МОЛЕКУЛЯРНОЕ КЛОНИРОВАНИЕ И ПАТТЕРНЫ ЭКСПРЕССИИ ДВУХ ГЕНОВ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ а ОБЫКНОВЕННОГО КАРАСЯ (Carassius carassius)

摘要

Фактор некроза опухолей (TNF); мощный цитокин, вырабатываемый при воспалении. В представленной работе клонированы и секвенированы два гена TNF-a; TNFa-l и TNFa-2 обыкновенного карася Carassius carassius. кДНК TNFa-l состоит из 720 п.н. и содержит открытую рамку считывания из 699 п.н., кодирующую белок из 232 аминокислотных остатков, а кДНК TNFa-2 длиной 793 п.н. содержит открытую рамку считывания из 687 п.н., которая кодирует белок из 228 аминокислотных остатков. Гены обоих белков состоят из четырех экзонов и трех интронов, сходных с экзонами и нитронами других известных генов TNF-a. Аминокислотные последовательности IN Fa-1 и TNFa-2 обыкновенного карася наиболее сходны с TNFa обыкновенного карпа и золотой рыбки, наименее; с TNF-a камбалы и человека. Филогенетический анализ группирует TNFa-l и TNFa-2 обыкновенного карася с TNF других карповых, наиболее близкими из которых оказываются TNFa-l и TNFa-2 золотой рыбки и обыкновенного карпа. С использованием ПЦР в реальном времени показано, что TNFa-l и TNFa-2 конститутивно экспрессируются на высоком уровне в семи изученных тканях обыкновенного карася. Показано, что уровень мРНК TNFa-l в печени и почках значительно выше уровня TNFa-2, тогда как в мышцах наблюдается обратная картина. Уровень экспрессии обоих генов во всех тканях возрастал при заражении рыб Aeromonas hydrophila BSK-10. Через 6 ч после заражения экспрессия TNFa-l значительно повышалась в мышцах, коже и печени, а TNFa-2; в мышцах и жабрах. Уровень экспрессии гена TNFa-l был при этом намного выше, чем TNFa-2. Через 12 ч экспрессия начинает снижаться и к 24 ч становится существенно ниже. Эти результаты означают, что мРНК TNFa-l и TNFa-2 по-разному распределены в тканях, а их белковые продукты участвуют в иммунном ответе на бактериальные инфекции.