一种(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的高效液相色谱分析法

摘要

本发明公开了一种(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的高效液相色谱分析法，主要由以下步骤组成：（1）取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯原料，制成浓度为0.1～1mg/mL的样品溶液；（2）选取2μL～50μL的样品溶液注入液相色谱仪中；（3）采用反相色谱柱，以甲醇和pH值为2～7的缓冲盐为流动相进行梯度洗脱，该梯度洗脱的流速为0.5ml/min～1.5ml/min、检测波长为210nm～260nm。本发明解决了未知杂质对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的干扰，具有操作简单、重复性好、专属性高的优点。

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱分析法，具体是指一种(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的高效液相色谱分析法。

背景技术

(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯是合成瑞舒伐他汀钙的关键主原料，其结构式如下：

(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的质量好坏直接影响其合成的瑞舒伐他汀钙的质量，进而对药物的疗效产生较大的影响。为了保证合成的瑞舒伐他汀钙的质量，需要建立一个比较完善的方法检测(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的含量。目前未见公开的关于(3R)–叔丁基二甲硅氧基-5-氧代–6–三苯基膦烯己酸甲酯的含量及有关物质的检测方法。通过对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的原料及产品中实际出现的降解物质进行了详尽的研究发现：由于降解物质多，理化性质差异较大，导致了各杂质在色谱柱上表现差异较大，采用现有的等度的洗脱方法很难将各个杂质较好的分离出来，且一般液相分析方法对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯降解产物缺少控制。

发明内容

本发明的目的主要是解决未知杂质对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的干扰，以及一般液相分析方法对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯降解产物缺少控制的缺点，提供一种(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的高效液相色谱分析法。

本发明通过下述技术方案实现：

一种(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的高效液相色谱分析法，其特征在于，主要由以下步骤组成：

（1）取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯原料，制成浓度为0.1～1mg/mL 的样品溶液；

（2）选取2μL～50μL的样品溶液注入液相色谱仪中；

（3）采用反相色谱柱，以甲醇和pH值为2～7的缓冲盐为流动相进行梯度洗脱，该梯度洗脱的流速为0.5ml/min～1.5ml/min、检测波长为210nm～260nm。

为了更好地分离出(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯，所述梯度洗脱中流动相的具体设置如下：

甲醇的起始比例为40%～50%；0～5min时，甲醇比例从40％上升到55％；5～45min时，甲醇比例为55％；45～55min时，甲醇比例从55％上升到90％。

为了达到更好的分离的目的，所述缓冲盐为磷酸盐缓冲液。

另外，所述磷酸盐缓冲液为磷酸二氢铵缓冲液或磷酸二氢钾缓冲液。

为了避免堵塞仪器、分离效果变差或峰保留时间发生变化的情况发生，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.005mol/L～0.1mol/L。

进一步，所述磷酸盐缓冲液浓度为0.005mol/L～0.03mol/L。

为了避免pH过高导致主峰的峰型变差，所述缓冲盐的pH值为2.0～5.0。

优选地，所述反相色谱柱为反相C18 色谱柱或反相C8 色谱柱。

进一步，所述反相色谱柱内粒子内径为3.5μm。

优选地，所述反相色谱柱的柱温为20℃～40℃。

本发明具有以下优点及有益效果：

1、通过本发明的方法，可以同时分析(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯中的所有已知杂质，解决未知杂质对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的干扰，同时避免一般液相分析方法对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯降解产物缺少控制的缺点。

2、本发明采用甲醇和pH值为2～7的缓冲盐为流动相进行梯度洗脱方法进行HPLC检测，能够更全面有效地控制(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯原料及产品中的杂质，同时对(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯原料及降解产物进行有效分离，使所有杂质与主峰之间分离较好，且没有未知杂质干扰主峰，很好地控制产品的质量，进而为合成最终产品瑞舒他汀钙的质量提供保障，具有显著的进步。

3、本发明操作简单、重复性好，通过实施例具有较好的专属性。

附图说明

图1为实施例1的色谱条件图。

图2 为实施例2的色谱条件图。

图3 为最优色谱条件酸破坏图。

图4 为最优色谱条件碱破坏图。

图5 为最优色谱条件氧化破坏图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但本发明的实施方式并不限于此。

