基于线性片段同源重组进行须糖多孢菌基因簇阻断的方法

摘要

基于线性片段同源重组进行须糖多孢菌基因簇阻断的方法，包括以下步骤：（1）在须糖多孢菌基因组中找到ura4作为负筛选标记基因；（2）在ura4基因的两端设计分别设计一段大小为1 kb的序列用于进行ura4基因替换的同源臂；（3）采用融合PCR将ura4基因上、下游同源臂与阿泊拉抗性基因进行融合，并与质粒pOJ260进行连接，获得重组质粒pOJ260‑ura4；（4）将含有重组质粒pOJ260‑ura4的原生质体转入须糖多孢菌中，进行ura4基因的敲除，获得ura4缺失菌株S.pogona‑Δura4，通过线性片段同源重组技术对所述ura4缺失菌株S.pogona‑Δura4进行须糖多孢菌基因簇的阻断。本发明无需构建载体、引入外源重组酶，可在短时间内获得具有靶标基因簇阻断的阳性单克隆，提高须糖多孢菌非靶标基因簇阻断的效率。