最適なラット卵子の活性化方法の確立

摘要

卵子の活性化は核移植技術において重要な過程であり、動物種によって最適な方法は異なる。 本研究は、ラット卵子の最適な活性化条件の決定を目的とした。 未成熟Wistar Imamichi (WI)系およびSprague Dawley (SD)系ラット卵子を電気刺激と6-dimethylaminopurine (DMAP)で活性化した結果、WI系ラットで有意に高い発生率を得た。 このためWI系ラット卵子を用いて、排卵時間、体外培養時間、異なる活性化方法および活性化培地、の浸透圧がラット卵子の活性化と発生に及ぼす影響を調べた。 hCG投与後16-24時間で採卵した卵子を電気刺激とDMAPで活性化した結果、18, 20時間で採卵した卵子は有意に高い胚盤胞への発生率を示した。 卵子を採卵後0-6時間培養した後、電気刺激とDMAPで活性化し発生率を比較した結果、2-6時間培養した卵子で発生率が有意に低下した。 電気刺激とDMAPおよびイオノマイシンとDMAPの異なる活性化方法間で発生率に違いは見られなかった。 イオノマイシンとDMAPで培地の浸透圧を246および310 mOsMに調整し、活性化後の発生率を比較した結果、浸透圧をどちらも246 mOsMにした区で有意に高い発生率が得られた。 以上より、ラット卵子の活性化には浸透圧を246 mOsMにしたイオノマイシンとDMAPの複合処理が有効であることが示された。