法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2014-04-23
授权
授权
2013-02-20
实质审查的生效 IPC(主分类):A61K36/8888 申请日:20121017
实质审查的生效
2013-01-09
公开
公开
技术领域
本发明属中药技术领域，涉及治疗肾病的药物组合物，特别涉及可用于用于慢性肾功能衰竭和腹膜纤维化的药物组合物。本发明还涉及所述药物组合物的制备方法，以及该药物组合物的用途。
背景技术
慢性肾功能衰竭是临床常见的难治病症，目前治疗方法以控制原发病、保护残余肾单位功能为主要目标，至终末期西医治疗多采用肾透析及肾移植，虽可使部分患者的病情暂时减轻和少数患者完全缓解，但由于费用昂贵、副作用多、移植肾存活时间及供肾来源有限及西药仅有少数对症药物等原因，导致至今尚无从根本上改善和恢复肾功能损害的办法，因此视本病为“慢性进行性不可逆转的病变”。近年来，应用中医药治疗慢性肾功能衰竭取得了肯定的疗效，运用中医疗法，针对慢性肾功能衰竭存在的各种症状、体征，发挥中医辨证论治整体调节的优势及时加以纠正，能使部分患者的肾功能得到一定程度的改善和恢复。
腹膜透析(PD)作为一种有效的肾脏替代治疗手段，以其对残余肾功能的保护明显优于常规的血液透析，在肾脏替代治疗中有着重要的地位。腹膜透析能否长期而有效地进行，很大程度上取决于腹膜能否持续保持正常的生理学和生物学功能。随着腹膜透析患者寿命的延长，腹膜功能衰竭和/或腹膜纤维化已成为导致腹透技术性失败的最重要的原因，并成为制约腹膜透析发展的“瓶颈”。
近几年，已有大量中药制剂用于防治腹膜纤维化的研究，其中川芎嗪可能通过保护腹膜间皮细胞，抗炎、抗凝、抗纤维化而改善腹膜结构，增加超滤，提高透析效能。中药腹腔内用药国内有少量文献报道，主要集中在益气和活血化瘀类药，如黄芪、丹参、当归、川芎等。在动物和人类的腹膜透析中观察到它们能提高腹膜透析效能、促进腹膜对小分子物质清除、增加超滤量和改善腹膜功能，但其药理学机制目前尚不清楚，对腹膜间皮细胞的影响报道较少。以往防治腹膜纤维化、硬化的临床与实验研究，大多是在腹透液中加入某种药物或改变腹透液的成分。但加入的药物可能作为一种新的生物不相容性刺激原进而导致新的腹膜纤维化的发生。口服给药途径，以其经过人体吸收代谢后，使药物具有一定的生物相容性，并直达病所发挥治疗作用，不但避免了药物对腹膜间皮细胞的直接刺激，并可发挥中药独有的抗纤维化、硬化的优势。
因此，本领域仍然需要有新的治疗肾病特别是用于治疗慢性肾功能衰竭，以及预防或治疗腹膜纤维化的方法。
发明内容
本发明的目的在于为临床提供治疗肾病特别是用于治疗慢性肾功能衰竭，以及预防或治疗腹膜纤维化的方法。本发明人发现以黄芪等为中药组方制成的药物组合物可以有效地用于治疗慢性肾功能衰竭，以及预防或治疗腹膜纤维化。本发明基于此发现而得以完成。
为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，其是由包括下列的中药材制备得到：当归、陈皮、熟军、黄芪、半夏、仙灵脾、丹参、鬼箭羽。在本发明中，仙灵脾亦称淫羊藿。
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中陈皮的量为2-75重量份、3-50重量份、4-40重量份、5-30重量份、5-20重量份、5-15重量份、8-12重量份、或约10重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中熟军的量为2-75重量份、3-50重量份、4-40重量份、5-30重量份、5-20重量份、5-15重量份、8-12重量份、或约10重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中黄芪的量为2-150重量份、3-125重量份、4-100重量份、5-75重量份、6-50重量份、7-40重量份、8-30重量份、10-20重量份、12-18重量份、或约15重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中半夏的量为2-150重量份、3-125重量份、4-100重量份、5-75重量份、6-50重量份、7-40重量份、8-30重量份、10-20重量份、12-18重量份、或约15重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中仙灵脾的量为2-150重量份、3-125重量份、4-100重量份、5-75重量份、6-50重量份、7-40重量份、8-30重量份、10-20重量份、12-18重量份、或约15重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中丹参的量为2-250重量份、3-200重量份、4-175重量份、5-150重量份、10-100重量份、15-75重量份、20-50重量份、25-40重量份、或约30重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物组合物的一个实施方案中，其中鬼箭羽的量为2-250重量份、3-200重量份、4-175重量份、5-150重量份、10-100重量份、15-75重量份、20-50重量份、25-40重量份、或约30重量份。
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：当归10重量份、陈皮10重量份、熟军10重量份、黄芪15重量份、半夏15重量份、仙灵脾15重量份、丹参30重量份、鬼箭羽30重量份。
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：当归10重量份、陈皮8重量份、熟军12重量份、黄芪18重量份、半夏12重量份、仙灵脾15重量份、丹参25重量份、鬼箭羽35重量份。
根据本发明第一方面的药物组合物，其是由包括下列配比的中药材制备得到：当归10重量份、陈皮12重量份、熟军8重量份、黄芪15重量份、半夏18重量份、仙灵脾12重量份、丹参35重量份、鬼箭羽25重量份。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中各药材是以药材直接入药或者是经提取后加入到所述药物组合物中的。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中各药材是经提取后加入到所述药物组合物中的。在一个实施方案中，所述各药材是经各自独立地或者一起经提取后加入到所述药物组合物中的。在一个实施方案中，所述各药材是一起经提取后加入到所述药物组合物中的。在一个实施方案中，所述各药材是一起经水煎方式提取后加入到所述药物组合物中的。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中还可以包括药学可接受的载体。
根据本发明第一方面的药物组合物，其基本上是按如下方法制备的：将各药材直接粉碎成粉末，混合均匀，任选地加入药学可接受的载体，即得。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中包括各药材的提取物，以及任选的药学可接受的载体。
根据本发明第一方面的药物组合物，其基本上是按如下方法制备的：将各药材用提取溶剂提取，所得提取物直接包装，即得。
根据本发明第一方面的药物组合物，其基本上是按如下方法制备的：
(a)将各药材用提取溶剂提取；
(b)对提取液进行浓缩，制成稠膏，或者进一步干燥成固体物；
(c)将步骤(b)所得稠膏或者固体物直接包装，即得；或者任选地加入药学可接受的载体，即得。
