ИДЕНТИФИКАЦИЯ ДВУХ НОВЫХ ГЕНОВ-МИШЕНЕЙ р53 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОДИФИЦИРОВАННОГО МЕТОДА ИММУНОПРЕЦИПИТАЦИИ ХРОМАТИНА И ИНВЕРТИРОВАННОЙ П

摘要

С помощью модифицированного метода иммунопреципитации хроматина и инвертированной ПЦР идентифицировали локусы, непосредственно взаимодействующие с фактором транскрипции р.53. Клетки HeLa облучали, чтобы индуцировать в них ответ на повреждение ДНК, а затем последовательно проводили иммунопреципитацию хроматина с антителами к большой субъединице РНК-поли-меразы II и к р53. На иммунопреципитированной ДНК проводили инвертированнную ПЦР с вырожденными праймерами к участку связывания р53, и фрагменты, содержащие предполагаемые гены-мишени р53, клонировали и секвенировали. Идентифицировали две нуклеотидные последовательности, содержащие участок связывания р53, близкий к консенсусному, иучастки связывания основных компонентов аппарата транскрипции, в том числе РНК-полимеразы II и фактора Spl. В опытах по котрансфекции клеток HeLa векторами, содержащими эти последовательности в кассете с репор-терными генами, и вектором, экспрессирующимр.53, показана стимуляция транскрипции репортер-ного гена. Применение описанного метода может способствовать идентификации генов-мишеней различных факторов транскрипции.