诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法

摘要

本发明公开了一种诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法，属于植物遗传育种领域。所述诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法，包括处理花蕾，枣花授粉，收获种子，播种育苗，倍性检测步骤。本发明解决了秋水仙碱诱导枣树雌配子染色体加倍有效处理时期等关键技术问题，建立了枣树雌配子染色体加倍选育三倍体技术体系，为创制优良多倍体种质及进一步加快枣树育种进程的发展奠定基础。

说明书

技术领域

本发明涉及植物遗传育种领域，特别是指一种诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法。

背景技术

枣(Ziziphus.jujube Mill.)为鼠李科(Rhamnaceae)枣属(Ziziphus.Mill.)植物，是起源于我国的重要木本果树，拥有悠久的栽培历史。枣果味道鲜美，并且含有丰富的维生素C、功能性糖、铁、钙、钾、锌等营养元素，兼具有食用和药用功效。

倍性育种是林木种质创新的重要途径。其中，三倍体(triploid)兼具有倍性效应和杂种效应，通常表现出器官巨大性、不育性和次生代谢旺盛等特征，而这些特征正是枣树育种追求的主要目标。目前，枣树多倍体研究已有一些报道，但多是利用体细胞染色体加倍产生的同源多倍体，只有倍性效应，不具杂种优势；利用有性多倍化途径产生枣三倍体的研究还鲜有报道。通过有性多倍化途径诱导多倍体主要包括不同倍性植株杂交和配子染色体加倍两种方法。由于枣花小、人工去雄困难，所以杂交育种工作进展缓慢。

虽然利用雌配子染色体加倍选育三倍体在杨树、桑树、尾叶桉等林木中都已成功应用，但在枣树中利用该方法选育三倍体还未见报道，主要是由于诱导枣树雌配子染色体加倍存在着一些技术问题未能有效解决，具体表现为：秋水仙碱诱导枣雌配子染色体加倍的有效处理时期尚未明确，处理浓度、处理时间尚未揭示，这些问题严重制约了枣树雌配子染色体加倍选育三倍体进程的发展。

发明内容

本发明要解决的技术问题是建立了一种枣树雌配子染色体加倍选育三倍体技术体系，为创制优良多倍体种质及进一步加快枣树育种进程的发展奠定基础的诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：

本发明提供一种诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法，包括处理花蕾，枣花授粉，收获种子，播种育苗，倍性检测步骤，所述处理花蕾的方法为采用棉浸法使用秋水仙碱溶液处理花蕾。

进一步的，所述棉浸法为在枣树的枝条下部近枣吊处打孔深至木质部，在孔处填充脱脂棉，将10ml底部钻孔的离心管固定在脱脂棉上方，将秋水仙碱溶液加到离心管中后，用锡箔纸包住，再用封口膜包裹离心管，固定好即可。

进一步的，所述秋水仙碱溶液的浓度为0.3％；处理时间为4h。

进一步的，本发明中所处理的花蕾最佳时期应当为雌配子处于大孢子母细胞占多数的时期，在外观形态上表现为萼片缝隙明显，呈现黄绿色，花蕾直径为1.76-2.12mm。

进一步的，所述枣树为马牙枣树。

本发明具有以下有益效果：

本发明确定了秋水仙碱溶液诱导雌配子染色体加倍的有效处理时期；明确了秋水仙碱诱导枣树雌配子染色体加倍有效的处理浓度和处理时间，建立了枣树雌配子染色体加倍选育三倍体的技术体系，极大地推动了枣树种质创新及育种进程的发展。

附图说明

图1为本发明实施例中选择处理的花蕾示意图；

图2为本发明实施例中采用棉浸法处理的枝条；

图3为本发明实施例中处理枝条结果情况；

图4为本发明实施例中植株流式细胞仪倍性检测结果，其中A为二倍体植株、B为三倍体植株；

图5为本发明实施例中“马牙枣”三倍体植株的生长状况示意图。

具体实施方式

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。

本发明针对现有技术中只有采用体细胞染色体加倍选育枣树三倍体的方法，且选育出的枣树结果不具杂种优势的缺陷，提供一种诱导枣树雌配子染色体加倍选育枣树三倍体的方法。

实施例1

观察‘马牙枣’(Ziziphus jujuba Mill.Mayazao)花蕾直径和形态，花蕾外部形态如图1所示，花蕾直径1.76-2.12mm，形态表现为萼片缝隙明显，黄绿色；采用如图2所示采用的棉浸法，用0.3％的秋水仙碱处理花蕾，处理时间为4h，待枣花自由授粉获得种子后，进行播种育苗，用流失细胞仪进行倍性检测，获得三倍体植株，三倍体得率为3.3％。

本发明中采用的棉浸法为在枣树的枝条下部近枣吊处打孔深至木质部，在孔处填充脱脂棉，将10ml底部钻孔的离心管固定在脱脂棉上方，将0.3％的秋水仙碱溶液加到离心管中后，用锡箔纸包住，再用封口膜包裹离心管，固定好即可。

本发明中的枣花授粉是指枣花自由授粉，待处理枝条结果之后收获种子，播种育苗进行倍性检测，所涉及的方法均为本领域人员的常规技术，在此不一一赘述。

为了进一步说明本发明的有益效果，针对上述实施例，设置如下对比例。

需要说明的是对比例1-11所采用的处理方法与本发明中实施例完全相同，对比例12-13所处理的花蕾的直径分别为0.80-1.75mm、2.13-3mm。

由上表可知，与对比例1-13相比，本发明明确了在花蕾特定的发育时期以及秋水仙碱特定的浓度及处理时间条件下，所诱导出的枣树三倍体，在具有倍性效应的同时还具有杂种优势，如图3-图5所示，具有出较优良的生长发育特征，建立了枣树雌配子染色体加倍选育三倍体的技术体系，极大地推动了枣树种质创新及育种进程的发展。

以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。