在本发明中，各药材单独或者一起经提取工艺得到可直接用于制备制剂(即不再进行提取操作)的任何形式的产物(例如是提取液、稠膏、干燥颗粒或粉末等，它们尚未加入药用辅料)，可以统称为提取物，例如上述的稠膏或固体物均可称为提取物。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述提取溶剂是水、乙醇、或乙醇水溶液。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水、乙醇、或乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1~5次(例如2~3次)，每次0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.1~1.5(25°C)(例如1.2~1.4)的稠膏，干燥，即得。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；过滤，滤液减压浓缩，干燥，即得。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；过滤，滤液减压浓缩成膏状；用2-5倍量50~90%的乙醇回流提取2-3次，将乙醇提取液于70-90°C除乙醇，真空干燥，即得。
根据本发明第一方面的药物组合物，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；水煎液浓缩至相对密度为1.1~1.5(25°C)(例如1.2~1.4)，加95%乙醇至乙醇浓度达到70%，放置过夜，过滤，浓缩滤液，干燥，即得。
本发明第二方面还提供了下列药材组合在制备用于预防、改善或治疗肾脏疾病或病症的药物中的用途：当归、陈皮、熟军、黄芪、半夏、仙灵脾、丹参、鬼箭羽。
本发明第二方面还提供了下列药材组合在制备用于预防、改善或治疗肾病及其并发症或症状的药物中的用途：当归、陈皮、熟军、黄芪、半夏、仙灵脾、丹参、鬼箭羽。所述肾病及其并发症或症状例如但不限于慢性肾功能衰竭、腹膜纤维化、因外在因素(例如腹膜透析)所致腹膜纤维化、肾功能减退、因肾病所致水、电解质和酸碱平衡失调。
本发明第二方面还提供了下列药材组合在制备用于治疗慢性肾功能衰竭和/或预防或治疗腹膜纤维化的药物中的用途：当归、陈皮、熟军、黄芪、半夏、仙灵脾、丹参、鬼箭羽。
本发明第二方面还提供了下列药材组合在制备用于改善腹膜透析患者生存质量和/或延缓腹膜纤维化的发生发展的药物中的用途：
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中陈皮的量为2-75重量份、3-50重量份、4-40重量份、5-30重量份、5-20重量份、5-15重量份、8-12重量份、或约10重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中熟军的量为2-75重量份、3-50重量份、4-40重量份、5-30重量份、5-20重量份、5-15重量份、8-12重量份、或约10重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中黄芪的量为2-150重量份、3-125重量份、4-100重量份、5-75重量份、6-50重量份、7-40重量份、8-30重量份、10-20重量份、12-18重量份、或约15重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中半夏的量为2-150重量份、3-125重量份、4-100重量份、5-75重量份、6-50重量份、7-40重量份、8-30重量份、10-20重量份、12-18重量份、或约15重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中仙灵脾的量为2-150重量份、3-125重量份、4-100重量份、5-75重量份、6-50重量份、7-40重量份、8-30重量份、10-20重量份、12-18重量份、或约15重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中丹参的量为2-250重量份、3-200重量份、4-175重量份、5-150重量份、10-100重量份、15-75重量份、20-50重量份、25-40重量份、或约30重量份。
在上述以10重量份当归计制备得到的药物的一个实施方案中，其中鬼箭羽的量为2-250重量份、3-200重量份、4-175重量份、5-150重量份、10-100重量份、15-75重量份、20-50重量份、25-40重量份、或约30重量份。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：当归10重量份、陈皮10重量份、熟军10重量份、黄芪15重量份、半夏15重量份、仙灵脾15重量份、丹参30重量份、鬼箭羽30重量份。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：当归10重量份、陈皮8重量份、熟军12重量份、黄芪18重量份、半夏12重量份、仙灵脾15重量份、丹参25重量份、鬼箭羽35重量份。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物是由包括下列配比的中药材制备得到：当归10重量份、陈皮12重量份、熟军8重量份、黄芪15重量份、半夏18重量份、仙灵脾12重量份、丹参35重量份、鬼箭羽25重量份。
根据本发明第二方面的用途，其中各药材是以药材直接入药或者是经提取后加入到所述药物中的。
根据本发明第二方面的用途，其中各药材是经提取后加入到所述药物中的。在一个实施方案中，所述各药材是经各自独立地或者一起经提取后加入到所述药物中的。在一个实施方案中，所述各药材是一起经提取后加入到所述药物中的。在一个实施方案中，所述各药材是一起经水煎方式提取后加入到所述药物中的。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物中还可以包括药学可接受的载体。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物基本上是按如下方法制备的：将各药材直接粉碎成粉末，混合均匀，任选地加入药学可接受的载体，即得。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物包括各药材的提取物，以及任选的药学可接受的载体。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物基本上是按如下方法制备的：将各药材用提取溶剂提取，所得提取物直接包装，即得。
根据本发明第二方面的用途，其中所述药物基本上是按如下方法制备的：
(a)将各药材用提取溶剂提取；
(b)对提取液进行浓缩，制成稠膏，或者进一步干燥成固体物；
(c)将步骤(b)所得稠膏或者固体物直接包装，即得；或者任选地加入药学可接受的载体，即得。
根据本发明第二方面的用途，其中所述提取溶剂是水、乙醇、或乙醇水溶液。
根据本发明第二方面的用途，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水、乙醇、或乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1~5次(例如2~3次)，每次0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.1~1.5(25°C)(例如1.2~1.4)的稠膏，干燥，即得。
根据本发明第二方面的用途，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；过滤，滤液减压浓缩，干燥，即得。
