ERBB2 -G519V突变基因及其在乳腺癌辅助诊断中的应用

摘要

本发明公开了一种ERBB2‑G519V突变基因及其在乳腺癌辅助诊断中的应用，本发明提供一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39716433G>T突变体、检测该突变体的特异性引物以及含有特异性引物的试剂盒，以便快速方便的辅助判断乳腺癌。本发明所述的ERBB2‑G519V突变基因及其在乳腺癌辅助诊断中的应用能够快速方便的辅助判断乳腺癌。

说明书

技术领域

本发明涉及一种医学生物技术，尤其涉及一种ERBB2-G519V突变基因及其在乳腺癌辅助诊断中的应用。

背景技术

乳腺癌已被认知属于一种全身性疾病，乳腺癌的病因至今尚未明确揭示，随着肿瘤分子遗传学、肿瘤细胞遗传学和分子流行病学的发展，目前认为环境因素和遗传因素共同作用影响乳腺癌的发生，在遗传性癌综合征中，癌相关基因的种系突变决定了该家族的肿瘤遗传易感性；而在散发性癌症中，主要危险因素是环境因子，与此相关基因的遗传多态性决定了个体对这些因素的易感性。

有研究表明携带乳腺癌遗传易感基因的女性，乳腺癌的发病风险将会大大提高，以 BRCA1和BRCA2基因为例，携带者终生患乳腺癌的风险高达80％，因此针对这些与乳腺癌相关的易感基因的检测可提高乳腺癌的二级预防(早发现、早诊断、早治疗)。其中，乳腺癌相关基因ERBB2又称为neu或HER-2基因，是一种细胞来原癌基因，在多种肿瘤中其癌基因及其蛋白产物(p185)均有过度表达和扩增。对ERBB2癌基因蛋白产物 p185的病理研究首先多见于乳腺癌，其作用也较为明确。目前普遍认为，ERBB2蛋白产物的阳性表达可作为判断乳腺癌预后的一个独立指标。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39716433G>T突变体、检测该突变体的特异性引物以及含有特异性引物的试剂盒，以便快速方便的辅助判断乳腺癌。

技术方案：为实现上述目的，本发明的一种用于乳腺癌辅助诊断的ERBB2突变基因，其野生型ERBB2基因序列如SEQID NO:1所示，其突变型ERBB2基因如SEQID NO:2所示，突变型ERBB2基因序列与野生型ERBB2基因序列具有g.39716433G>T位点突变，其编码序列氨基酸由甘氨酸G转变为缬氨酸V。

进一步的，一种用于检测权利要求1所述的一种用于乳腺癌辅助诊断的ERBB2突变基因的特异性引物，所述特异性引物的上游引物的序列如SEQID NO:5所示，所述特异性引物的下游引物的序列如SEQID NO:6所示；用于检测ERBB2基因g.39716433G>T 位点突变；所述ERBB2基因g.39716433G>T位点突变是指突变位点在SEQID NO:1序列的第150位碱基G突变为T。

进一步的，一种乳腺癌辅助诊断试剂盒，包括权利用于检测基因ERBB2位点g.39716433G>T突变体的特异性引物。

本发明的有益效果如下所述：一种用于乳腺癌辅助诊断的ERBB2基因位点g.39716433G>T突变体、检测该突变体的特异性引物以及含有特异性引物的试剂盒，可使得乳腺癌的诊断更加方便易行，为临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。

附图说明

附图1为乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39716433G>T突变体检测凝胶电泳图；

附图2为乳腺癌相关基因ERBB2位点g.39716433G>T突变体的基因测序图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作更进一步的说明。

如附图1至2所述的一种用于乳腺癌辅助诊断的ERBB2突变基因，其野生型ERBB2基因序列如SEQID NO:1所示，其突变型ERBB2基因如SEQID NO:2所示，突变型 ERBB2基因序列与野生型ERBB2基因序列具有g.39716433G>T位点突变，其编码序列氨基酸由甘氨酸G转变为缬氨酸V。

