闭期，眼压升高十分顽固，眼痛剧烈且难以控制，同时治疗也非常复杂和困难。 随着病情的进展，眼组织和视功能往往遭到严重的、不可挽回的损害，患者眼部充血， 角膜水肿，剧烈眼痛、头痛，常导致失明。新生血管性青光眼治疗难度大、治疗效果 差，晚期患者即使手术治疗也难以控制眼压，最终导致视功能丧失。

由于新生血管容易破裂，反复发生前房出血，目前临床上采用全视网膜光凝、全 视网膜冷冻、虹膜角膜角光凝等手段，由于会产生术后炎症和疼痛比较严重，而且往 往效果不佳，时常加重炎症和加快房角新生血管形成的进展，而遭到诸多临床工作者 和学术界的批评。药物的治疗主要采取降眼压的方法，而这些药物往往治标不治本， 阿托品、糖皮质激素等药品均是暂时缓解眼部症状，不能彻底治疗新生血管性青光眼， 因此目前临床上暂无较有效地治疗手段。

目前新生血管性青光眼的病因及发病机制尚不完整，治疗方面亦无确切有效的方 法，现有的治疗手段仍存在诸多争议。新生血管性青光眼与视网膜静脉阻塞、糖尿病 眼等疾患关系密切。由于它的致盲性，将会严重降低患者的生活质量。如果能开发出 一种药物能够有效治疗新生血管性青光眼，避免病情恶化，显现出比外科治疗技术手 段更好的治疗效果或是彻底解决这个顽疾将产生重大的现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种蒽环类抗生素及其可药用盐在制备治疗 新生血管性青光眼药物中的新用途，尤其是将所述蒽环类抗生素及其可药用盐制备成 为纳米制剂、微球制剂、脂质体以及水凝胶等长效制剂，能够获得更好的治疗效果。

本发明采用的具体技术方案为：

本发明所述的蒽环类抗生素为结构如下的化合物及其立体异构体：

其中，R1为H、OH、CH₃、CH₂OH、或OCH₃，R2为COR1或CR1R1，R3为 H、OH、CH₃、CH₂OH、OCH₃、吡啶基、呋喃基、吡咯基、噻吩基、或吡喃基。

更优选地，所述蒽环类抗生素为多柔比星(又称为阿霉素)、表多柔比星、吡喃 多柔比星、米托蒽醌、柔红霉素(又称为道诺霉素、正定霉素)、伊达比星、阿柔比 星(又称为阿克拉霉素)、或洋红霉素(又称为卡柔霉素、卡米诺霉素)

上述化合物可以通过现有技术中已经公开的方法制备获得，一些化合物可以通过 商业途径购买获得。

本发明将蒽环类抗生素及其可药用盐与药学上可接受的辅料组合制备成各种常 用的制剂用于治疗新生血管性青光眼的病症，这些制剂包括：普通粉针剂、长效缓释 注射剂。优选地，所述的长效缓释注射剂可以是纳米粒制剂、微球制剂、水凝胶制剂 或脂质体制剂。优选地，所述水凝胶制剂为温敏水凝胶制剂。所述蒽环类抗生素对于 人体的眼内给药剂量是0.5-2000μg/kg，优选1-1500μg/kg，更优选3-1000μg/kg。

在制备所述的纳米粒、微球、水凝胶制剂时，采用的药学上可接受的辅料包括高 分子材料，所述高分子材料选自：聚酸酐、聚氧化烯、聚酰胺、聚酯、聚丙烯酸树脂、 聚醚、或聚糖中的一种或多种，或选自所述几种高分子材料的不同单体之间的共聚物。 优选地，所述高分子材料选自聚酸酐、聚乙烯醇、聚乙二醇、聚酸酐-聚乙二醇共聚 物、N-异丙基丙烯酰胺-丙烯酸共聚物、聚氰基丙烯酸酯、聚乳酸、十八烷二酸酐- 乙二醇共聚物、聚乳酸羟基乙酸共聚物、聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇共聚物、聚乙交 酯、乙交酯丙交酯-乙二醇-乙交酯丙交酯三嵌段共聚物、聚醚砜、明胶、聚羟基丁酯、 泊洛沙姆、胶原蛋白、纤维蛋白原、白蛋白、纤维素、葡聚糖、海藻酸盐、右旋糖酐、 透明质酸、多肽或壳聚糖等中的一种或多种。

