С-КОНЦЕВОЙ ДОМЕН БЕЛКА СЫ4 ДРОЖЖЕЙ SACCHAROMYCES CEREVISIAE СВЯЗЫВАЕТСЯ С ФРАГМЕНТОМ ДНК ЦЕНТРОМЕРА ХРОМОСОМЫ III

摘要

Получены поликлональные антитела к рехомбинантному белку, состоящему из Ц аминокислот пептида phi 10s 10 и слитых с ними аминокислот 135—458 дрожжевого белка Ch14, участвующего в процессе сегрегации хромосом. Мол, масса белка Сh14, детектированного полученными антителами в тотальномбелковом экстракте дрожжей, составляет 54 кДа, что говорит о трансляции максимально возможной цепи Сh14 начиная с первого стартового кодона.Кроме того, аффинно очищен рекомбннантный белок, состоящий из мальтозсвязывающего белка Е. coli MalE и С-концевого домена белка Сh14 (аминокислоты 376—458), содержащего последовательность спираль—поворот—спираль, ответственную за ДНК-связывание ряда белков. Наблюдали связывание очищенного белка с ~(32)Р-меченным фрагментом ДНК центромера хромосомы III в экспериментах по ретардации в прлиакриламидных и агарозных гелях. Полученные данные могут свидетельствовать о прямом связывании белка Ш4 дрожжей с ДНК центромера в составе центромерсвязывающих факторов. Результат согласуется с данными по фотокросслинкингу белков CBF3 с центромером хромосомы III дрожжей, где был также детектирован минорный белок с близкой молекулярной массой (Espelin et al., 1997).