ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФЕРМЕНТОВ РЕПАРАЦИИ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ДНК-МАТРИЦ ПРИ ПЦР-АМПЛИФИКАЦИИ ДЕГРАДИРОВАННОЙ ДНК

摘要

Повреждение ДНК-матриц представляет собой проблему при ПЦР-амплификации сильно деградированных образцов, которые включают древние ДНК,объекты судебно-экспертной практики и пищевые продукты глубокой переработки. Живые организмы обладают набором ферментов репарации, исправляющих повреждения в ДНК. В работе созданы и охарактеризованы модельные системы деградированной высокомолекулярной ДНК с преобладанием различных типов повреждений. Показано, что эффективность ПЦР резко снижается при апуринизации и окислении модельной плазмидной ДНК-матрицы. Определен состав ферментов, способных осуществлять полный цикл эксцизионной репарации отдельных повреждений. После обработки поврежденных модельных субстратов этим набором ферментов эффективность ПЦР возрастала по сравнению с эффективностью ПЦР образца, не подвергавшегося репарации.