在制备所述的脂质体制剂时，采用的药学上可接受的辅料包括天然或合成的磷 脂、类脂或其组合。

上述药物制剂可以通过现有技术中公开的方法制备获得，也可以采用本发明实施 例中记载的方法制备获得。

目前，蒽环类抗生素常用于治疗白血病和抗肿瘤。有较少人将其用于治疗增殖性 视网膜病变。本发明人对蒽环类抗生素进行了新适应症的研究，并欣喜地发现将其以 纳米或是微球等长效制剂的形式眼内给药后，蒽环类抗生素对治疗新生血管性青光眼 具有良好的效果，且不会产生蒽环类抗生素极易对眼部产生的多种副作用。研究同时发 现蒽环类长效缓释制剂不仅干预虹膜新生血管的生长调控，而且对新生血管性青光眼 有非常好的治疗作用，更具有靶向作用，其具有作用时间长、毒副作用小，能明显提 高生物利用率等优点。在这种靶向缓释给药的作用方式，药物可以持续作用很久，极大地 降低了蒽环类本有的较大的眼部副做用，使之发挥新的眼部治疗效果，可治疗新生血管性 青光眼。

具体实施方式

下面具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明不仅局限以下实施例。下 述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法，所用的试验材料，如无特殊说明， 均为常规生化试剂供应商购买得到。

制备实施例如下：

实施例1

①取300mg聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)加入到1ml二氯甲烷中制备成溶液；

②将50mg阿柔比星加入到①中制得的溶液中，超声混匀；

③用注射器将②中的溶液缓慢注入到含有0.05％蛋黄卵灵脂的棉籽油中，1000r/min 搅拌20min后，降低转速至200r/min继续搅拌4h；

④向步骤③中加入20ml石油醚，30min后8000r/min离心5min；

⑤收集微球，石油醚洗涤并且挥干。

实施例2

①取200mg PLGA加入到1ml四氢呋喃溶液中制备成溶液；

②将50mg米托蒽醌加入0.2ml甘油中，混匀后加入到①制得的溶液中，匀浆器搅拌 1min后得到初乳；

③将其加入到12ml的2％聚乙烯醇(PVA)溶液中，1000r/min搅拌5min后再加入 120ml的0.5％PVA溶液得复乳；

④降低转速至200r/min继续搅拌4h后，8000r/min离心5min；

⑤收集微球，蒸馏水洗涤后冷冻干燥。

实施例3

①取100mg PSA-PEG加入到1ml二氯甲烷溶液中制备成溶液；

②将50mg阿柔比星加入到①中制得的溶液中，超声混匀；

③将②制得的溶液加入到15ml 1％PVA溶液中；

④降低转速至200r/min继续搅拌4h后，8000r/min离心5min；

⑤收集微球，蒸馏水洗涤后收集。

实施例4

①取160mg聚酸酐-聚乙二醇共聚物(PSA-PEG)加入到2ml二甲基亚砜和二氯甲 烷(8∶2)中制备成有机相；

②将40mg多柔比星加入到①中，混匀后，放置于1％聚乙烯醇中超声；

③将②中溶液置于聚乙烯醇溶液中搅拌；

④除去③中有机溶剂，离心收集，得到纳米粒溶液。

实施例5

①将柔红霉素和聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇共聚物(PLGA-PEG)800mg用3ml二氯 甲烷和1ml N，N-二甲基甲酰胺在30℃水浴中作用使其溶解并高速搅拌；

②把①中加入到含有1％聚乙烯醇至100ml，充分混匀；

③室温搅拌挥发2h，得纳米粒溶液；

④在4℃，离心20min后收集所得纳米粒；

⑤将④中所得物用双蒸水洗涤三次即为载药纳米粒。

实施例6

①取300mg聚酸酐(PSA)加入到3ml二氯甲烷中制备成有机相；

②将40mg伊达比星加入到①中制得的有机相中；

③取丙二醇嵌段聚醚和吐温80(1∶1)制成含乳化剂为4％的水溶液，并向其中加 入葡聚糖70，调节溶液PH为8；

④运用纳米沉降法将制得的有机相滴加至③制得的水相中；

⑤搅拌除去有机溶剂，得到纳米粒溶液，离心收集。

实施例7

①用0.01mol·L^-1的氢氧化钠溶液作为溶剂；

②取①溶剂10ml加入100μl羟丙基甲基纤维素，搅拌使其均匀；

③向步骤②制得的溶液中加入50μl卡波姆934，搅拌使其混合均匀；

④向步骤③制得的溶液中加入40mgPSA-PEG，搅拌使其混合均匀；

⑤向上述溶液中加入1mg阿柔比星；

⑥称取1.8g泊洛沙姆407加入到④所制得的溶液中，于磁力搅拌下使其分散均匀， 4℃条件放置24小时以上，使凝胶充分溶胀，分散均匀得到澄明的溶液，既得阿 柔比星水凝胶。

