ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ МЫШИНОЙ КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ГЕНАМИ РЕЦЕПТОРА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ (ELR1) И ЦИКЛИНА Т1 (еСТ1) ЛОШАДИ

摘要

Сложность патогенеза и недостаточная изученность вируса инфекционной анемии лошадей (ИНАН) обусловливают необходимость изыскания адекватной лабораторной модели для изучения инфекционного процесса и иммунного ответа. Одним из способов решения данного вопроса является получение культур клеток с заданными свойствами посредством генетической трансформации. Целью настоящей работы было получение мышиных эмбриональных фибробластов с генами рецептора вируса инфекционной анемии (ELR1) и циклина Tl (еСТ1) лошади. Для этого в клетки вводили кальций-фосфатным методом плазмиды pcDNA3.1-ELRl и pcDNA3.1-cycTl, содержащие нуклеотидные последовательности целевых генов. Используя селекцию клеток на генетицине, было получено 8 стабильных генетически-трансформированных клонов клеток STO с фенотипом [ELRleCTlneo]+. Частота генетической трансформацииSTO составляла 2,8x10-5. Встраивание генов в геном клеток выявляли в ПЦР с геноспецифическими праймерами с последующим нуклеотидным секвенированием, используя в качестве матрицы ДНК, выделенную из клеток. Экспрессия генов ELR1 и еСТ1 лошади в мышиных фибробластах была подтверждена на уровне транскрипции по наличию мРНК целевых генов в реакции ОТ-ПЦР. Полученная стабильная клеточная линия депонирована в коллекцию перевиваемых соматических культур сельскохозяйственных и промысловых животных Федерального научного центра-Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии.