Candida parapsilosis virulenciájának vizsgálata = Regulation, Function and Structure of Virulence Factors of Candida parapsilosis

摘要

A Candida parapsilosis mint humán opportunista kórokozó komoly egészségügyi problémát jelent világszerte. Ennek ellenére keveset tudunk a patogén virulencia faktorairól, illetve a kiváltott kórfolyamat immunulógiai hátteréről. Munkánk célja a gomba virulencia faktorainak megismerése illetve a gazda-patogén interakciók vizsgálata volt. A szekretált hidrolitikus enzimek potenciális virulencia faktorok lehetnek, aminek bizonyítására szekretált proteináz gének delécióját hajtottuk végre. Sikeresen hoztunk létre Sapp1 deficiens mutánsokat és bizonyítottuk, hogy a fehérjének szerepe van az emberi szérum komponensei elleni védelemben, a professzionális immunsejtek fagocitózis és gombaölő folyamatinak gátlásában. Kimutattuk továbbá, hogy a Sapp1 fehérje elvesztését a patogén más Sapp fehérjék túltermelésével kompenzálja. Bebizonyítottuk, hogy az extracelluláris lipázok képesek a humán dendritikus sejtek aktivációját csökkenteni a fagocitózis és a gombaölőképesség csökkentésével illetve különböző gyulladásos citokinek termelésének gátlásával, valamint azt hogy a zsírsav bioszintézisben szerepet játszó Ole1 fehérje jelentős szerepet játszik a gazda-patogén interakciókban. Kifejlesztettünk egy újszülött patkányokat alkalmazó in vivo fertőzési modellt, amelynek segítségével bizonyítottuk, hogy a szekretált lipázok mind a C. albicans mind a C. parapsilosis esetében fontos virulencia faktorok. | Candida parapsilosis typically is a commensal of human skin. However, when host immune defense is compromised or the normal microflora balance is disrupted, C. parapsilosis transforms itself into a pathogen. Candida-derived hidrolytic enzymes have been identified as potential virulence factor. Thus, the aim of our work was to assess the function of secreted hidrolytic enzymes in C. parapsilosis virulence and to determine the role that C. parapsilosis-derived lipase and proteinase play in the interaction with host immune cells. We have successfully generated a sapp1 minus strain and showed elevated activity of SAPP2 in both on mRNA and protein level in the mutant strain. Phagocytosis and killing assays showed increased level of intracellular pahgocytosis and killing in the case of the sapp1 minus strain, and the macrophage damage caused the mutant strain was lower compared to that of the wild type. Taken together, these data strongly suggest the involvement of sapp1p in virulence and pathogenicity of C. parapsilosis. Furthermore, our results show that DCs are activated by exposure to C. parapsilosis, as shown by increased phagocytosis, killing and proinflammatory protein secretion. Moreover, the results strongly suggest that C. parapsilosis derived lipase has a protective role during yeast:DC interactions, since lipase production in wt yeast cells decreased the phagocytic capacity and killing efficiency of host cells and downregulated the expression of host effector molecules.