根据本发明第二方面的用途，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；过滤，滤液减压浓缩成膏状；用2-5倍量50~90%的乙醇回流提取2-3次，将乙醇提取液于70-90°C除乙醇，真空干燥，即得。
根据本发明第二方面的用途，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；水煎液浓缩至相对密度为1.1~1.5(25°C)(例如1.2~1.4)，加95%乙醇至乙醇浓度达到70%，放置过夜，过滤，浓缩滤液，干燥，即得。
本发明第三方面提供了制备本发明第一方面所述药物组合物的方法，其包括如下步骤：将各药材粉碎，所得粉末直接作为药物组合物或者任选地与药学可接受的载体混合后形成药物组合物；或者，将各药材粉碎，所得粉末经提取得到提取物，该提取物直接作为药物组合物或者任选地与药学可接受的载体混合后形成药物组合物。
根据本发明第三方面的方法，其中各药材是经提取后加入到所述药物组合物中的。在一个实施方案中，所述各药材是经各自独立地或者一起经提取后加入到所述药物组合物中的。在一个实施方案中，所述各药材是一起经提取后加入到所述药物组合物中的。在一个实施方案中，所述各药材是一起经水煎方式提取后加入到所述药物组合物中的。
根据本发明第三方面的方法，其中所述药物组合物基本上是按如下方法制备的：将各药材直接粉碎成粉末，混合均匀，任选地加入药学可接受的载体，即得。
根据本发明第三方面的方法，其中所述药物组合物包括各药材的提取物，以及任选的药学可接受的载体。
根据本发明第三方面的方法，其中所述药物组合物基本上是按如下方法制备的：将各药材用提取溶剂提取，所得提取物直接包装，即得。
根据本发明第三方面的方法，其中所述药物组合物基本上是按如下方法制备的：
(a)将各药材用提取溶剂提取；
(b)对提取液进行浓缩，制成稠膏，或者进一步干燥成固体物；
(c)将步骤(b)所得稠膏或者固体物直接包装，即得；或者任选地加入药学可接受的载体，即得。
根据本发明第三方面的方法，其中所述提取溶剂是水、乙醇、或乙醇水溶液。
根据本发明第三方面的方法，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水、乙醇、或乙醇水溶液煎煮和/或回流提取1~5次(例如2~3次)，每次0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)，合并煎液，过滤，滤液减压浓缩至相对密度为1.1~1.5(25°C)(例如1.2~1.4)的稠膏，干燥，即得。
根据本发明第三方面的方法，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；过滤，滤液减压浓缩，干燥，即得。
根据本发明第三方面的方法，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；过滤，滤液减压浓缩成膏状；用2-5倍量50~90%的乙醇回流提取2-3次，将乙醇提取液于70-90°C除乙醇，真空干燥，即得。
根据本发明第三方面的方法，其中所述提取物是按照包括如下步骤的方法制备的提取物：取各药材，粉碎，加5~20倍(例如5~15倍，例如8~12倍)的水，在80~100°C左右煎煮提取0.5~5小时(例如0.5~3小时，例如1~3小时)；水煎液浓缩至相对密度为1.1~1.5(25°C)(例如1.2~1.4)，加95%乙醇至乙醇浓度达到70%，放置过夜，过滤，浓缩滤液，干燥，即得。
本发明第四方面提供了治疗慢性肾功能衰竭，和/或预防或治疗腹膜纤维化的方法，该方法包括给有需要的哺乳动物施用有效量的本发明第一方面的药物组合物。
本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。
本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。
在本发明中，术语“药物组合物(其在本发明中亦可称为“组合物”)”或者“药物”，其呈口服或注射给药的制剂形式。在一个实施方案中，所述药物组合物呈片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液剂、注射剂(水针和/或粉针)等的形式。
在本发明中，术语“提取”可以是常温下的浸渍，或者是在升高的温度下的提取(例如煎煮和/或回流)，或者这些操作方式的结合。还可以进一步包括对提取物进行进一步处理，例如进一步进行纯化，例如除溶剂、沉淀除杂质、溶剂萃取、树脂吸附分离等。
如本文所述的，术语“提取物”将包括可用于实现本发明目的的任何纯度的提取物，本领域技术人员根据本发明精神可以理解本发明提取物的提取纯度可以在较大的范围内变化。例如本发明各药材提取获得的提取物，根据不同的工艺条件的差异，1kg总药材经提取可得到10g至500g之间任一量(例如10g至200g，例如20g至200g，例如50g至200g)亦即不同纯度的提取物，本领域技术人员可根据不同需要，使用不同纯度的提取物来调配适合需要的组合物。在本发明的一些实施方案中，所述的提取物可以称为浸膏粉。
在本发明中，可以使用有效量的本发明组合物施用于有需要的受试个体。如本文所述的，术语“有效量”是指可在受试者中实现预防和/或治疗本发明所述状况、障碍、病症或疾病的目的剂量。本领域技术人员根据本发明上下文，可以容易地确定本发明组合物的使用剂量。特别地，本据本发明，术语“有效量”可以理解为本发明组合物以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗和/或预防所述状况、障碍、病症或疾病的足够量。但应认识到，本发明组合物的总日用量可以由本领域技术人员在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的受试者，具体的预防有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体组合物；与本发明组合物组合使用或同时使用的其它治疗活性物质；及医疗领域公知的类似因素。
本发明提供包含与一种或多种无毒生理学可接受的载体配制在一起的组合物。所述组合物可特别专门配制成以固体或液体形式供口服施用或供直肠施用，或者配制成供注射施用。
供口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在此类固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性的生理学可接受赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘合剂如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶；c)保湿剂如甘油；d)崩解剂如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂如石蜡；f)吸收加速剂如季铵化合物；g)湿润剂如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；h)吸附剂如高岭土和膨润土以及i)润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠和它们的混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型中也可包含缓冲剂。
供口服施用的液体剂型包括生理学可接受的乳剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂和酏剂。液体剂型除含有活性组分外还可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(特别是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯及它们的混合物。
