一种制备带特定末端的双链DNA标准片段的方法

摘要

本发明提供一种制备带特定末端的双链DNA标准片段的方法，包括：步骤一、选取限制性内切酶：根据目的标准DNA的双端特性，筛选可产生相应末端的限制性内切酶，步骤二、筛选模板或构建模板：直接筛选模板：或者克隆构建模板：通过序列设计并合成带引物结合位点和酶切位点的短小片段；通过退火反应形成双端3’‑dT尾小片段双链；小片段通过连接反应构建到固定大小的PCR产物上；步骤三、通过特异性引物，经PCR扩增获得包含酶切位点和中间片段在内的DNA序列；步骤四、通过所筛选的限制性内切酶的酶切反应，切开两端酶切位点，获得特定双端的DNA片段；步骤五、纯化获得标准片段。本发明创造可以制备获得携带特定末端的DNA片段。