神經營養因子對混合培養鼠視網膜神經節細胞的影響

摘要

目的觀察兩種神經營養因子:腦源性神經營養因子BDNF和碱性成纤維生長因子bFGF對混合培養鼠視網膜神經節細胞(retinal ganglion cells,RGCs)的影響,并節選出其有效濃度.方法采用胰酶消化法將12衹生後2～3天的Sprague-Dawley(SD)乳鼠視網膜制成細胞悬液,接種于鼠尾原包被的96孔培養板(5×104個細胞/孔).分别加入各種濃度梯度的BDNF和bFGF,在37°C、5%CO2恒温培養箱中培養,于1、3、5天,用MTT微量自動比色法測量存活細胞的吸光度A值.用Thy-l抗體、NSE抗體和GFAP抗體進行細胞免疫化學檢查以鍳定RGCs.結果培養在鼠尾原上的細胞生長良好,大部分伸出突起.培養1天、3天,各種濃度的BDNF和bFGF實驗組吸光度A值舆對照組比較均具有顯著性差异(p<0.01,p<0.05);培養5天,BDNF(40ng/ml、50ng/ml)、bFGF(15ng/ml)和BDNF+bFGF組吸光度A值高于對照組,具有顯著性差异(P＜0.01,P＜0.05).結論各種濃度的BDNF和bFGF均能促進鼠RGCs在體外的存活,BDNF具有濃度依賴性,BDNF的作用優于bFGF;同時應用BDNF和bFGF無叠加作用.