在本发明的一个实施方案中，每一单次剂量的药物组合物是由如下份量的药材经水煎、浓缩的过程制备得到的：当归10g、陈皮10g、熟军10g、黄芪15g、半夏15g、仙灵脾15g、丹参30g、鬼箭羽30g。
可以将本发明第一方面所述的药物组合物制备成颗粒剂，其中可以任选地加入药学可接受的辅料。在本发明中，可以将该颗粒剂称为扶肾颗粒。
本发明人通过临床研究发现，服用中药扶肾颗粒的腹膜透析患者出现超滤下降、营养不良以及腹膜炎的发生率远远小于未服用中药的患者。腹膜透析相关性腹膜纤维化的发生基础是尿毒症，其病机特点为本虚标实，即在脾肾亏虚、气血不足的基础上同时存在湿、毒、瘀、热等病理因素。此外，因长期使用葡萄糖透析液，对于腹膜的影响接近糖尿病，即阴虚与湿、毒、瘀、热并见。因此，根据二者共有的病理因素进行研究，选择一种有效的中药制剂，对于干预腹膜透析相关腹膜纤维化的发生必定会有特殊的收益。
因此，我们针对腹膜纤维化这一导致长程腹透患者超滤衰竭的根本因素，发挥中医药特色，应用中医药进行深入研究，以探索中药干预腹膜纤维化的相关细胞因子作用的机理，开发非腹腔给药防治腹透相关的腹膜纤维化的中药复方制剂。
腹膜透析患者多由慢性肾衰所致，其病程迁延，至腹膜透析阶段多正气不足，邪实留恋，故遣药组方时必须慎重，因为益气之品多属甘温，有助热之嫌；养阴之品多有滋腻，有生湿恋邪之弊，且甘温、滋腻又易阻遏气机。而通腑泄浊，活血化瘀之品多具有苦寒辛通之性，用之不当易于伤阴耗气。所以配伍用药时必须遵循祛邪而不伤正，扶正而不留邪的组方原则。
在本发明中，以扶肾颗粒为典型的药物组合物的药物组成、方解和药理作用可以说明如下：
(1)扶肾颗粒主要由黄芪、当归、陈皮、半夏、熟军、丹参等中药组成，遣方以补益脾肾、益气养血组药物为君药；活血化瘀、祛邪解毒组药物为臣药；另以和中降浊组药物共为佐使，主要合用共奏益气养血、化瘀解毒、和中降逆之功。具有益气养血、和中降浊、活血解毒功能。该处方经临床及实验研究证实可改善肾功能及诸多肾功能衰竭所引起的临床症状、体征，同时，对于改善腹膜透析患者生存质量，延缓腹膜透析患者腹膜纤维化发生均有明确疗效，且安全性良好。
(2)方中黄芪以补虚为主，被《神农本草经》列为上品。常用于体衰日久、言语低弱、脉细无力者。《本草逢原》载“黄芪能补五脏诸虚，治脉弦自汗，泻阴火，去肺热，无汗则发，有汗则止。”黄芪具而补而不腻的特点。当归性温，味甘、辛。具有补血活血，调经止痛，润肠通便之功效。《本草正》：“当归，其味甘而重，故专能补血，其气轻而辛，故又能行血，补中有动，行中有补，诚血中之气药，亦血中之圣药也。大约佐之以补则补，故能养营养血，补气生精，安五脏，强形体，益神志，凡有形虚损之病，无所不宜。佐之以攻则通，故能祛痛通便，利筋骨，治拘挛、瘫痪、燥、涩等证。”合用共为君药，以补五脏之气血亏虚，以扶助肾气。
(3)慢性肾功能衰竭以虚为本，但多又同时兼见中焦脾胃失和，浊邪内蕴，故又遣陈皮、半夏2品。陈皮味辛、苦，性温，入脾、肺经，具有“理气健脾，燥湿化痰”的功效。《本草纲目》云:“同补药则补，同泻药则泻，同升药则升，同降药则降。脾乃原气之母，肺乃摄气之签，故橘皮为二经气分之药，但随所配而补泻升降也。”半夏首载于《神农本草经》，被列为下品。其性温，味辛，有毒，归脾、胃、肺经。具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效。合用共为臣药，以和中降浊，辅君药治病变之本。
(4)本病病程迁延，属久病入络，其实质是指一些久病难愈之顽症，治疗需应用通络法，即疏通络道之法。选用去瘀生新之丹参，该药苦，微寒，入心肝肾三经，具有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦之功。丹参始载于《神农本草经》，列为上品。《本经》云：丹参“主心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚，破症除瘕，止烦满，益气。”大黄，性苦，寒。归脾、胃、大肠、肝、心包经。具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经的作用。《别录》“平胃，下气，除痰实，肠间结热，心腹胀满，女子寒血闭胀，小腹痛，诸老血留结。”《日华子本草》“通宣一切气，调血脉，利关节，泄塑滞、水气，四肢冷热不调，温瘴热痰，利大小便，并敷一切疮疖痈毒。”熟大黄泻下力缓，偏重泻火解毒。二药并用，共奏佐使之功，针对久病入络顽痰死血留而不成之病机，以祛瘀生新，通腑泄浊。
(5)诸药合用，既能补充脾肾等脏之不足以扶正，又能清除体内的湿浊、瘀血等病邪以祛邪，从而达到扶正祛邪，标本兼治之目的。
在本发明中，以扶肾颗粒为典型的药物组合物的现代药理分析可以说明如下：
(a)黄芪属扶正固本、补中益气类中药，黄芪对慢性肾衰的治疗作用是多方面的，综合性的。黄芪含香豆素、黄酮类化合物、皂甙及微量叶酸和数种维生素。现代医学研究表明，黄芪内含而多种抗菌有效成分，而且能增强机体的免疫功能，因此还能用于预防某些传染病的发生。许多研究阐释了黄芪提取成分对于肾小球硬化的防治方面，并认为其对于肾小管间质的损伤可能的机制是：(1)下调肾小管及间质单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达，从而直接减轻单核巨噬细胞等炎症细胞在肾小管、间质的聚集、活化，减轻RIF-3；(2)使肾小管间质TGF-β1及βig-h3(TGF-β1的下游分子及活化指标，现证实其为一种ECM成分)蛋白和mRNA表达明显下调24；(3)诱导增加人肾间质成纤维细胞表达肝细胞生长因子受体C-met，从而发挥保护肾小管、抗RIF的作用。
(b)当归，含基本内酯、正丁烯酰内酯、阿魏酸、烟酸、蔗糖和多种氨基酸，以及倍半萜类化合物等。在对二药共用的相关研究通过动物实验观察复方中药黄芪当归合剂的抗纤维化治疗作用，认为该药在疾病过程中的起效时间及不同阶段的主要作用环节是从病变早期开始，可通过减少炎症细胞反应和TGF-β1表达分泌，减少肾脏固有细胞转化、分化及细胞外基质成分沉积，减轻肾间质纤维化而改善肾功能。
(c)陈皮、半夏为临床常用药对。陈皮为芸香科植物橘及其同属植物的干燥成熟果皮，性温味辛苦，具有理气健脾、燥湿化痰之功效，主要成分有川陈皮素、橙皮苷，陈皮挥发油中含柠檬烯等。半夏为天南星科植物半夏的块茎，性温味辛、有毒，具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结等功效，主要成分有胆碱、β-谷甾醇-D-葡萄糖甙，水解后得麻黄碱、多糖、半夏蛋白、鞣质等成分，从半夏中还可分离出葡聚糖。陈皮和半夏具有某些相似或相近的药理作用，且又能相互补充。二者均有祛痰镇咳平喘、抗炎、抗溃疡、增强免疫功能、利胆等作用，且对心血管功能都有一定影响。陈皮提取物还可抑制胃肠蠕动、消除氧自由基、防止精子畸形；半夏炮制的各种制剂有一定的镇吐作用，此外半夏还有抗癌、促细胞分裂、抗白血病的作用，制半夏总碱提取物对慢性髓性白血病细胞的生长有抑制作用。
(d)丹参的水溶性成份对尿毒症毒素的重要物质—甲基胍具有显著的抑制作用。药理实验显示，该成份具有良好的提高ARF的大鼠肾小球、肾小管功能，提高肾组织SOO、CAT活性，抑制过氧化脂质的产生，据此推测该成份的作用机理可能与抗活性氧，提高活性氧消除酶活性有关，同时也提高了用清除活性氧的方法来治疗ARF这一方法的可能性。此外，丹参能通过改善毛细血管内外渗透压差而改善血流动力，降低血压，从而改善肾素-血管紧张素-醛固酮系统等来改善肾功能。丹参可以改善环孢素A诱导的大鼠肾小球滤过率下降，增加尿中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)的排泄，减低肾内TGF-β1的表达，从而减轻肾间质纤维化和小动脉病变。
