ВЛИЯНИЕ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА И ЛАКТОФЕРРИНА НА ХЛОРИРУЮЩУЮ АКТИВНОСТЬ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ МИЕЛОПЕРОКСИДАЗЫ. ИЗУЧЕНИЕ МЕТОДОМ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ

摘要

Методом хемилюминесценции люминола изучена хлорирующая активность миелопероксидазы и влияние на нее церулоплазмина и лактоферрина в составе комплексов миелопероксидаза-церулоплазмин и миелопероксидаза-церулоплазмин-лактоферрин. Впервые показано: добавление Н2О2 в систему "миелопероксидаза+СГ+люминол" сопровождается быстрой вспышкой хемилюминесценции: интенсивность вспышки резко снижается в отсутствиемиелопероксидазы или СГ; ингибитор миелопероксидазы - NaN_3, перехватчики HOCI - таурин или метионин, а также субстрат пероксидазного цикла миелопероксидаза - гваякол предотвращают свечение. Сделано заключение, что наблюдаемая хеминесценция обусловлена функционированием цикла галогенирования миелопероксидазы, а регистрируемая светосумма является мерой хлорирующей активности фермента. Тремя независимыми методами (хемилюминесценция, определение хлорирующей активности миелопероксидазы с помощью таурина, а также измерение ее пероксидазной активности) показано, что церулоплазмин ингибирует функцию миелопероксидазы, в то время как лактоферрин не оказывает влияния на активность миелопероксидазы. Будучи встроенным в тройной комплекс миелопероксидаза-церулоплазмин-лактоферрин, лактоферрин не препятствует ингибирующему эффекту церулоплазмина в отношении миелопероксидазы. Важно отметить, что ингибирующий эффект церулоплазмина в отношении хлорирующей ипероксидазной активности миелопероксидазы, зарегистрированный традиционными методами, проявляется лишь при весьма значительном избытке церулоплазмина по отношению к миелопероксидазе, тогда как метод хемилюминесценции позволяет выявить ингибирование миелопероксидазы при малых стехиометрических соотношениях белков, которые реально имеют место в комплексах миелопероксидаза-церулоплазмин и миелопероксида-за-церулоплазмин-лактоферрин. Показано также, что церулоплазмин тем эффективнее ингибирует пероксидазную активность миелопероксидазы,чем большие молекулярные размеры имеет субстрат. Таким образом, ингибирующий эффект церулоплазмина на уровне комплекса миелопероксидаза-церулоплазмин связан со стерическими препятствиями для связывания субстратов миелопероксидазы, возникающими за счет белок-белковых взаимодействий.