实施例1

本实施例所需的仪器与条件如下：

高效液相色谱仪：Agilent 1260LC，UV 检测器；

色谱柱： C18，4.6×250mm，3.5μm；

缓冲液：称取1.4g 磷酸二氢钾溶解于1L水中，用磷酸调pH 至2.2，过滤；

流动相：乙腈的磷酸缓冲液；流速：1.2mL/min；检测波长：220nm ；柱温：40℃；进样体积：20μL。

本实施例的操作步骤如下：

 (1) 取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品适量，用甲醇超声15min 溶解，配成浓度为0.5mg/mL的(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的样品溶液，离心，取上清液作为样品溶液。

(2) 取上述样品溶液20μL进样，以乙腈的磷酸缓冲液液作为流动相，按下述条件进行梯度洗脱，主要梯度描述如下：初始乙腈的浓度为45％；0～5min时，乙腈的比例从45％上升到55％；5～45min时，乙腈的比例从55％上升到90％。

记录色谱图，结果该色谱图有一未知杂质包裹在主峰中，其典型图谱见图1；其中，横坐标为时间，纵坐标为吸光度。

实施例2

本实施例所需的仪器与条件如下：

高效液相色谱仪：Agilent 1260LC，UV 检测器；

色谱柱： C18，4.6×250mm，3.5μm；

缓冲液：称取1.4g 磷酸二氢铵溶解于1L水中，用磷酸调pH 至2.4，过滤；

流动相：甲醇的磷酸缓冲液；流速：1.0mL/min；检测波长：220nm ；柱温：30℃；进样体积：20μL。

本实施例的操作步骤如下：

 (1) 取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品适量，用甲醇超声溶解，配成浓度为0.5mg/mL的(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯的样品溶液，离心，取上清液作为样品溶液。

(2) 取上述样品溶液20μL进样，以甲醇的磷酸缓冲液液作为流动相，按下述条件进行梯度洗脱，主要梯度描述如下：初始甲醇的浓度为45％；0～5min时，甲醇的比例从45％上升到55％；5～45min时，甲醇的比例从55％上升到90％。

记录色谱图，结果该色谱图未知杂质与主峰能够分开，各已知杂质与主峰分离度较好，其典型图谱见图2；其中，横坐标Minutes为时间，纵坐标AU为吸光度。

实施例3

本实施例所需的仪器与条件如下：

高效液相色谱仪：Agilent 1260LC，UV 检测器；

色谱柱： C18，4.6×250mm，3.5μm；

缓冲液：称取1.4g 磷酸二氢铵溶解于1L水中，用磷酸调pH 至2.4，过滤；

流动相：甲醇的磷酸缓冲液；流速：1.0mL/min；检测波长：220nm ；柱温：30℃；进样体积：20μL。

本实施例的操作步骤如下：

（1）配制碱破坏、酸破坏、氧化破坏的样品，

碱破坏：取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品适量至10mL 容量瓶中，加入1N 氢氧化钠溶液2mL，常温放置半小时，加1N 盐酸中和，用甲醇定容配置成浓度为0.5mg/mL的(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品溶液，过滤后，即作为碱破坏样品；

酸破坏：取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品适量至10mL 容量瓶中，加入1N 盐酸溶液2mL，60℃水浴1 小时，加1N 氢氧化钠溶液中和，用甲醇定容配置成浓度为0.5mg/mL的(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品溶液，过滤后，即作为酸破坏样品；

氧化破坏：取(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品适量至10mL 容量瓶中，加入30％双氧水2mL，常温放置半小时，用甲醇定容配置成浓度为0.5mg/mL的(3R)-叔丁基二甲硅氧基-5-氧代-6-三苯基膦烯己酸甲酯样品溶液，过滤后，即作为氧化破坏样品。

(2) 为了考察本发明方法的专属性，将碱破坏、酸破坏、氧化破坏的样品溶液分别进样，以甲醇的磷酸缓冲液作为有机相，进样20μL，按下述条件进行梯度洗脱，主要梯度描述如下：初始甲醇的浓度为45％；0～5min时，甲醇的比例从45％上升到55％；5～45min时，甲醇的比例从55％上升到90％。

记录色谱图，其中，图3为酸破坏后的样品溶液的色谱图，图4为碱破坏后的样品溶液的色谱图，图5为氧化破坏后的样品溶液的色谱图；横坐标Minutes为时间，纵坐标AU为吸光度。结果显示：该色谱图主峰后未知杂质与主峰能够分开，各已知杂质与主峰分离度较好，进而证明本发明的方法专属性较好。

如上所述，便可以较好的实现本发明。