(e)熟地黄含有梓醇、地黄素、甘露醇、维生素A类物质、糖类及氨基酸等。近两年研究进一步深入，已经证实大黄能有效防治慢性肾功能衰竭(CRF)，与其主要活性成分大黄酸、大黄素密切相关。大黄素能抑制肾间质成纤维细胞(RIFS)增殖，诱导其凋亡，并能抑制多种细胞生长因子及ECM成分；大黄酸能逆转TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞(RTEC)肥大，抑制其刺激的ECM合成，并能通过下调NF-KB(能诱导多种炎症反应启动因子表达)、Caspase-3活性，减轻RTEC凋亡；同时还可阻止TGF-β1诱导的RIFS增殖，并能抑制TGF-β1激活RIFS以及拮抗其导致的纤维连接蛋白(FN)的表达与合成。
在本发明中，以扶肾颗粒为典型的药物组合物经临床研究证实具有腹膜透析相关的腹膜纤维化，其可能作用机制为：①动葡萄糖透析液可诱导腹膜组织TGF-β1明显上调，腹膜TGF-β1高表达与腹膜透析腹膜纤维化密切相关，扶肾颗粒通过直接降低腹膜透析患者血清TGF-β1水平，延缓腹膜纤维化进程。②CTGF是介导TGF-β1促纤维化作用的一个重要的下游因子，且TGF-β1可使HPMC表达CTGF增加，CTGF的作用更加局限于纤维化的发生。扶肾颗粒通过抑制TGF-β1水平，间接抑制CTGF的生成和表达，延缓腹膜纤维化。③通过对炎症状态的改善，减低炎症因子IL-6的血清水平，抑制巨噬细胞等炎症细胞在腹膜聚集，抑制纤维化进程。④上调血清HGF水平，从而抑制TGF-β1的水平，同时降低细胞外基质的合成及抑制PAI-1的活性，防止了细胞外基质的积聚，防治腹膜纤维化。⑤上调血清BMP-7水平，拮抗TGF-β1表达，防治腹膜纤维化。
在本发明中，以扶肾颗粒为典型的药物组合物的治疗范围适用于慢性肾功能衰竭，临床疗效表现为减缓肾功能减退，纠正水、电解质和酸碱平衡失调。适用于终末期肾病腹膜透析患者，临床疗效表现为改善腹膜透析患者生存质量，延缓腹膜纤维化的发生发展。
本发明使用到的一些英文缩略词汇总如下：
附图说明
图1描述了大鼠腹膜病理形态观察结果。
具体实施方式
下面通过具体的实施例/实验例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例和实验例仅仅是用于更详细具体地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，在下文中，如果未特别说明，本发明所用材料和操作方法是本领域公知的。
A、制备实施例部分
实施例1：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮75g、熟军2g、黄芪150g、半夏2g、仙灵脾150g、丹参2g、鬼箭羽250g。
制法：取上述处方各药材，粉碎成粉末，装胶囊，每粒重0.3g，即得。
实施例2：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮2g、熟军75g、黄芪2g、半夏150g、仙灵脾2g、丹参250g、鬼箭羽2g。
制法：取上述处方各药材，粉碎成过80目筛的粉末，加入1/5重量份的蜂蜜，制成小丸，每丸约0.1g，即得。
实施例3：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮3g、熟军50g、黄芪5g、半夏75g、仙灵脾5g、丹参150g、鬼箭羽5g。
制法：取上述处方各药材，粉碎成粉末，装胶囊，每粒重0.3g，即得。
实施例4：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮50g、熟军3g、黄芪75g、半夏5g、仙灵脾75g、丹参5g、鬼箭羽150g。
制法：取上述处方各药材，粉碎成粉末，装胶囊，每粒重0.3g，即得。
实施例5：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮5g、熟军20g、黄芪8g、半夏30g、仙灵脾8g、丹参50g、鬼箭羽6g。
制法：取上述处方各药材，加8倍量的水煎1小时，过滤；滤渣再加5倍量的水煎1小时，过滤；合并煎液，浓缩至相对密度为1.15~1.25(25°C)，加入糖精钠0.1%，灌装至玻璃瓶中，即得。
实施例6：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮20g、熟军5g、黄芪30g、半夏8g、仙灵脾30g、丹参6g、鬼箭羽50g。
制法：取上述处方各药材，加8倍量的水煎1小时，过滤；滤渣再加5倍量的水煎1小时，过滤；合并煎液，浓缩至相对密度为1.15~1.25(25°C)，喷雾干燥，得浸膏粉，加入与该浸膏粉等重量的淀粉，混合均匀，装胶囊，即为本发明的药物组合物。
实施例7：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮5g、熟军5g、黄芪10g、半夏10g、仙灵脾10g、丹参25g、鬼箭羽25g。
制法：取上述处方各药材，加8倍量的水煎1小时，过滤；滤渣再加5倍量的水煎1小时，过滤；合并煎液，浓缩至相对密度为1.15~1.25(25°C)，加95%乙醇至醇浓度达70%，静置过夜，过滤，滤液喷雾干燥，得浸膏粉，加入该浸膏粉2倍重量的蔗糖，混合均匀，制粒，得到颗粒剂，即为本发明的药物组合物。
实施例8：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮15g、熟军15g、黄芪20g、半夏20g、仙灵脾20g、丹参40g、鬼箭羽40g。
制法：取上述处方各药材，加6倍量的水煎1小时，过滤；滤渣再加6倍量的水煎1小时，过滤；合并煎液，浓缩至相对密度为1.15~1.25(25°C)，喷雾干燥，得浸膏粉；取以上浸膏粉1份，加2份淀粉、2份微晶纤维素，混合均匀，装胶囊，即为本发明的药物组合物。
实施例9：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮10g、熟军10g、黄芪15g、半夏15g、仙灵脾15g、丹参30g、鬼箭羽30g。
制法：取上述处方各药材，加8倍量的水浸泡8小时，再煎2小时，过滤；滤渣再加6倍量的水煎1小时，过滤；合并煎液，浓缩至相对密度为1.15~1.25(25°C)，喷雾干燥，得浸膏粉，加入与该浸膏粉等重量的蔗糖，混合均匀，制粒，得颗粒剂，即为本发明的药物组合物。
实施例10：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮8g、熟军12g、黄芪18g、半夏12g、仙灵脾15g、丹参25g、鬼箭羽35g。
制法：照实施例9的方法制备得到颗粒剂，即为本发明的药物组合物。
实施例11：制备本发明药物组合物
配方：当归10g、陈皮12g、熟军8g、黄芪15g、半夏18g、仙灵脾12g、丹参35g、鬼箭羽25g。
制法：照实施例9的方法制备得到颗粒剂，即为本发明的药物组合物。
B、生物学试验例部分
在一些实验中，本发明人以本发明提供的药物组合物为试药，用于具有相应疾病或病症的志愿者。结果表明，本发明药物组合物可以有效地用于治疗慢性肾功能衰竭，以及预防或治疗腹膜纤维化。结果显示，本发明药物组合物可以适用于慢性肾功能衰竭，临床疗效表现为减缓肾功能减退，纠正水、电解质和酸碱平衡失调。结果还显示，本发明药物组合物可以适用于终末期肾病腹膜透析患者，临床疗效表现为改善腹膜透析患者生存质量，延缓腹膜纤维化的发生发展。
在下面试验例中，如未另外说明，使用的试药是实施例9所得浸膏粉(在本发明中亦可称为扶肾颗粒)，临用时用水溶解/混悬形成每1ml药液含生药量为2g的试药，供使用。
试验例1：扶肾颗粒对腹膜透析大鼠透析效能及腹膜纤维化影响的实验研究
一、材料与方法
1.材料和仪器
1.1实验动物：健康雄性SD大鼠75只，体重180-200g；大鼠饲养于动物实验科清洁级动物房；饲养条件：12h光照、室温24℃、45％相对湿度，整个实验过程大鼠的饮食及饮水不受限制；饲养员具有实验动物从业人员岗位证书。
