一种从野生蝙蝠葛里提取生物碱的新型工艺方法

摘要

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生蝙蝠葛里提取总生物碱的方法，特别是涉及一种利用生物酶解，超高压提取结合柱层析分离纯化总生物碱的新方法。本发明优点：1、采用生物酶解技术，充分溶出细胞内生物碱有效成分。2、采用超高压提取技术，可缩短提取时间，降低能耗，减少杂质成分溶出，不仅提高有效成分收率，而且纯度高。3、通过柱层析技术的吸附分离，使提取的总生物碱进一步纯化。本发明利用生物酶解法，促使有效成分充分溶出，再采用超高压提取、柱层析分离纯化，所得总生物碱纯度提高到93.6％。

说明书

技术领域：

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生蝙蝠葛里提取总生物碱的方法，特别是涉及 一种利用生物酶解，超高压提取结合柱层析技术纯化总生物碱的新方法。

背景技术：

蝙蝠葛，又名山豆根，缠绕性落叶木质藤木，长达10余米。根状茎细长，外皮常呈层状或片状脱落， 断面黄白色，味极苦。小枝绿色，叶互生，肾形或卵圆形，长5-12cm，全缘或3-7浅裂，叶柄盾状着生。 花单性异株，短圆锥花序腋生，花小，夏日开黄绿色小花，花期5-6月。核果近球形，熟时紫黑色，果期 7-9月。根茎含蝙蝠葛碱、粉汉防己碱、蝙蝠葛双碱、青藤碱、山豆根碱、山豆根诺林等。

国内一般采用有机溶剂提取法和酸性水溶液提取法提取生物碱，存在着操作时间长、温度高，得率不 稳定等缺点，本发明的不同之处在于主要采用生物酶解，超高压提取结合柱层析纯化生物碱的方法，产品 纯度高、得率高。

发明内容：

本发明优点：

本发明主要采用生物酶解技术，超高压提取技术，超高压能缩短提取时间，减少杂质溶出，提高收率。 本发明方法提取快捷、产品纯度高，得率高，选用食品允许使用的乙醇做超高压提取溶剂，无化学残留。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法，其步骤如下：

(1)生物酶解：蝙蝠葛干燥根粉碎至20-40目，酶浓度0.81.2g/l，酶解温度45-50℃，酶解时间3-4h， 得混合液；

(2)预处理：

按不同浓度的乙醇溶剂和原料以一定比例将粗提液混合后包装好，并密封；

(3)超高压提取：

将包装袋放入超高压容器内，在超高压力200-400MPA，室温条件下处理3-5min；

(4)得粗品：

将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；

(5)氧化铝柱层析：取适量粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上100200目碱性氧化铝层析柱；

(6)洗脱：以2-4BV/h流速，用不同浓度乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；

(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量90％以上的生 物碱成品。

具体实施方式：

实施例1：一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法， 其步骤如下：

(1)生物酶解：100g蝙蝠葛干燥根粉碎至20目，酶浓度0.8g/l，酶解温度45℃，酶解时间3h，得 混合液；

(2)预处理：

溶剂和原料比按50∶1的比例混合，加入的乙醇浓度为50％，装好包装袋，密封；

(3)超高压提取：

将包装袋放入超高压容器内，在超高压力200MPA、室温条件下处理3min；

(4)得粗品：

将所得液在60℃真空干燥，得总生物碱粗品；

(5)氧化铝柱层析：取10g粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上100目碱性氧化铝层析柱；

(6)洗脱：以2BV/h流速，用50％、60％、70％乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；

(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量为921％的总生 物碱成品2.34g。

实施案例2：一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法， 其步骤如下：

(1)生物酶解：500g蝙蝠葛干燥根粉碎至40目，酶浓度1.0g/l，酶解温度50℃，酶解时间3.5h， 得混合液；

(2)预处理：

溶剂和原料比按60∶1混合，加入乙醇浓度为60％，装好包装袋，密封；

(3)超高压提取：

将包装袋放入超高压容器内，在超高压力300MPA下，  室温条件处理4min；

(4)得粗品：

将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；

(5)氧化铝柱层析：取30g粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上200目碱性氧化铝层析柱；

(6)洗脱：以3BV/h流速，用60％、70％乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；

(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量为92.7％的总生 物碱成品2.29g。

实施案例3：一种采用生物酶解、超高压提取结合柱层析分离纯化，最终得到高纯度总生物碱的方法， 其步骤如下：

(1)生物酶解：200g蝙蝠葛干燥根粉碎至40目，酶浓度1.2g/l，酶解温度50℃，酶解时间4h，得 混合液；

(2)预处理：

溶剂和原料比按70∶1的比例混合，加入乙醇浓度为70％，装好包装袋，密封；

(3)超高压提取：

将包装袋放入超高压容器内，在超高压力400MPA，  室温条件下处理5min；

(4)得粗品：

将所得液在60℃真空干燥，得生物碱粗品；

(5)氧化铝柱层析：取20g粗品粉末，溶于乙醇，湿法上样，上200目碱性氧化铝层析柱；

(6)洗脱：以4BV/h流速，用70％、80％乙醇进行洗脱，薄层色谱法跟踪监测；

(7)干燥：收集各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，减压浓缩，60℃真空干燥，得到含量为93.6％的总生 物碱成品2.36g。