НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИММУНОПРЕЦИПИТАЦИИ КОМПЛЕКСОВ микроРНК И БЕЛКА AG02 ИЗ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ВЛИЯЕТ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ ПРОЦЕДУР

摘要

Изучение внеклеточных микроРНК — одна из наиболее динамичных областей современных биомедицинских исследований. Часто при исследованииэтих молекул требуется изолированно изучить пул микроРНК, связанных с определенным носителем. Такими носителями могут быть сложные комплексы этих молекул с белками. К одним из наиболее хорошо изученных белковых компонентов этих рибонуклеопротеинов относится белок Аргонавт-2 (Ago2). Часто для выделения этих комплексов применяют метод иммунопреципитации — осаждение специфическими антителами. Мы сравнили эффективность трех вариантов коиммунопреципитации из плазмы крови микроРНК с белком Ago2. В первом варианте aнти-Ago2-aнтитeлa вносили в плазму, а затем добавляли белок А-сефарозу (БА-сефарозу) — для связывания комплексов микроРНК/Ago2/aнтитeлo. Во втором варианте антитела сначала инкубировали с БА-сефарозой, которую затем вносили в плазму крови. В третьем варианте, в отличие от второго, после сорбции Ago2-cпeцифичecкиx антител на БА-сефа-розе проводили дополнительную операцию — блокировку неспецифическими антителами. Эффективность коиммунопреципитации оценивали посоотношению уровней следующих микроРНК: miR-16-5p, miR-21-5p и miR-144-Зр — в преципитатах с антителами против Ago2 и с контрольными кроличьими антителами. Для miR-16-5p эффективными оказались все три варианта коиммунопреципитации, для miR-21-5p — только вариант 2, а для miR-144-Зр — ни один из протоколов. Таким образом, при коиммунопреципитации микроРНК и белка Ago2 из плазмы следует учитывать, что для каждой конкретной микроРНК эффективность процесса может зависеть от последовательности добавления реагентов.