一种以茎尖和茎段为外植体的黄连木快速高效生根方法

摘要

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种以茎尖和茎段为外植体的黄连木快速高效生根方法。在本发明中，接种培养的具体操作是将消毒漂洗后的种子接种在不加任何激素的MS培养基上，培养条件为温度20-30℃，光照强度1500-2500lx，光照时间14h/d；外植体培养的具体操作是取黄连木无菌实生幼苗，将超净工作台上剪下的茎尖和茎段接种在加有1/2WPM无机盐、MS有机物、1.0mg/LIBA、0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.8g/L琼脂粉的pH为5.8的生根培养基上。通过采用本发明使黄连木的生根时间进一步缩短，得到了一种快速、高效、高质、适用范围广的黄连木生根方法。

说明书

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种以茎尖和茎段为外植体的黄连木快速高效生根方法。

背景技术

黄连木(Pistacia chinensis Bunge)雌雄异株，又名楷木、楷树等，属于漆树科黄连木属落叶乔木。它耐干旱、盐碱、瘠薄，适应性强，分布范围广，是一种优良的绿化、用材、观赏、药用和油料树种。鲜叶可提取芳香油，具有清热解毒等药效。根、茎、叶、树皮、叶均可入药。叶片、种子及树皮等富含单宁，是制取栲胶的上好原料。雌雄株具有不同的经济价值，雄株木材坚韧致密、纹理细密、耐腐蚀性强，可作建筑、家具及雕刻用材。雌株果实含油量35%，种子含油量40%，种仁含油量56%，是制取生物柴油的上佳原料，已被专家列为未来20年最具有发展潜力的生物柴油原料树种之一，对解决目前及将来的能源危机具有重要的作用。

目前，黄连木主要通过播种、扦插和嫁接繁殖，远远不能满足国内外对黄连木种苗的巨大需求。黄连木组培快繁技术的应用能够为生产上提供大量优质的种苗，其中黄连木组培苗生根是黄连木成长为实生苗必不可少的步骤，而黄连木组培苗生根的快慢和生根率的高低，标志着实验的成败。目前学术界对黄连木组培快繁的研究日益增多，比如程世平、施江等采用1/2 WPM＋1.0 mg/L IBA＋0.2 mg/L NAA作为生根培养基，培养35天，生根率达100%。何敬房等采用1/2 DKW＋6.0 mg/L IBA作为生根培养基，培养30天，生根率达91.15%。郭玉霞等人采用MS＋10.0 mg/L IBA＋3.0 mg/L IAA＋30 g/L蔗糖＋4 g/L琼脂作为生根培养基，培养30天，生根率达60%以上。然而，其生根质量、对材料的适应性、缩短生根时间方面有待提高。

发明内容

本发明的目的在于找到一种简单、方便且能够使黄连木快速高效生根的方法。

本发明所采用的技术方案是，一种以茎尖和茎段为外植体的黄连木快速高效生根方法，包括以下步骤：

（1）选材：选取当年九月下旬至十月上旬的成熟饱满的黄连木种子；

（2）消毒处理:先去掉黄连木种子外面的硬壳，然后将种子放在75%的乙醇溶液中浸泡30秒，用无菌水洗涤3-5次，再将种子放在0.1%的升汞溶液中浸泡8-10分钟，期间不停的摇动，用无菌水洗涤3-5次；

（3）接种培养：将消毒漂洗后的种子接种在不加任何激素的MS培养基上，培养条件为温度20-30℃，光照强度1500-2500 lx，光照时间14 h/d，获得黄连木无菌实生苗；

（4）外植体培养：取生长30天的黄连木无菌实生幼苗，在超净工作台上剪下茎尖和茎段，将茎尖和茎段接种在加有WPM中无机盐的1/2、MS中的有机物、1.0 mg/L IBA、0.2 mg/L NAA、30 g/L蔗糖和6.8 g/L琼脂粉的pH为 5.8的生根培养基上，外植体6天即有小白根长出，培养25天后，生根完成，即得完整的黄连木无菌幼苗。  

本发明的有益效果是：在初代培养过程中，以WPM为基本的培养基效果很好，MS培养基效果要差很多；在种子萌发及幼苗生长过程中，MS培养基比WPM培养基好许多。本发明通过从WPM和MS培养基中选取有效成分，优化配比，再与其它培养基成分混合，结合了WPM和MS这两种培养基的优点，使黄连木的生根时间进一步缩短，得到了一种快速、高效、高质、适用范围广的黄连木生根方法。

附图说明

图1为采用本发明的黄连木组培苗30天生根情况。

具体实施方式

下面对本发明的实施例做详细说明：本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

一种以茎尖和茎段为外植体的黄连木快速高效生根方法，包括以下步骤：

（1）选材：选取成熟饱满的黄连木种子；

（2）消毒处理:先去掉黄连木种子外面的硬壳，然后将种子放在75%的乙醇溶液中浸泡30秒，用无菌水洗涤4次，再将种子放在0.1%的升汞溶液中浸泡9分钟，期间不停的摇动，用无菌水洗涤4次；

（3）接种培养：将消毒漂洗后的种子接种在不加任何激素的MS培养基上，培养条件为温度25℃，光照强度2000 lx，光照时间14 h/d，获得黄连木无菌实生苗；

（4）外植体培养：取生长30天的黄连木无菌实生幼苗，在无菌台上剪下茎尖和茎段，将茎尖和茎段接种在加有1/2 WPM无机、MS有机、1.0 mg/L IBA、0.2 mg/L NAA、30 g/L蔗糖和6.8 g/L琼脂粉的pH为 5.8的生根培养基上，外植体6天即有小白根长出，培养25天后，生根完成，即得完整的黄连木无菌幼苗，25天统计生根率即达100%，达到了快速高效生根的目的。   

图1为采用本发明的黄连木组培苗30天生根情况。

上述实施例结果表明：本发明是一种有效的黄连木快速高效生根方法，采用本发明培养的黄连木具有生根快、生根率高的优势。