1.2实验试剂：1.5%腹膜透析液、4.25%腹膜透析液(LPDS)，Baxter医疗有限公司生产；TGF-β1ELISA试剂盒、HGF ELISA试剂盒、CTGF ELISA试剂盒、BMP-7ELISA试剂盒、IL-6ELISA试剂盒、VEGF ELISA试剂盒：天津市灏洋生物科技有限公司生产。
2、实验方法
2.1实验分组：适应性饲养1周后，依大鼠体重分组，随机分为：
A组：正常对照组(n=15只)，
B组：肾衰5/6切除+1.5%PD组(n=15只)，
C组：肾衰5/6切除+1.5%PD+扶肾颗粒组(n=15只)，
D组：肾衰5/6切除+4.25%PD组(n=15只)，
E组：肾衰5/6切除+4.25%PD+扶肾颗粒组(n=15只)。
2.2动物模型制备
A组：正常对照组：无任何处理。腹腔注射生理盐水，100ml/kg/d，连续4周；
B组：肾衰5/6切除+1.5%PD组：行大鼠5/6肾切除法。实验总共分为两步，第一步：左肾2/3切除：1.腹腔麻醉：按10%的水合氯醛0.3ml/l00g大鼠体重行腹腔注射。2.麻醉成功后，俯卧位固定，由大鼠左侧背部肋下1cm与脊柱旁0.5cm交点处，逐层切开皮肤、肌肉，游离左肾，剥除肾包膜，依次于左肾上、下级各1/3处缝线结扎后切除，将切下的肾组织称重并记录。明胶海绵止血，确认无明显出血后，切口缝合。术后连续应用头孢唑林钠3天预防感染。第二步：右肾全切：左肾2/3切除术后一周进行。选择右侧切口，以同样的麻醉方式、同样的体位，于右肾门处结扎肾蒂，切除右肾。术后连续应用头孢唑林钠3天预防感染。术后六周采用大鼠眼眶后静脉丛采血法采血1-2ml，送检肾功能，确认模型制作成功。腹腔注射1.5％LPDS，100ml/kg/d，连续4周；
C组：肾衰5/6切除+1.5%PD+扶肾颗粒组：首先制作肾衰5/6切除模型(同上)。腹腔注射1.5％LPDS，100ml/kg/d，同时予灌服扶肾颗粒(5ml/kg/d)，连续4周；
D组：肾衰5/6切除+4.25%PD组：首先制作肾衰5/6切除模型(同上)。腹腔注射4.25%LPDS，100ml/kg/d，连续4周；
E组：肾衰5/6切除+4.25%PD+扶肾颗粒组：首先制作肾衰5/6切除模型(同上)。腹腔注射4.25%LPDS，100ml/kg/d，同时予灌服扶肾颗粒(5ml/kg/d，相当于10g生药/kg/d)，连续4周；
腹腔注射方法：以右下腹靠近腹股沟中点为穿刺点，针头与腹平面呈30-45°夹角向右腹背部进针，每次注射前均常规碘伏皮肤消毒2次并拭干，防止消毒液随针头进入腹腔。头低位，并向右侧略倾斜，使脏器向右上腹集中，以减少穿破内脏的机会。注射过程中留意有无注射到腹壁及有无肛门和尿道漏液。操作期间，注意更换注射部位，避免长时间同一部位注射，造成局部皮下硬结。对于各组所注射液体的处理，均采取腹腔内保留，不抽出。
2.3扶肾颗粒的制备与干预
2.3.1扶肾颗粒组成和制备：见实施例9。
扶肾颗粒的灌服：自透析开始，对C组和E组，予灌服扶肾颗粒，以每200g体重SD大鼠计算，灌胃剂量1ml/d。其余各组予灌服1ml生理盐水，共灌服4周。
2.4数据采集与标本留取
2.4.1记录造模初始及造模第4周末各组大鼠体重变化。各组大鼠于造模第4周末行腹膜功能试验，试验前48h停止腹膜透析。10%水合氯醛麻醉大鼠，腹腔注射4.25%透析液25ml，4h准确量取腹腔液体量。同时分别留取血和腹透液标本约0.5ml。将血、腹透液标本离心(1500r/min，5min)，用全自动生化分析仪测定葡萄糖浓度，计算每只大鼠的超滤量(UF)及葡萄糖转运量(MGT)。具体计算公式如下：
超滤量=(纱布吸水后的质量-纱布的质量)×1L/g+引流量-腹腔注射量
葡萄糖转运量(Mass transfer of glucose,MTG)=(透析液初始葡萄糖浓度×注入透析液体积)－(透析末葡萄糖浓度×终末透析液出量)mmol/kg。
2.4.2纤维化相关因子测定
a)样本处理：室温血液自然凝固10-20min，2000-3000r/min离心20min，收集上清标本。
b)标准品的稀释与加样：酶标包被板上设标准孔10孔，于第1、第2孔中分别加标准品100μl，而后于第1、第2孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第1、第2孔中各取100μl分别加到第3、第4孔，再在第3、第4孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后于第3、第4孔先各取50μl，混匀；混匀后从第5、第6孔各取50μl，分别加到第7、第8孔中，再从第7、第8孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；再从第7、第8孔分别取50μl，加到第9、第10孔，再从第9、第10孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第9、第10孔中各取50μl弃掉(稀释后各孔加样量均为50μl，浓度分别为120ng/L，80ng/L，40ng/L，20ng/L，10ng/L)。
c)加样：分别设置空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步骤操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻晃混匀。
d)温育：用封板膜封板后置37℃温育30min。
e)配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释备用。
f)洗涤：揭去封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30s后弃去，如此重复5次，拍干。
g)温育：同操作4。
h)洗涤：同操作5。
i)显色：每孔先加入显色剂A50μl，空白孔除外。
j)终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色转为黄色)。
k)测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在终止液后15min内进行。
2.5观察指标：观察各组实验动物的大体状态、体重变化、腹膜形态改变、腹膜滤过功能改变及血清纤维化调控因子表达变化。
3、统计学分析：使用SPSS11.5统计学软件，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，对数据进行统计分析。两样本均数的比较采用t检验。组间比较采用单因素方差分析。P<0.05差异有显著性。
二、结果
1．治疗后各组大鼠一般情况:A组大鼠精神状态良好，活动灵活，目光明亮有神，皮毛光亮润泽，饮食生长如常，大小便正常。其余各组大鼠均出现不同程度的生长迟缓，精神萎靡，倦怠多卧，目光晦暗呆滞，反应迟钝，皮毛枯槁无泽甚至脱落，摄食减少，尿少，大便稀等表现，但经透析治疗后2周左右各组均出现状态逐渐回升，活动增加，尿量增多，饮食增加等现象，B、C、D、E组大鼠状态未见明显差异。
2．治疗前后大鼠的体重变化见下表(均值±标准差，克)：
注：与同期A组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.01；与同期B组比较：ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与同期C组比较：◇P<0.05。
3．肾功能改变比较结果。
治疗前各组大鼠肾功能检测结果
注：与A组比较：＊＊P<0.01。提示造模成功。
治疗后各组大鼠肾功能检测结果
注：与A组比较：＊＊P<0.01；与B组比较：ΔP<0.05；与同期D组比较：◇P<0.05。
