ОПТИМИЗАЦИЯ БИОСИНТЕЗА (5)-3-ГИДРОКСИМАСЛЯНОЙ КИСЛОТЫ ИЗ ГЛЮКОЗЫ по ОБРАЩЕННОМУ ПУТИ р-ОКИСЛЕНИЯ ЖИРНЫХ кислот РЕКОМБИНАТНЫМИ ШТАММАМИ Escherichia coli

摘要

Исследован микроаэробный синтез 3-гидроксимасляной кислоты штаммом Escherichia соИ ВОХ3.1 delta4 P_L-atoB P_L-tesB (MG1655 lacI~Q, delta ackA-pta, delta poxB, delta ldhA, delta adhE, delta fadE, P_L-SD_(phi10)-atoB, P_(trc-ideal-SD_(phi10)-fadB, P_L-SD_(phi10)-tesB), ранее направленно сконструированным для биосинтеза целевого соединения из глюкозы по обращенному пути 3-окисления жирных кислот. Достигнут выход целевого продукта 0.12 моль/моль. Инактивация в штамме гена неспецифичной тиоэстеразыYclA приводила к росту выхода 3-гидроксимасляной кислоты до 0.15 моль/моль. Для оптимизации биосинтеза продукта был сконструирован штамм MG delta4P_L-tesB (MG1655 delta ackA-pta, deltapox В, delta ldhA, deltaadhE, P_L-SD_(phi10)-tesB), в котором была дополнительно обеспечена экспрессия генов, кодирующих ключевые ферментыр-окисления жирных кислот в составе плазмиды pMW118m-atoB-fadB. Уровень микроаэробного синтеза 3-гидроксимасляной кислоты из глюкозы штаммом MG delta4 P_L-tesB(pMW118m-atoB-fadB) в тестовых условиях достигал 0.35 моль/моль. Инактивация в штамме гена неспецифичной тиоэстеразы YciA приводила к незначительному снижению побочной продукции ацетата. Последующая инактивация в штамме гена неспецифичной тиоэстеразы Ydil практически не влияла на уровень синтеза побочных продуктов. Контролируемые условия культивирования сконструированного штамм MG delta4 P_L-tesB(pMW118m-atoB-fadB) в биореакторе позволили достичь выхода 3-гидроксимасляной кислоты из глюкозы, составляющего 0.75 моль/моль.