Wydajna ekstrakcja bialek transblonowych z zastosowaniem zestawu ProteoExtract~R Transmembrane Protein Extraction Kit

摘要

Do solubilizacji bialek blonowych, niezbednej miedzy innymi w procedurze ich oczyszczania, stosowane sa najczesciej jonowe lub niejonowe detergenty. Zastosowanie detergentow moze jednak niekorzystnie wplywac na strukture bialek, co uniemozliwia ich dalsze badania funkcjonalne. Ponadto, detergenty sa czesto malo skuteczne, szczegolnie do wydajnej solubilizacji bialek zawierajacych powtarzajace sie domeny transblonowe. Najnowszy zestaw ProteoExtract# Transmembrane Protein Extraction Kit (TM-PEK), oferowany przez firme Merck, zawiera w swoim skladzie odczynniki pozbawione detergentow. Zapewnia to lagodna i wydajna ekstrakcje bialek zawierajacych nawet siedem domen transblonowych, takich jak receptory sprzezone z bialkami G (GPCR), np. bialka Frizzled-4 i CELSR-3 z linii komorek ssakow. Wyizolowane z zastosowaniem zestawu TM-PEK frakcje wzbogacone w bialka transblonowe, moga byc uzywane w testach enzymatycznych. Ich charakterystyke mozna prowadzic z zastosowaniem natywnej elektroforezy zelowej, 1- i 2-D elektroforezy w zelach poliakryloamidowych w obecnosci siarczanu dodecylu (SDS-PAGE), spektrometrii mas, metody Western blotting, immunoprecypitacji i ELISA. W porownaniu z innymi metodami, ekstrakcja bialek z zastosowaniem zestawu TM-PEK nie wymaga sonikacji, dlugiego wytrzasania, ultrawirowania i inkubacji probek w wyzszych temperaturach.