本发明通过对112例有肿瘤家族史的乳腺癌病人及300名正常的对照成员ERBB2基因g.39716433G>T突变位点进行筛查，发现5名患者在具有ERBB2基因 g.39716433G>T突变(4.5％)。该变异为一个错义变异。这个变异在300例对照组中仅2 名携带(0.6％)，说明这一变异位点增加乳腺的患病风险。该变异在乳腺癌患者中发生频率显著高于正常对照，说明该突变位点与乳腺癌密切相关。

以上研究所发现的与乳腺癌辅助诊断相关的突变位点为g.39716433G>T，该突变发生于第17号染色体的39716433位置，该基因在NCBl参考数据库GRCh38.p12中的编号为NC_000017.11(39688084～39728662)，这里列出在该数据库中包含有本位点野生型的部分碱基序列供参考，如SEQID NO:1所示，ERBB21基因突变相对应的序列如SEQID NO:2所示，其中突变位点在SEQID NO:1序列的第150位由碱基G突变为T。ERBB2 基因编码序列野生型氨基酸序列如SEQID NO:3所示，突变型氨基酸序列如SEQID NO:4 所示；其中突变位点在SEQID NO:3序列的第519位由甘氨基酸G转变为为缬氨酸V。

SEQID NO:1

CTTCCTCCTCACTGCAGTGGGCGAGGGCCTGGCCTGCCACCAGCTGTGCGCC CGAGGGCACTGCTGGGGTCCAGGGCCCACCCAGTGTGTCAACTGCAGCCAGTTCC TTCGGGGCCAGGAGTGCGTGGAGGAATGCCGAGTACTGCAGGGGTATGAGGGGC>

SEQID NO:2

CTTCCTCCTCACTGCAGTGGGCGAGGGCCTGGCCTGCCACCAGCTGTGCGCC CGAGGGCACTGCTGGGGTCCAGGGCCCACCCAGTGTGTCAACTGCAGCCAGTTCC TTCGGGGCCAGGAGTGCGTGGAGGAATGCCGAGTACTGCAGGTGTATGAGGGGCG>

SEQID NO:3

MKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYV LIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQ LRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCK GSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACL HFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLV CPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIF GSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVI RGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNP HQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPE

SEQID NO:4

MKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYV LIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQ LRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCK GSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACL HFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLV CPLHNQEVTAEDGTQRCEKCSKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIF GSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVI RGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNP HQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQVLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPE

该突变位点为本研究首次在中国汉族女性乳腺癌患者中发现，数据库显示欧美人群该区域的扫描也未发现该突变位点。通过纳入前瞻性队列研究，证明了携带该突变的患者最终发展成了乳腺癌，证明了该位点是乳腺癌的致病因素。

本发明通过控制年龄对疾病发展的影响因素，研究突变位点在乳腺癌辅助诊断的应用前景，阐述突变位点对于乳腺癌进展的影响，揭示其诊断价值。

一种用于检测上述的一种用于乳腺癌辅助诊断的ERBB2突变基因的特异性引物，所述特异性引物的上游引物的序列如SEQID NO:5所示，所述特异性引物的下游引物的序列如SEQID NO:6所示；用于检测ERBB2基因g.39716433G>T位点突变；所述ERBB2 基因g.39716433G>T位点突变是指突变位点在SEQID NO:1序列的第150位碱基G突变为T。

一种乳腺癌辅助诊断试剂盒，包括上述的用于检测基因ERBB2位点g.39716433G>T突变体的特异性引物。

具体的，本发明的检测方法是利用人类ERBB2基因不同基因型的特异性序列位点的改变，设计出针对突变位点的引物序列，进行聚合酶链反应来完成的。

本发明采用Sanger测序方法，用PCR扩增引物，对ERBB2基因进行突变检测；其中PCR扩增引物的上游引物的序列如为SEQID NO:5所示，下游引物的序列如SEQID NO:6所示。

