Изучение хитинолитического комплекса холерного вибриона сероварианта O139

摘要

Исследована хитинолитическая активность у 18 штаммов холерных вибрионов сероварианта О139, выделенных из клинических образцов и проб воды открытых водоемов. Все штаммы росли на минимальных средах с добавлением хитина или N-ацетил-D-глюкозамина. Удельная активность хитиназы составляла 10-600 мкг N-ацетилглюкозамина/мг белка. С помощью колоночной хроматографии получен очищенный препарат фермента. Проведен компьютерный анализ 10 генов хитинолитического каскада Vibrio cholerae eltor 16961 и сконструированы праймеры для их тестирования в ПЦР. Оказалось, что если клинические штаммы содержат все исследованные гены (для 6 ферментов), то у водных штаммов отмечено отсутствие половины из них, в том числе гена VC1952 (внеклеточной хитиназы ChiA с молекулярной массой 88,7 кДа). Указанные потери не помешали водным штаммам проявлять довольно высокую хитинолитическую активность, возможно, за счет компенсаторной функции других генов. Обнаруженные спонтанные мутанты в генах хитинолитического комплекса могут быть полезными при изучении экспрессии и регуляции генов, участвующих в утилизации хитина, а также прикрепления вибрионов к хитиновым поверхностям и колонизации субстрата.