4．超滤量及葡萄糖转运量比较：透出液大体情况：各组模型大鼠均未实现正超滤，但均有不同程度的引流量。引流液体大致呈淡黄色，少数有淡红色甚至呈血性。比较各组动物滤过功能指标，超滤量与葡萄糖转运量比较情况
注：与A组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.01；与C组比较：●P﹤0.05；与E组比较：ΔP<0.05，ΔΔP<0.01。
5．腹膜病理形态学改变
5.1大鼠腹膜病理形态观察：见图1。如图所示，经HE染色，行病理形态学观察显示，A组壁层腹膜致密光滑，腹膜厚度无显著改变；各浓度模型组及干预组腹膜厚度不同程度增厚，腹膜增厚程度C组和E组轻，但B组及D组严重，且各组存在不同程度炎细胞浸润。
5.2大鼠腹膜厚度测量：对实验各组标本切片行Masson染色，随机选取上、下、左、右、中各2个高倍视野，测量其腹膜厚度，取其平均值作为壁层腹膜厚度。测量实验各组大鼠腹膜厚度，结果显示B组、D组及C组、E组腹膜平均厚度均较A组增加。其中，各模型组及E组腹膜厚度与A组具有显著性差异(P﹤0.01)。除B组与E组间比较无显著性差异(P>0.05)外，不同浓度模型与干预组间比较具显著性差异(P﹤0.01)。各组大鼠腹膜厚度变化比较
注：●与A组比较P﹤0.05，●●与A组比较P﹤0.01；○与B组比较P﹤0.05，○○与B组比较P﹤0.01；◆与D组比较P﹤0.05，◆◆与D组比较P﹤0.01；★与C组比较P﹤0.05，★★与C组比较P﹤0.01；
6．各组促腹膜纤维化相关细胞因子的改变
注：与A组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.01；与B组比较：ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与D组比较：☆P<0.05，☆☆P<0.01。
各组抑制腹膜纤维化相关细胞因子的改变
注：A组比较：＊P<0.05，＊＊P<0.01；与B组比较：ΔP<0.05，ΔΔP<0.01；与D组比较：☆P<0.05，☆☆P<0.01。
三、小结
1．一般情况及体重变化：实验过程中，在行左肾2/3切除术时，由于麻醉过量死亡大鼠1只，为B组，由于切除部位止血不彻底，失血性休克死亡大鼠1只，为E组。因腹腔注射误刺大血管死亡3只，其中B组1只，C组1只，E组1只；灌胃误入呼吸道，死亡1只，为E组。不明原因死亡(死因可能与严重肾衰导致的全身器官功能衰竭有关，经尸体解剖，未出现明显的感染迹象)6只，其中B组1只，C组1只，D组2只，E组2只。透析治疗及中药干预过程中，各组间大鼠整体状态方面未见明显差异。体重改变方面，各组大鼠体重均出现增长，但A组及D组、E组大鼠体重增长明显较其他组更快，考虑D组、E组大鼠体重增长明显较快可能与高浓度腹膜透析的应用有关。
2．肾功能改变：本课题实验研究结果表明：Scr方面，治疗后，各模型组Scr水平亦明显高于正常对照组(A组)P<0.01。同浓度透析治疗组中，应用扶肾颗粒干预组其Scr水平降低明显P<0.05，即C组、E组Scr水平明显较B组、D组低。亦说明透析的同时，应用扶肾颗粒能够降低透析大鼠Scr水平，增强透析效能，保护残余肾功能。BUN方面，治疗后，各模型组BUN水平仍明显高于正常对照组(A组)P<0.01，但E组BUN水平却明显高于D组P<0.05。说明透析的同时，应用扶肾颗粒能够降低透析大鼠BUN水平，增强透析效能，保护残余肾功能。
3．扶肾颗粒对腹膜透析效能的改变：超滤量及葡萄糖转运量是评价腹膜透析患者腹膜透析效能的重要指标，其与腹膜纤维化程度有直接关系。本研究结果显示，在治疗4周后，除正常对照组(A组)外，其余各组均体现为负超滤，但是，同浓度透析治疗组中，应用扶肾颗粒干预组其超滤情况明显优于未应用扶肾颗粒组P<0.05，其作用显著，同时，葡萄糖转运量方面亦体现为相似结果，提示扶肾颗粒对于改善腹膜透析效能，改善透析超滤，延缓腹膜纤维化具有明确作用。
4．扶肾颗粒对腹膜纤维化的影响
4.1治疗后各组病理形态学观察显示，A组壁层腹膜致密光滑，腹膜厚度无显著改变；其余腹膜厚度不同程度增厚，腹膜增厚程度由轻致重分别为C组、E组、B组及D组，且各组存在不同程度炎细胞浸润。测量各组大鼠腹膜平均厚度，结果各模型及干预组较A组腹膜平均厚度均明显增加。其中，各模型组及E组腹膜厚度与A组具有显著性差异。除B组与E组间比较无显著性差异外，不同浓度模型与干预组间比较具显著性差异。病理形态及腹膜厚度结果提示，不同浓度腹透液的应用均可引起不同程度的腹膜纤维化发生，且腹膜纤维化程度与腹透液浓度呈正比关系。经扶肾颗粒干预后腹膜纤维化进程出现明显差异，扶肾颗粒可在一定程度上延缓腹膜纤维化的发生进程。
4.2扶肾颗粒对腹膜纤维化相关细胞因子的影响：腹膜为天然半透膜，通过弥散、渗透、超滤等原理清除水分及毒素。超滤，即腹膜透析时水分由血液侧向透析液侧转移的过程，为腹膜透析清除体内水分的主要机制。该功能丧失即称为超滤衰竭。2000年国际腹膜透析协会委员会建议采用标准化的测验定义该概念，即应用4.25%葡萄糖透析液留腹4小时后，若净超滤量小于400ml，即认为发生了超滤衰竭。超滤衰竭是长期腹透常见的及严重的并发症之一，也是腹透患者被迫退出腹膜透析的主要原因。随着腹膜透析治疗时间的延长，腹透患者腹膜超滤能力逐渐减退，大约36%以上病人在透析6年后会出现这一问题。腹膜纤维化导致的腹膜透析超滤衰竭近年来成为研究热点。腹膜结构功能长期保持完整及正常是腹膜透析长期、高效、高质量进行的前提条件及必要条件。
4.1促腹膜纤维化相关因子
本研究结果显示：与A组比较，其余各模型组相关促纤维化因子表达水平均明显升高P<0.01，从而说明随着透析治疗的进行，低浓度与高浓度透析液均会上调促纤维化因子的表达，加快腹膜纤维化的发生。TGF-β1方面，D组的表达水平明显较其他各组升高P<0.05，提示高糖对TGF-β1表达的影响，同时，E组TGF-β1水平的改变证实扶肾颗粒对TGF-β1表达的抑制作用明显。CTGF及IL-6方面，结果与TGF-β1相似，其中C组较B组的变化，进一步证实扶肾颗粒对CTGF及IL-6表达的抑制作用明确。VEGF方面，E组较D组明显降低P<0.05，说明扶肾颗粒对VEGF表达的抑制作用明显。
4.2抗腹膜纤维化相关因子
本研究结果显示：随着透析治疗的进行及纤维化的发生，HGF与BMP-7表达水平均出现上调，各模型组二者水平均较正常对照组明显升高P<0.01。其中，HGF方面，C组较B组明显升高P<0.01，提示扶肾颗粒可明显上调HGF的表达，从而抑制腹膜纤维化的发生。BMP-7方面，E组较D组明显升高P<0.05，提示扶肾颗粒可明显上调BMP-7的表达，从而抑制腹膜纤维化的发生。可见，扶肾颗粒能抑制促纤维化因子TGF-β1、CTGF、IL-6、CTGF等表达，同时，又可上调抗纤维化因子HGF、BMP-7的表达，进而起到抑制腹膜透析相关腹膜纤维化的发生。
本发明人在另外的试验中，重复以上试验例1的方法，但是分别使用实施例1至8以及实施例10-11所得10种样品进行试验，结果显示使用这10种样品在以上试验例1所述方法中所得结果与使用实施例9样品所得结果相同。
试验例2：扶肾颗粒对腹膜透析效能及腹膜纤维化影响的临床研究
本试验的目的在于应用扶肾颗粒对腹膜透析患者进行辨证干预，观察扶肾颗粒对腹膜透析患者透析效能、生存质量、中医疗效及腹膜纤维化的影响，同时，通过临床与实验研究观察腹膜纤维化相关细胞因子的改变，探讨扶肾颗粒防治腹膜纤维化的可能作用机制，为中医药防治腹膜透析腹膜纤维化提供理论依据与方法。具体是通过对2009年12月1日至2010年5月31日间自愿参加本项研究，并签署知情同意书的腹膜透析患者240例进行辨证分型，并予扶肾颗粒治疗，观察腹透患者生存质量、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血红蛋白(HGB)、白蛋白(ALB)、电解质、血清钙(Ca)、血清磷(P)、腹膜平衡实验(PET)等指标及腹膜纤维化相关细胞因子的变化，评价扶肾颗粒对腹膜透析效能及腹膜纤维化的影响。