DNA模板的制备通过采用购置的试剂盒提取全血基因组DNA，具体步骤如下：

(1)取无菌2.0mL离心管一只，加入1mL细胞裂解液；

(2)轻轻震荡然经EDTA抗凝的全血样本，直到彻底混匀；然后吸取500μL血样加入上述含有细胞裂解液的离心管中，轻轻倾倒离心管5～6次混匀；

(3)室温孵育10分钟(期间颠倒离心管2～3次混匀)；

(4)12000rpm室温离心5分钟；

(5)用移液器缓慢的尽可能将上清液移弃干净，注意勿将两相交界处的白色物质吸出；

(6)使用涡旋振荡器(Votex)剧烈混匀，直至白细胞重悬(10～15秒)；

(7)向重悬细胞溶液中加入核裂解液300μL。用移液枪头吸放溶液5～6次裂解白细胞。此时溶液应变得很粘稠，若混合后可见细胞团块，则将溶液置于37℃孵育直至团块消散，若孵育1小时后仍可见细胞团块，则另加核裂解液100μL并重复置于37℃孵育；

(8)向核裂解物中加入蛋白沉淀液100μL，用涡旋振荡器剧烈震荡10～20秒；

(9)12000rpm室温离心5分钟；

(10)将其上清液转至对应编号的已加入300μL室温异丙醇的2.0mL离心管中。

(11)轻轻颠倒以混匀溶液，直至白色线状DNA形成沉淀；

(12)12000rpm室温离心1分钟；

(13)弃去上清液，加入与样本量等体积的室温70％乙醇，轻轻颠倒离心管数次；

(14)用移液器缓慢的尽可能将乙醇液移弃干净，将离心管置于50℃烘烤5～10 分钟，尽量让残余的乙醇液挥发干净；

(15)向离心管中加入50～100μL的DNA溶解液，轻轻混匀；

(16)用1％琼脂糖凝胶电泳来评估DNA提取效果，Nanodrop核酸仪检测含量，定量到20～50ng/μL，-20℃保存；

ERBB2基因g.39716433G>T突变基因检测技术方案：

仪器：Veriti96型PCR仪、BIO-RAD Gel Doc XR+型凝胶成像仪(美国伯乐公司)、凝胶电泳仪(北京六一公司)。

试剂：QIAamp DNA提取试剂盒(德国Qiagen公司)；DNA Isolation Kit提取试剂盒(北京PELFREEZ公司)；PCR缓冲液、dNTP、Taq酶(美国ABI公司)；引物由上海生工生物有限公司合成。

(1)引物设计：根据美国国家生物信息中心(NCBI)GenBank记录的ERBB2基因(序列号:NC_000017.11)，通过Oligo6.0引物软件设计引物，最终确定1对特异性寡核苷酸引物序列为F:5’-GAGGAATGCCGAGTACTGCAGGT-3’(SEQID NO:5)和 R:5’-GTCACTGAGCCATTCTGGGGCTG-3’(SEQID NO:6)，扩增产物片段长度为 182bp；

(2)反应总体积：50μL，含PCR 5×缓冲液10μL，DNA模板5.0μL，Taq聚合酶(1U/μL)1.0μL，MgCl2终浓度2.0mmol/L，dNTP终浓度200nmol/L，以及特异性上、下引物终浓度200nmol/L，并加消毒双蒸水至总体积50μL；

反应条件：95℃预变性5分钟，然后依次95℃变性30秒，接着55℃退火30秒， 72℃延伸30秒分钟，共35个循环；

(3)ERBB2基因g.39716433G>T突变基因检测：用1.5％琼脂糖凝胶对将步骤(2) 所得的增扩产物进行电泳，以检测其是否有目的片段。通过凝胶成像仪观察结果并拍照， PCR产物经电泳后显示为单一条带，无杂带，则提示PCR产物单一，无非特异扩增。若条带位置位于适当大小的位置，则为目的片段。如图1所示，M：50bp梯度分子量标记物，1：空白对照，2：野生型对照，3：ERBB2基因g.39716433G>T突变样本；

(4)扩增产物纯化：本研究采用Takara公司的Agarose Gel DNA PurificationKit 试剂盒将琼脂糖凝胶电泳后的PCR产物进行纯化回收，准备测序；

