ISOLATION, IDENTIFICATION AND ANTIMICROBIAL SUSCEPTIBILITY OF BRUCELLA BLOOD CULTURE ISOLATES

摘要

Isolation of slowly growing and fastidious Brucella spp strains from clinical specimens is difficult, because of varying factors, including species specificities, stadium of disease, and previous antibiotic treatment of the patients. The use of automated blood culture systems has overcome some cultivation problems. The automated identification system such as VITEK 2 compact allows more precise identification, as well. Aim: To present our own experience in the isolation of Brucella species from blood cultures, by the Bact/Alert automated system, identification by the VITEK 2 compact system and antimicrobial susceptibility of isolated strains. Material and Methods: Patients from various regions of Macedonia hospitalized in the University Infectious Diseases and Febrile Condition Clinic in Skopje. FAN blood culture bottles (aerobic and anaerobic) of the Bact/Alert system were used, inoculated with 5-10 ml of blood, incubated under continuous agitation and monitored for up to 5 days or until they became positive (in our cases for 2-3 days). Confirmations of all isolates were made by the VITEK 2 automated system on GN cards. Results: During a period of three years, 113 blood cultures from patients with diagnosis of brucellosis hospitalized at the above-mentioned clinic were examined. A total of 16 blood cultures from different patients were positive (14.2%), showing Gram negative bacilli, oxidase positive small colonies on Columbia agar media. The isolates were identified as four biochemically different types of B. mellitensis, mainly within 8 hours. Susceptibility testing by the disk diffusion method on Muller Hinton agar showed sensitivity of all strains to cephalosporin, tetracycline, aminoglycoside and quinolone antibiotic groups. Conclusion: With the BacT/Alert system Brucella spp. were isolated in 14.2% of suspected cases of brucellosis. Isolation was done within 2-3 days. Only B. meliten- sis from the Brucella genus could be identified by the VITEK 2 system and some biochemical differences could be detected. The VITEK 2 system is not able to determine the susceptibility of B. melitensis. The Disk-diffusion method used in this study showed sensitivity to all tested antibiotics, although not recommended by CLSI for the Brucella genus.%Апстракт: Изолацијата на бактериите од родот Brucella од кли-нички примероци е тешка и завися од повеќе фактори кои вклучуваат: спе-цифичност на родот (бавно растечки и чувствителни бактерии), различните стадиуми на болеста која ја предизвикуваат како и од претходниот анти-биотски третман на пациентите. Со употреба на автоматизирани системи за обработка на хемокултури се надминуваат голем број проблеми поврзани со нивната култивација и изолација. Автоматизираните апарати, како што е ВИТЕК 2 системот, овозможуваат нивна прецизна идентификација. Цел: да се прикаже нашето искуство со изолацијата на Brucella spp. од хемокултури со помош на автоматизираниот Бакт/Алерт (Bact/'Alert) систем и идентификацијата со ВИТЕК 2 компакт системот. Маwерujал u меwо∂u: Испитани се хемокултури од пациенти кои по-текнуваат од различии региони на Македонија, хоспитализирани на Универ-зитетската клиника за инфективни болести и фебрилни состојби во Скопје. Инокулираните FAN аеробни и анаеробни шишиња со 5-10 мл крв од паци-ентот, инкубирани се во Bact/Alert апаратот, со континуирано мониторирање и агитирање, во период од 5 дена или сe додека да станат позитивни (во на-шиот случај за 2-3 дена). Потврдата на сите изолати е направена со ВИТЕК 2 системот со помош на ГН (GN) картички. Осетливоста е испита на со диск дифузионен метод на Милер-Хинтонов агар. Резулwаwu: Во период од три години испитани се 113 хемокултури од пациенти со дијагноза бруцелоза. Позитивни беа вкупно 16 хемокултури од различии пациенти. Грам-негативни бацили во препаратот и ситни окси-даза позитивни колонии пораснати на Колумбија агар беа идентифицирани со ВИТЕК 2 системот за 8 часа како Brucella melitensis и групирани во четири биохемиски типови. Сите соеви покажаа осетливост кон тестираните анти-биотски групи: цефалоспорини, тетрациклини, аминогликозиди и кинолони. Заклучок: Бакт/Алерт и ВИТЕК 2 компакт апаратите се покажаа успешни во дијагностицирањето на суспектни случаи на бруцелоза кај 14,2% од пациентите. Изолацијата на соевите траеше само 2-3 дена. ВИТЕК 2 системот може да идентификува само Brucella melitensis. Со него можат да бидат детектирани неколку биохемиски различии типови. ВИТЕК 2 системот не е способен да ја детерминира осетливоста на соевите на Brucella melitensis. Во оваа студија осетливоста е испитана со диск дифузиониот метод и добиените резултати упатуваат на осетливост на соевите кон сите групи антибиотици.