一种基于CRISPR/Cas和lambda Red重组系统的体内质粒编辑系统及其应用

摘要

本发明公布了一种基于CRISPR/Cas和lambda Red重组系统的体内质粒编辑系统及其应用。所述体内质粒编辑系统包括：HsdR功能缺失且基因组中整合有可诱导表达的λRed重组蛋白基因和可诱导表达的Cas蛋白基因的大肠杆菌工程菌株，插入靶标序列的crRNA表达质粒，以及等位交换底物和靶标质粒。本发明将CRISPR‑Cas系统与重组工程整合使用，建立一种快速且无痕的体内质粒编辑方法，可方便快捷地在大肠杆菌中对质粒进行基因删除、点突变和片段插入，以及建立质粒突变库。