一种大量制备2-O位脱硫酸基酶、3-O位硫酸基转移酶的方法

摘要

本发明利用实验室保藏的分别携带2-O位脱硫酸化酶基因、3-O位硫酸基转移酶基因的两种质粒，首先通过转化得到重组工程菌；然后在摇瓶中优化了重组菌的生长和诱导产酶等条件，得到大量的2-O位脱硫酸化酶与3-O位硫酸基转移酶；最后将粗酶通过镍柱(Ni-NTA Agarose Fast Flow)进行纯化，快速得到了纯度高达90％的纯酶。在摇瓶优化的基础上，进行高密度发酵，采用提高单位体积菌体浓度的方法进一步提高了两种酶的产量，能够极大地降低两种酶的生产成本，使工业化成为可能，为我们探索和研究肝素多糖的构效关系、硫酸乙酰肝素的作用奠定基础。