ТРЕХМЕРНАЯ СТРУКТУРА МУТАНТА КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ Т ИЗ Thermoactinomyces vulgaris с ИМПЛАНТИРОВАННЫМ S1' -СУБСАЙТОМ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ КАРБОКСИПЕПТИДАЗЫ В В КОМПЛЕКСЕ С АНАЛОГОМ ПРОДУКТА

摘要

Мутант бактериальной карбоксипептидазы T из Thermoactinomyces vulgaris (КПТ5) с заменами аминокислотных остатков в сорбционном S1'-участке активного центра на остатки, соответствующие S1'-участку панкреатической карбоксипептидазы В (Gly215Ser, AJa251Gly, Thr257Ala, Asp260Gly, Thr262Asp), закристаллизован в комплексе с N-BOC-L-Leu, который занимает Sl-сайт активного центра и является аналогом продукта реакции. Дифракционный набор собран от кристалла КПТ5 на синхротроне SPring-8. Пространственная структура КПТ5 установлена при разрешении 1.40 ? и уточнена до Rfact = 13.6%, Rfree = 12.5%. Связывание N-BOC-L-Leu с Sl-сайтом КПТ5 приводит к конформационным изменениям в белке, затрагивающим главным образом Cα-атомы пяти остатков подвижной петли, расположенной на границе S1- и S1'-сайтов, и боковые группы остатков Туг255 и Leu254, участвующих в индуцированном соответствии. Кроме того, конформационные изменения затрагивают аминокислотные остатки активного центра Glu277 и Asp262 и боковые группы остатков, расположенных на поверхности молекулы. Наблюдаемые изменения отличаются от конформационных изменений, происходящих при связывании N-BOC-L-Leu с КПТ дикого типа, что