ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ TNF-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ ОРТОПОКСВИРУСОВ В КЛЕТКАХ НАСЕКОМЫХ И ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ РЕКОМБИНАНТНЫХ БЕЛКОВ

摘要

Фрагменты ДНК, содержащие гены TNF-связывающих белков (CrmB) вирусов натуральной оспы (VARV), оспы обезьян (MPXV) и оспы коров (CPXV), получали с помощью ПЦР из вирусных геномов и экспрессировали в составе бакуловирусной ДНК в клетках насекомых линии Sf21. Свойства полученных рекомбинантных белков VARV-CrmB, MPXV-CrmB и CPXV-CrmB исследовали физико-химическими и иммунохимическими методами. Методом твердофазного иммуноферментного анализа показано, что вирусные белки ингибируют связывание hTNF с поликлональными антителами к нему, и эффективность этого ингибирования уменьшается в ряду VARV-CrmB > CPXV-CrmB > MPXV-CrmB. Биологическую активность препаратов рекомбинантных белков изучали по их способности нейтрализовать цитотоксические эффекты гетерологичных TNF на культуре L929 мышиных фибробластов. Показано, что рекомбинантные СппВ видоспецифически нейтрализуют цитотоксическое действие h-, m- или rTNF. Также показано, что эффективность ингибирования цитотоксического действия hTNF рекомбинантным белком VARV-CrmB in vitro превышает аналогичный эффект поликлональных антител к hTNF. Обсуждаются перспективы разработки лекарственных средств новогопоколения для анти-ТМР-терапии на основе СггпВ-подобных белков ортопоксвирусов.