1、病例选择
入选对象：2009年12月1日至2010年5月31日间自愿参加本项研究，并签署知情同意书的腹膜透析患者240例。
诊断标准：根据美国肾脏基金会2002年《慢性肾脏疾病进展的检测和防治指南/肾脏病病人生存质量指导(K/DOQI)》制定的慢性肾脏病的诊断标准。
病例入选、病例排除、剔除病例标准：根据慢性肾脏病腹膜透析患者一般标准制定。
2、治疗方法：
全部病例首先经一个月的初选期，此期在继续执行原腹膜透析方案的同时，予以基础治疗，包括饮食、合并症等的治疗，一个月后符合纳入标准者入组接受治疗。
(1)治疗组：给予基础治疗+中药治疗，方案如下：
基础治疗：a.以腹膜透析为基础，对于存在贫血、高血压等合并症的患者按照K/DOQI指南推荐方法及剂量用药。主要包括控制血压、纠正贫血等合并症的处理；b.饮食营养：参照我国《慢性肾脏病蛋白质营养治疗专家共识》执行。中药治疗：使用实施例9所得颗粒剂(在本发明中亦可称为扶肾颗粒)为试药(剂量为患者每60kg体重每天服用扶肾颗粒相当于30克生药)。
(2)对照组：给予基础治疗+安慰剂，基础治疗同上，安慰剂为与中药颗粒剂外观一致安慰剂。
以3个月为一个疗程，连续治疗2个疗程。
3、观察指标和检测方法
(1)生存质量评价：采用1995年由兰德公司(RAND)研制，并由Aingen，BaxterHealthcare CorPoration和亚利桑那州立大学(University of Arizona)共同资助制作完成的《肾脏疾病透析患者生活质量调查表》(见附件2)Kidney Disease and Quality ofLifeTM Short Form(KDQOL-SFTM)1.3量表，本研究中KDQOL-SFTM1.3量表参照Hays RD等制定的分类及评分方法，由实际得分转换为换算得分，进行比较，各领域评分为该领域每一项目评分的平均值，领域评分越高反映被调查者该领域生存质量越高，最高分为100分，最低分为0分。本发明上下文中出现的一些术语缩写可参见上述《调查表》。
(2)腹膜透析效能相关指标：血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血红蛋白(HGB)、白蛋白(ALB)、电解质、血清钙(Ca)、血清磷(P)。腹膜透析相关指标：腹膜平衡实验(PET)，在治疗前及每个疗程结束时各检测一次。在治疗前及每个疗程结束时各记录患者24小时尿量及超滤量。
(3)中医证候积分及疗效评价：在治疗前及每个疗程结束时三个时间点应用中医证候积分调查表进行中医证候积分调查，判定疗效。中医证候疗效判定标准：
a.临床缓解：中医临床症状、体征消失或基本消失，证候积分减少之95％。
b.显效：中医临床症状、体征明显改善，证候积分减少≥70％。
c.有效：中医临床症状、体征均有好转，证候积分减少≥30％。
d.无效：中医临床症状、体征均无明显改善，甚或加重，证候积分减少不足30％。
(4)腹膜纤维化细胞因子检测：在治疗前及治疗6月时，取静脉血3ml左右，注入采血管中，常温条件下，3000转条件下离心10分钟，用BT注射器取上清液(血清)约1-1.5ml，注入2ml冻藏管中，封口膜封口，置入-70℃以下条件的保存环境中。由课题负责单位请专人将血清收集，采用ELISA法检测纤维化相关细胞因子转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、白细胞介素-6(IL-6)、肝细胞生长因子(HGF)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)水平。
(5)统计学方法：数据用SPSS11.5统计学软件进行统计分析，计量资料以均数士标准差()表示，经正态性、方差齐性检验(以0.05作为检验水准)后，方差齐时两组问样本比较采用t检验，多组问比较用方差分析；方差不齐时两样本比较采用秩和检验；计数资料采用卡方检验，非正态分布时，采用秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
4、结果：
(1)扶肾颗粒对生存质量的影响
组内比较显示：治疗组中，KDTA总评分治疗6月后较治疗前及治疗3月后均明显升高(P<0.01)；分支领域中，治疗组在SPL(症状与不适，Symptom/problem list)方面治疗6月后积分明显优于治疗前积分(P<0.01)，其他领域未见明显差异(P>0.05)。在SF-36(一般健康相关生存质量)总评分方面，治疗6月后明显优于治疗前(P<0.01)，分支领域中，在PF方面发现治疗6月后明显优于治疗前(P<0.01)，余领域未见明显差异(P>0.05)。对照组中，KDTA总评分及SF-36总评分两方面均见治疗3月后较治疗前明显降低(P<0.01)，而治疗6月后较治疗3月后总评分又见明显升高(P<0.01)。在各分支领域中，治疗前后均未见明显差异(P>0.05)。两组间比较，治疗3月后及治疗6月后，两组间在KDTA总评分及SF-36总评分方面均未见明显差异(P>0.05)。在分支领域中，各领域亦未见明显差异(P>0.05)。
(2)扶肾颗粒对腹膜透析效能相关指标的影响。肾功能方面，组内比较显示：治疗6月后BUN水平较治疗前显著下降(P<0.05)，组间比较治疗6月后BUN水平治疗组较对照组显著降低(P<0.01)；Scr组内及组间比较均未见显著差异(P>0.05)。在腹膜转运方面，两组内治疗前后及组间比较均未见显著差异(P>0.05)。在24h超滤量及24h尿量方面，治疗组治疗前后未见显著变化，对照组治疗6月后两项均见明显降低(P<0.05)，且与治疗组同时间点比较亦显著降低(P<0.05)。
(3)扶肾颗粒对腹膜纤维化相关细胞因子的影响：治疗前后两组腹膜纤维化相关细胞因子水平经统计分析，组内比较：治疗组中，治疗后IL-6水平较治疗前明显降低(P<0.05)，HGF、BMP-7水平显著升高(P<0.01)，其他指标未见明显变化(P>0.05)。对照组中，治疗后TGF-β1水平较治疗前显著升高(P<0.05)，IL-6水平治疗后较治疗前明显降低(P<0.05)，其他指标未见明显变化(P>0.05)。治疗后两组间比较，治疗组在控制TGF-β1、CTGF水平方面明显优于对照组(P<0.05)，同时，治疗组在HGF、BMP-7方面较对照组有明显升高的作用(P<0.01)，而在改善IL-6水平方面，两组间疗效未见显著差异(P>0.05)。
(4)扶肾颗粒中医疗效评价：治疗组扶肾颗粒可明显降低患者治疗后证候积分，且随着治疗时间的延长，证候积分明显降低，总有效率明显升高。通过两组间的比较可见，在治疗3月后及治疗6月后，治疗组患者积分改变及总有效率均明显优于对照组。
由以上结果可见，本发明扶肾颗粒可以改善腹膜透析患者的临床症状及体征，改善患者生存质量，提高患者透析效能；以增加腹膜透析患者尿毒素及水清除，延缓患者残余肾功能的丢失，提高患者透析效能；在一定程度上抑制促纤维化细胞因子血清TGF-β1、CTGF、IL-6及VEGF水平的上调，又可在一定程度上上调拮抗纤维化细胞因子HGF、BMP-7水平，最终抑制或延缓腹膜透析相关腹膜纤维化的发生；膜透析大鼠模型腹膜纤维化程度与腹膜透析液浓度呈正比关系，扶肾颗粒可明显延缓腹膜透析大鼠模型腹膜组织形态的纤维化进展，保护腹膜组织形态结构的正常，从而拮抗腹膜纤维化的发生。
机译： N-芳基-2-磺酰氨基苯并咪唑类药物在制备用于治疗慢性肾功能衰竭的药物中的应用和药物组合物
机译： N-芳基-2-磺酰氨基苯并咪唑类药物在制备用于治疗慢性肾功能衰竭的药物中的应用和药物组合物
机译： N-芳基-2-磺酰氨基苯并咪唑类药物在制备用于治疗慢性肾功能衰竭的药物中的应用和药物组合物