实施例8

①用0.01mol·L^-1的氢氧化钠溶液作为溶剂；

②取①溶剂10ml加入80μl羟丙基甲基纤维素，搅拌使其均匀；

③向步骤②制得的溶液中加入50μl海藻酸钠，搅拌使其混合均匀；

④向步骤③制得的溶液中加入40mgPSA-PEG，搅拌使其混合均匀；

⑤向上述溶液中加入1mg米托蒽醌；

⑥称取1.8g泊洛沙姆407加入到④所制得的溶液中，于磁力搅拌下使其分散均匀， 4℃条件放置24小时以上，使凝胶充分溶胀，分散均匀得到澄明的溶液，既得米 托蒽醌水凝胶。

实施例9

①称取0.9g磷脂、0.3g胆固醇于50ml小烧杯中，加无水乙醇1-2ml，置于65-70℃ 水浴中，搅拌使溶解，旋转该小烧杯使磷脂的乙醇液在杯壁上成膜，用吸耳球轻吹风， 将乙醇挥去；

②另取多柔比星溶液30ml于小烧杯中，同置于65-70℃水浴中，保温，待用；

③取预热的多柔比星溶液30ml，加至含有磷脂和胆固醇脂质膜的小烧杯中，65-70 ℃水浴中搅拌水化10min。随后将小烧杯置于磁力搅拌器上，室温搅拌30-60min，混 匀即得多柔比星脂质体。

效果实验如下：

1、动物模型的建立及分组：

运用高氧环境诱发鼠的虹膜新生血管，将刚刚出生的C57小鼠200只与同窝的 母鼠放入高压氧舱内，通过进氧管通入100％湿化的纯氧气，开始时将氧气流入量调 节到每分钟通入8升，使氧气较为迅速地充满整个氧舱，连续洗舱后，当氧气的浓度 显示为75％时，减小氧气的通入量至每分钟1升，维持整个氧舱内的氧气浓度在(75 ±5)％，随后每隔一段时间监测氧浓度并维持整个氧舱内的氧气浓度在合理范围。每 日开舱一次检查，更换食物和水。给氧1周后，将它们从氧舱中取出，置于正常环境 中饲养，将其随机分组，分别分为蒽环类抗生素普通制剂用药组(用羧甲基纤维素钠、 甘露醇助溶多柔比星后，以混悬剂形式注射)，实施例9组(实施例的纳米制剂、微 球制剂、水凝胶制剂、脂质体制剂)。模型组和未经受高氧环境的正常小鼠(正常对 照组)，一共12组。

2、动物给药及处置：

在动物模型建立以后，分别在动物模型建立后的第一天对各个组进行给药。治疗 组分别为蒽环类抗生素普通制剂用药组(用羧甲基纤维素钠、甘露醇助溶多柔比星后， 以混悬剂形式注射)，实施例组(实施例的纳米制剂、微球制剂、水凝胶制剂、脂质 体制剂)。除模型组和正常对照组外，其他各个治疗组均眼内注射5μg药物或含5μg 药物的载药纳米粒(微球、纳米粒、水凝胶或脂质体)。正常组为没有新生血管性青 光眼的正常的鼠。正常对照组和模型组均眼内注射0.1mL的PBS溶液。每组均给药 一次，第14天处死各组一半动物，进行实验观察，实验持续四周后结束治疗，即第 28天处死各个组剩余的鼠，进行实验观察。

3、实验方法：

分别在第14天和第28天，将小鼠处死后进行眼球摘除，将周边的脂肪组织除去， 角膜开口，放入组织固定盒中，而后置于4％多聚甲醛的DEPC-PBS缓冲液中，4℃冰 箱固定48h。常规脱水、透明、石蜡包埋，包埋时注意眼球的放置需呈矢状位，使得 切片为角膜至视乳头方向。连续6μm厚度切片，HE染色片观察虹膜新生血管管腔 数。HE染色好的切片，每只眼球选择多张，在光学显微镜下计数每张切片上虹膜组 织形态结构，计数时取视野下5mm²面积下的新生血管计数并取平均值。

