分子生物学的手法による歯周病原性細菌の検出．定量系の確立と口腔内細菌叢の多様性解析に関する研究

摘要

歯周疾患と口腔内細菌叢に関する研究では　 培養可能な口腔内細菌のみに着目し．て.研究が行われ　 口腔内細菌叢の全容解明と疾患という観点からの研究は　 ほとhと行われていないのが現状である。 本研究では　 まず　 ヒトロ腔スピロへータの－種であるTreponema socranskiiのPCR法による迅速な検出、同定系を確立した。 つぎに世界に先駆けてリア方レタイムPCR法を利用して前述のT. socranskiiを含む代表的な歯周病原性細菌（Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis（旧名 Bacteroides forsythus）およびTreponema denticola）5種の迅速な検出、定量系を確立した。 一方，16S rRNA遺伝子クロ一ンライブラリ法によって，歯周病患者の口腔内は　 代表的な歯周病原性細菌が生息するとともに　 歯周疾患に関連している未分類の（培養困難な）偏性嫌気性菌の生息しやすい環境にな．ってし、ることを明らかにした。 また　 培養困難であると考えられるファイロタイプを標的として　PCR法による検出を試みた結果　 特定の1種が歯周疾患と関連性があることを明らかにした。 さらに　 歯周疾患と口腔内細菌叢に関する研究の初めての試みとして　 T-RFLP （terminal restriction fragment length polymorphism法を応用して　口腔内細菌叢の迅速な解析法を確立した。