靶向AGCT位点的耐高温II型限制性内切酶及其应用

摘要

本发明提供了一种新型的耐高温Ⅱ型限制性内切酶DFh1，该酶的氨基酸序列如SEQ NO：2所示，其编码基因序列如SEQ NO：1所示；DFh1酶可识别5’...AGCT...3’核酸片段中的AGCT回文结构区并在G和C之间进行切割形成平末端。酶DFh1具有良好的酶活，1μg限制酶DFh1在1×CutSmart Buffer缓冲体系和75℃或72℃温度下，在1h内可以将1nmol的含AGCT回文结构区的双链DNA片段在G和C之间完全酶切形成平末端。此外，限制酶DFh1具有良好的热稳定性，在95℃热育30min，酶活力仍保留90%以上；置于室温下30min，酶活力仍保留99%以上。本发明提供的特定全新II型限制酶DFh1，可以作为基因工程和基因检测的工具酶，并在低丰度特定基因片段的富集和检测中具有独特的应用。