从各组中随机抽取未经染色的切片，用链亲合素法对血管内皮生长因子(VEGF) 进行免疫组织化学检测。用缓冲液代替一抗为阴性对照，荧光素抗体标记，激光共聚 焦显微镜图象分析系统比较各组VEGF蛋白表达。按如下步骤操作：1、石蜡切片， 常规脱蜡至水；2、蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min；3、滴加正常山羊血清工作液，室 温孵育20min，而后倒去血清；4、滴加小鼠VEGF IgG工作液后4℃过夜；5、PBS 冲洗，而后滴加适量生物素标记山羊抗小鼠二抗IgG工作液，随后放入37℃水浴箱 中孵育20min后PBS冲洗；6、向其滴加荧光素标记物；7、用甘油封片，在激光共 聚焦显微镜图象分析系统下比较各个实验组的VEGF表达情况。

同时镜下观察各个组虹膜的病理情况，记录并比较。

药效学结果：

各个实验组视野下新生血管数的数目检测比较：

各个动物实验组新生血管数的检测结果(14天)：

各个动物实验组新生血管数的检测结果(28天)：

虹膜新生血管造模成功后，通过各组虹膜中新生血管比较中可以看出：在第14 天，实施例组新生血管数目较模型组有明显减少，与模型组比较，差异有显著统计学 意义；同时各个实施例组较蒽环类抗生素普通制剂用药组新生血管数目亦减少，有显 著性差别。可以看出在半个月内，各个实施例组在治疗虹膜新生血管的疾病中均显示 良好效果，但是还没有完全恢复正常，蒽环类抗生素普通制剂组也显示了疗效。在第 28天的比较中，可以看出实施例各组比模型组有很大差异，其中部分实施例组已和 正常组的新生血管数目非常接近，差异不大。治疗组中，蒽环类抗生素普通制剂组较 实施例各组效果略差，由此可以得出实施例各组表现出更好的治疗作用。

血管内皮生长因子表达结果比较：

各个动物实验组虹膜组织切片免疫组织化学检测血管内皮生长因子的表达结果(14 天)：

各个动物实验组虹膜组织切片免疫组织化学检测血管内皮生长因子的表达结果(28 天)：

通过各组虹膜中血管内皮生长因子比较中可以看出：在第14天，实施例各组较 普通制剂组更具有抑制新生血管的能力，差异有统计学意义，同时从VEGF的表达中 也可以看出，各个实施例组与模型组的差异有统计学意义，实施例各组表现出控制新 生血管的态势。可以看出在半个月内，各个实施例组在治疗虹膜新生血管的疾病中均 显示良好效果，但是还没有完全恢复正常，蒽环类抗生素普通制剂组也显示了疗效。 在第28天的比较中，可以看出实施例组比模型组有很大差异，各个实施例组较好的 抑制新生血管。治疗组中，实施例各组显示出比普通制剂组更好的治疗作用。

最终的病理图片观察结果：

第14天的病理图片显示：模型组的病理图片中可见虹膜表面的新生血管。组织 病理学观察新生的血管为毛细血管。实施例组可见少量的虹膜新生血管，主要位于虹 膜前缘层和基质内，血管扩张不明显，未见虹膜前表面血管膜和纤维血管膜及脱落的 色素细胞。实施例组显示出比模型组的症状有所减轻。蒽环类抗生素普通制剂组的病 理改变情况处于实施例组和模型组之间。

第28天的病理图片显示：模型组的病理图片中可见虹膜新生血管，且切片中前 缘层新生血管量最多，虹膜内可见血管腔四面呈不规则扩张。实施例组恢复较好，比 模型组展示出完全不同的病理情况，未见不规则血管扩张，镜下显示实施例各组少见 虹膜新生血管，非常接近正常组的病理情况，实施例各组显示了较好的治疗效果。普 通制剂组的新生血管情况比较模型组亦有差别，显示出较好的疗效。

由此得出，实施例各组比模型组显示出非常好的治疗效果，均能治疗新生血管性 青光眼疾病。实施例各组比普通治疗组亦有显著性差异，实施例各组比普通制剂治疗 组有更好的效果。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对 本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上 还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是 属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围 之列。