Epidemiology, molecular characterization and resistance to antimicrobials of Escherichia coli isolated from South-Brazilian pig herds

摘要

Colibacillosis is an enteric disease with a major impact to the swine industry and is caused by enterotoxigenic strains of Escherichia coli. Forty clinical isolates from pigs with diarrhea and 13 environmental isolates were analysed regarding their genotypic profile, genetic relationship and antibiotic resistance. The most prevalent gene was Stb, identified in 50% of the isolates from clinical cases, and Sta and Lt were detected in 35% of them. Among the adesine factors investigated, F18 was found in 27.5% of the E. coli strains. The ERIC-PCR technique used for epidemiological characterization of the isolates did not show the expected discriminatory power. However, the test allowed separation of the isolates in groups, but did not evidence groups related to virulence factors. In the susceptibility test, the highest values for resistance were to tetracycline, in 88.6%. The index of multiple resistance to antimicrobials varied from 0 to 0.69. Index terms: Escherichia coli, genotypic profile, resistance.     INTRODUÇÃO A colibacilose é a enfermidade entérica de maior impacto na suinocultura, sendo ocasionada por cepas enterotoxigênicas de Escherichia coli (ETEC). Para o desenvolvimento da doença as bactérias aderem-se à mucosa intestinal e produzem uma ou mais enterotoxinas (Lt, Sta e Stb), que levam ao desenvolvimento de diarréia e desidratação, podendo resultar na morte dos animais. Os tipos de adesinas comumente associados com a doença são K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6) e F41 (Dean-Nystrom et al. 1997, Bertschinger & Fairbrother 1999). Somente o isolamento de E. coli a partir de amostras de fezes e conteúdo intestinal não é suficiente para o diagnóstico da enfermidade. Nesse sentido, as técnicas de soroaglutinação, ELISA, imunofluorescência e PCR (genotipificação) podem ser empregadas para a biotipificação de adesinas e toxinas (Wills 2000). A técnica de ERIC (Enterobacterial repetitive intergenic consensus) é baseada na análise de seqüências cromossomais repetidas, que tem sido usada para a caracterização clonal de diferentes espécies de enterobactérias e para o estudo da relação genética entre isolados. Entretanto, o ERIC-PCR tem sido utilizado com êxito para a diferenciação clonal de cepas de Shigella sonnei, Salmonella typhimurium e Vibrio cholerae (Versalovic et al. 1991, Rivera et al. 1995), e no estudo de variabilidade genética de E. coli patogênicas para aves (Silveira et al. 2002). O uso de fármacos antimicrobianos para o controle e profilaxia de enfermidades bacterianas em suínos é amplamente difundido. Porém, essa prática está associada à presença de resíduos de antibióticos nos alimentos de origem animal e seleção de bactérias resistentes, trazendo sérios riscos à saúde pública (Dunlop et al. 1998). Os objetivos deste estudo foram investigar o perfil genotípico através da PCR e o índice de resistência em amostras de E. coli provenientes de isolados clínicos e ambientais, além de caracterizar epidemiologicamente os isolados de E. coli, determinando uma relação genética entre os isolados pelo uso do ERIC-PCR e da genotipificação.   MATERIAL E MÉTODOS Cepas bacterianas Quarenta isolados clínicos de suínos provenientes de granjas da região sul do Brasil e 13 isolados ambientais foram utilizados neste trabalho. Os isolados clínicos foram obtidos de fezes, intestino delgado e fígado de suínos com diarréia, remetidos ao laboratório de Bacteriologia da UFSM. Os isolados ambientais foram obtidos de duas amostras de água do bebedouro, uma da esterqueira, três de fezes de animais sadios, um de inseto, um de swab da parede da granja, três de swabs do piso e duas da ração ofertada aos animais. As amostras ambientais foram coletadas em uma granja na cidade de Coronel Freitas, Santa Catarina. Os isolados foram semeados em meios de cultura ágar MacCon