(5)Sanger测序与结果判断：纯化后PCR产物在ABI3730型全自动DNA测序仪上进行测序。将测序结果与ERBB2野生型参考序列(NCBI Reference Sequence: NC_000017.11)进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。检测所得基因突变图如图2所示，图中箭头所示为ERBB2基因显示g.39716433G>T突变。

用于乳腺癌辅助诊断突变位点试剂盒的制作：

突变位点试剂盒的制作和操作流程是基于PCR扩增和Sanger测序扫描检测技术。试剂盒含有一批突变位点特异性引物(包括下列引物：g.39716433G>T突变位点的引物序列为SEQID NO:5和SEQID NO:6)，该试剂盒还可以包括PCR反应常用的试剂，如 Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、去离子水等；这些常用试剂都是本领域技术人员熟知的，另外还可以含有标准品和/或对照品(如确定基因型的标准品和空白对照等)。此试剂盒的价值在于只需要外周血而不需要其它组织样品，通过最精简和特异的引物对检测突变位点，再通过突变位点谱辅助判断乳腺癌，不仅稳定，检测方便，且精确，大大提高疾病诊断的敏感性和特异性，因此将此试剂盒投入实践，可以帮助指导诊断和更有效的个体化治疗。

具体的，相关突变位点寡核苷酸引物序列如表1所示

表1

其中*F＝正向引物序列；R＝反向引物序列

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出：对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 无锡市第五人民医院

<120> ERBB2 -G519V突变基因及其在乳腺癌辅助诊断中的应用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 360

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 1

cttcctcctc actgcagtgg gcgagggcct ggcctgccac cagctgtgcg cccgagggca 60

ctgctggggt ccagggccca cccagtgtgt caactgcagc cagttccttc ggggccagga 120

gtgcgtggag gaatgccgag tactgcaggg gtatgagggg cggaggagag ggtggctgga 180

ggggtgcatg gggctcctct cagaccccct caccactgtc ccttctctca ggctccccag 240

ggagtatgtg aatgccaggc actgtttgcc gtgccaccct gagtgtcagc cccagaatgg 300

ctcagtgacc tgttttggac cggtgagctg ctggcgggct cagagctggg tggagggggg 360

<210> 2

<211> 360

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 2

cttcctcctc actgcagtgg gcgagggcct ggcctgccac cagctgtgcg cccgagggca 60

ctgctggggt ccagggccca cccagtgtgt caactgcagc cagttccttc ggggccagga 120

gtgcgtggag gaatgccgag tactgcaggt gtatgagggg cggaggagag ggtggctgga 180

ggggtgcatg gggctcctct cagaccccct caccactgtc ccttctctca ggctccccag 240

ggagtatgtg aatgccaggc actgtttgcc gtgccaccct gagtgtcagc cccagaatgg 300

ctcagtgacc tgttttggac cggtgagctg ctggcgggct cagagctggg tggagggggg 360

<210> 3

<211> 550

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu

1 5 1015

Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu

202530

Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln

354045

Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val

505560

Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp

65707580

Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr

859095

Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu

100 105 110

Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn

115 120 125

Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His

130 135 140

Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg

145 150 155 160

Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly

165 170 175

Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly

180 185 190

Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu

195 200 205

Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala

210 215 220

Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala

225 230 235 240

Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu

245 250 255

Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn

260 265 270

Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His

275 280 285

Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys

290 295 300

Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu

305 310 315 320

Arg Glu Val Arg Ala Val Thr Ser Ala Asn Ile Gln Glu Phe Ala Gly

325 330 335

Cys Lys Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu Pro Glu Ser Phe Asp

