ЭКСТРАКЦИЯ ГИСТОНА Н1 И ДЕКОНДЕНСАЦИЯ ЯДЕРНОГО ХРОМАТИНА С РАЗНЫМИ MG-ЗАВИСИМЫМИ УРОВНЯМИ ОРГАНИЗАЦИИ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ПОЛИГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ И ДИСТАМИЦИНА

摘要

В условиях низкой ионной силы (20-25 мМ) и концентрации Mg~(2+) от 2 до 5 мМ хроматин в ядрах печени крысы имеет конденсированную структуру (глобулы 100-200 нм) и дает одинаковый сигнал КД (320-340 нм) при взаимодействии с антибиотиком дистамицином А (ДМ). Снижение концентрации Mg~(2+) до 1 мМ приводит к деконденсации хроматина до структур 30 нм и увеличению сигнала КД. Поли-(Ь)-глутаминовая кислота (ПГ) при ПГ/ДНК = 6 в присутствии 5 мМ Mg~(2+) экстрагирует только восьмую часть ядерного гистона Н1, оставляя структуру хроматина конденсированной. Удаление одной четверти Н1 при 3 мМ Mg~(2+) приводит к деконденсации хроматина до фибрилл 30 нм. Экстракция около половины гистона Н1 в среде с [Mg~(2+)] < 2 мМ разворачивает хроматин до нуклеосомного уровня. Деконденсация под действием ПГ приводит к значительному увеличению сигнала КД. Основная экстракция Н1 происходит за 1-2 мин, но при всех концентрациях Mg~(2+) выявляется более медленно экстрагируемая с помощью ПГ фракция Н1, составляющая 5-7% ядерного Н1. Из оставшегося в ядре гистона Н1 около 25% может быть экстрагировано ПГ в присутствии насыщающей концентрации ДМ (ДМ/ДНК = 0,1). Выход Н1 существенно зависит от концентрации ПГ. Однако даже при высоких соотношениях ПГ/ДНК = 30 и ДМ/ДНК = 0,1 из ядра не удается удалить 5-10% гистона Н1. Деконденсация хроматина в ядре не всегда пропорциональна экстракции гистона Н1 и ослабляется в присутствии положительно заряженного ДМ или больших концентраций ПГ. Наши результаты показывают, что взаимодействие ДМ с хроматином зависит, прежде всего, от уровня его упаковки, а действие ПГ - от концентрации Mg~(2+), поддерживающего данный уровень.