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【24h】

Variabilidade do gene da proteína capsidial de três espécies virais que infectam videiras no Brasil

机译:感染巴西葡萄的三种病毒物种衣壳蛋白基因的变异性

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摘要

O objetivo deste trabalho foi avaliar a variabilidade de três vírus (Rupestris stem pitting-associated virus - RSPaV, Grapevine leafroll-associated vírus 2 - GLRaV-2 e Grapevine fanleaf virus - GFLV) que infectam videiras no Brasil, através da caracterizacao molecular do gene da proteína capsidial (CP). Foram amplificados fragmentos que compreendem os genes completos da CP de nove isolados de RSPaV (780 pb), seis de GLRaV-2 (597 pb) e três de GFLV (1515 pb) por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos específicos para cada espécie virai. Os DNAs amplificados foram clonados e sequenciados. Os isolados de RSPaV foram reunidos em quatro grupos pela análise filogenética das sequências obtidas com valores de identidade de nucleotídeos (nt) que variaram de 81 a 99%. Para GLRaV-2, dois grupos foram definidos a partir das sequências de nt, com valores de identidade que variaram de 88 a 99% e, para GFLV, foram definidos dois grupos, com valores de identidade de nt que variaram de 89 a 98%. Os diferentes isolados das três espécies virais estudadas também foram detectados utilizando-se hibridizacao com sondas nao-radioativas, marcadas com digoxigenina, possibilitando identificar de forma inequívoca as amostras infectadas, independentemente dos isolados virais empregados para síntese das sondas.
机译:这项工作的目的是通过对该基因的分子鉴定,评估三种病毒的变异性(Rupestris茎点相关病毒-RSPaV,葡萄叶卷相关病毒2-GLRaV-2和葡萄扇叶病毒-GFLV)。衣壳蛋白(CP)。通过RT-PCR扩增包含RSPaV的九种分离株(780 bp),GLRaV-2的六种分离株(597 bp)和GFLV(1515 bp)的三种CP的完整CP基因的片段,每个物种使用特定的寡核苷酸病毒式的克隆扩增的DNA并测序。通过系统发育分析获得的序列的核苷酸同一性(nt)值介于81%至99%之间,将RSPaV分离株分为四类。对于GLRaV-2,从nt序列中定义了两组,同一性值介于88%至99%之间;对于GFLV,定义了两组,其nt同一性值介于89%至98%之间。使用与非放射性探针杂交的地高辛配基,也可以检测出所研究的三种病毒种类的不同分离株,从而可以毫无疑问地鉴定出感染的样品,而与用于合成探针的病毒分离株无关。

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