340 345 350

Gly Asp Pro Ala Ser Asn Thr Ala Pro Leu Gln Pro Glu Gln Leu Gln

355 360 365

Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala

370 375 380

Trp Pro Asp Ser Leu Pro Asp Leu Ser Val Phe Gln Asn Leu Gln Val

385 390 395 400

Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln

405 410 415

Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly

420 425 430

Ser Gly Leu Ala Leu Ile His His Asn Thr His Leu Cys Phe Val His

435 440 445

Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu

450 455 460

His Thr Ala Asn Arg Pro Glu Asp Glu Cys Val Gly Glu Gly Leu Ala

465 470 475 480

Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr

485 490 495

Gln Cys Val Asn Cys Ser Gln Phe Leu Arg Gly Gln Glu Cys Val Glu

500 505 510

Glu Cys Arg Val Leu Gln Gly Leu Pro Arg Glu Tyr Val Asn Ala Arg

515 520 525

His Cys Leu Pro Cys His Pro Glu Cys Gln Pro Gln Asn Gly Ser Val

530 535 540

Thr Cys Phe Gly Pro Glu

545 550

<210> 4

<211> 550

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

Met Lys Leu Arg Leu Pro Ala Ser Pro Glu Thr His Leu Asp Met Leu

1 5 1015

Arg His Leu Tyr Gln Gly Cys Gln Val Val Gln Gly Asn Leu Glu Leu

202530

Thr Tyr Leu Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser Phe Leu Gln Asp Ile Gln

354045

Glu Val Gln Gly Tyr Val Leu Ile Ala His Asn Gln Val Arg Gln Val

505560

Pro Leu Gln Arg Leu Arg Ile Val Arg Gly Thr Gln Leu Phe Glu Asp

65707580

Asn Tyr Ala Leu Ala Val Leu Asp Asn Gly Asp Pro Leu Asn Asn Thr

859095

Thr Pro Val Thr Gly Ala Ser Pro Gly Gly Leu Arg Glu Leu Gln Leu

100 105 110

Arg Ser Leu Thr Glu Ile Leu Lys Gly Gly Val Leu Ile Gln Arg Asn

115 120 125

Pro Gln Leu Cys Tyr Gln Asp Thr Ile Leu Trp Lys Asp Ile Phe His

130 135 140

Lys Asn Asn Gln Leu Ala Leu Thr Leu Ile Asp Thr Asn Arg Ser Arg

145 150 155 160

Ala Cys His Pro Cys Ser Pro Met Cys Lys Gly Ser Arg Cys Trp Gly

165 170 175

Glu Ser Ser Glu Asp Cys Gln Ser Leu Thr Arg Thr Val Cys Ala Gly

180 185 190

Gly Cys Ala Arg Cys Lys Gly Pro Leu Pro Thr Asp Cys Cys His Glu

195 200 205

Gln Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Pro Lys His Ser Asp Cys Leu Ala

210 215 220

Cys Leu His Phe Asn His Ser Gly Ile Cys Glu Leu His Cys Pro Ala

225 230 235 240

Leu Val Thr Tyr Asn Thr Asp Thr Phe Glu Ser Met Pro Asn Pro Glu

245 250 255

Gly Arg Tyr Thr Phe Gly Ala Ser Cys Val Thr Ala Cys Pro Tyr Asn

260 265 270

Tyr Leu Ser Thr Asp Val Gly Ser Cys Thr Leu Val Cys Pro Leu His

275 280 285

Asn Gln Glu Val Thr Ala Glu Asp Gly Thr Gln Arg Cys Glu Lys Cys

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Ser Lys Pro Cys Ala Arg Val Cys Tyr Gly Leu Gly Met Glu His Leu

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Val Phe Glu Thr Leu Glu Glu Ile Thr Gly Tyr Leu Tyr Ile Ser Ala

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Ile Arg Gly Arg Ile Leu His Asn Gly Ala Tyr Ser Leu Thr Leu Gln

405 410 415

Gly Leu Gly Ile Ser Trp Leu Gly Leu Arg Ser Leu Arg Glu Leu Gly

420 425 430

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Thr Val Pro Trp Asp Gln Leu Phe Arg Asn Pro His Gln Ala Leu Leu

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Cys His Gln Leu Cys Ala Arg Gly His Cys Trp Gly Pro Gly Pro Thr

485 490 495

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515 520 525

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<210> 5

<211> 23

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 5

gaggaatgcc gagtactgca ggt 23

<210> 6

<211> 23

<212> DNA

<213> Homo sapiens

<400> 6

gtcactgagc cattctgggg ctg 23