日本人結節性硬化症患者10人のTSC遺伝子診断:臨床応用のための系統的遺伝子変異解析法の開発と検出感度の検定

摘要

結節性硬化症は,脂,皮膚,腎臓,心臓を中心に全身のあらゆる臓署別こ過誤膿を形成する常染色体優性退伝病である.疾患者任遺伝子TSC2, TSC2が同定され既に様々な遺伝子変異が報告されているが,変異のホットスポットがない,微細変異から大欠失まで変異のバリエーションに富む,体細胞モザイク症例が少なからず存在する,などの理由により現実には遺伝子診断は難航する.また変異スクリーニングに多用される1本鎖高次構造多型(single - strand confermational polymorphism,sscp)法, Hetero duplex (HD)法の変異検出感度に関しても不明である.本研究では日本人結節性硬化症患者10名を対像にSSCP法, HD法,ダイレクトシークエンス法, Long PCR法,定量的サザンプロット法を組み合わせた系統的アルゴリズムに従った遺伝子儲析を行った.その結果, 2例でTSCl変異(スプライス変異,大欠失), 6例でTSC2変異(大欠失,スプライス変異,ミスセンス変異,フームシフト変異3例)が同定された. TSC1の大欠失はモザイクであり, TSC2のミスセンス変異は腫瘍のみに認められた.一方で.,対象患者の全てのTSC翻訳領域エクソンの塩基配列を決定し, SSCP法, HD法の感度検定を行った.変異検出率は各々6/14 (43%), 5/14 (36%)であったが,互いに相補的な傾向が見られ両者を合わせた感度は9/14 (64%)に上昇した"臨床症状と遺伝子変異との相関ではTSO1変異を持つ症例とTSC2モザイク例で明らかに軽症の傾向がみられた"今回の結果と過去の報告より本邦においてもTSC変異のホットスポットは存在せず,エクソン毎のPCRをべースとしたスクリーニング法では検出し得ない大欠失も存在するため, DNA診断の際には各種検査法を合理的に配置した系統的な解析が必須であると結論された.